两种X染色质检查方法的比较(一).doc

1、两种染色质检查方法的比较(一)【论文关键词】方法；检测；性染色质；比较【论文摘要】目的：探讨改进检测 X 染色质的方法。方法：以在校学生的口腔黏膜细胞为材料，分别用石炭酸复红染液直接涂片法和吉姆萨染液扣染法显示 X 染色质。结果：石炭酸复红染液染色直接涂片法操作简单，用时短，阳性检测率低；吉姆萨染液扣染法操作稍复杂，用时稍长，阳性检出率高，但由于课堂时间限制，中职学生的课堂教学中不易推广。讨论：应用改进的人类性染色质检测方法，可以准确检出性染色质。中等职校医学生物学实验教学中一直沿用石炭酸复红直接涂片法（以下简称直接涂片法） ，阳性率不太理想，故近年借鉴改良后的吉姆萨染液扣染法（以下简称扣染法

2、） ，阳性率明显提高，现将两种方法比较如下。1 实验材料及方法11 材料：选择本校一年级汉族女生（1620 岁） 20 例，取其颊部口腔黏膜细胞为标本。1 1 1 染色液配制：石炭酸复红染液的配制，A 液：碱性复红(basicfuchsin)03g，95%酒精 10ml，B 液：石炭酸 50g、蒸馏水 95ml；将碱性复红在研钵中研磨后， 逐渐加入 95%酒精，继续研磨使其溶解，配成 A 液。石炭酸溶解于水中，配成B 液，混合 A 液及 B 液即成。通常可将此混合液稀释510 倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配1。112吉姆萨染液的配制：将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨 30m

3、in 以上，至看不见颗粒为止， 再将全部 (66ml)剩余甘油倒入，于 56温箱内保温2h。然后再加入甲醇 (66ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。临用时用pH6.8 的磷酸盐缓冲液稀释10倍。固定液 (甲醇 :冰醋酸 =3:1)，用时现配 2。113 实验所需其他器材：显微镜、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、吸管、牙签、染色缸、擦镜纸、吸水纸、离心机以及盐酸试剂等。12 方法121 石炭酸复红染色直接涂片法：用牙签在女性口腔黏膜颊部刮取上皮细胞，均匀涂布于(只能向一个方向涂抹，尽量避免细胞被破坏)载玻片中央部位。应当把细胞

4、核界限清楚的深层上皮细胞用作这些涂片。稍干后，放入 3:1 的甲醛、冰醋酸固定液中固定30min。固定的标本经水冲洗后，在石炭酸复红染液中染510min，再在 95乙醇中分色约半分钟，最后用中性树胶封片、镜检。122 吉姆萨扣染法：受检查者用清水漱口后，用牙签轻轻刮取两侧颊部内侧的黏膜，弃去第一次刮取到的黏膜细胞，在同一部位连续刮取数次，将刮取的细胞涮入装有生理盐水3ml 的刻度离心管中，以1000r/min 离心 10min，弃上清液，加入 1mol/L 盐酸 3ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，37解离 20min，以 1000r/min 离心 10min，弃上清液。加入新配制的卡诺

5、固定液（甲醇:冰醋酸， V:V=3:1）3ml，用吸管将细胞团轻轻打散， 制成悬液，室温下固定 10min，再次打散细胞团后，继续固定 20min，离心前将细胞打散，以 1000r/min 离心 10min，弃上清液，根据细胞多少加0.10.2ml 新配制的卡诺固定液，将细胞打散，制成悬液，用吸管取细胞悬液，滴于冰水浸过的载玻片上，自然晾干后染色、镜检。13 计数标准及方法： X 染色质位于核膜内缘，是核内惟一浓染的、轮廓清楚的小体，呈小山丘形、扁平形或三角形、圆形等。形态相似但不依附于核膜内缘的不计数，凡核膜缺损、染色过深或细胞上有杂质附着，细胞核重叠等均不做计数；低倍镜下找到细胞集中而又均匀分散的细胞群，油镜下计数100 个可计数细胞（可做为计数细胞的是细胞核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰。核质呈细网状或均匀的细颗粒状，无深染大颗粒及细菌污染），计算其中 X 染色质的阳性率。2 结果21 直接涂片法结果：制片时间短，约40min，大