紫外可见分光光度法在药品检验中的应用

1、紫夕卜_可见分光光度法在药品检验中的应用三、分光光度法的4原理紫外分光光度计五. 紫外_可见分光光度法在药检中应用分光光度法畏通过测定物质在某些特定波长列而成的称为光谱。光通常叫做可见光。波长范圈：400-760mn为可见光区波长范00: 200-4000!0为垛外光区吸收光谱：发射连续光谱的光濒3笊XT和餡 淫灯）发出的光K过遹明物质 （固体. 液体戒代体）后,一些波长的单色光成分择吸收，在尿来的连埃光谱上出现若干条睛罐 戒暗带，玩种光谱叫做吸收光谱。波长（符&为入）:Jti旨由一十波上的任；C离。草位K : nnio光子能亶与其传播频來和波长的关系:E=hv=h*C/X其中：E光子氐迁能量

2、h 郎克常数(6. 626196xl0-34J)v频率，毎秒发出波的數 目(单位:Hz)C光速(2997925xlOio cm/s)1/X液数由 上式可以* 出： 光子辘与频率成正比，与 波长成反比总畑卫岬“+已“杆“讣电子 氐迁： 分子枝吸收的光辂射澈发后加/由低能轧 冋时伴孚r分子的振动和转动腿级的凭化, 电子吸收光谱一般比校平缓，选择性不如红 外光 区，败炽外-可见光 眩主央用于定Jt分析 以及作为 物理常数的测定。1011吸光度 (A): 送光車的负対数值 P： A-logl/T- -logT12郎伯定律 (Lamberfs Law):当溶液浓Zfc不交 时，吸光度与港液的液层厚度成正

3、比。比耳定律(Beers Law):当溶液液层厚汝不變时吸光度与溶液的浓度成正比。比耳一ftp伯定体 (Beer -Lambert9s Law)吸光JX (A)与溶液的浓度(C)和光路长(L) 是成正比例的。即：A=ECL13I 紫外可见分光光度计15以获傅纯JX校亦的 单色光。样品地（吸收地）:玻璃吸收地仅這用于32 0nm決上波长的测定o 水品或熔谢石英吸收地可用于200nm以上波长的测定c常用 的是光路长度为1 cm的吸收池。检测器：16（2）吸光度的准确度:波长 (nm)235 （最小）257 （最大）313 （最小）350 （最大）吸收系数 （E%）124.5144.048.6106

4、.6许可范围123. 0-126. 0142. 8-146. 247. 0-50. 3105. 5-108. 518536. 2nm与637. 5nm的波长处打尖視的吸收 峰，可作丸波长校正用。17取在12UC干燥至恒査的基准:倚酸钾约 60mg, 梢密称龙，用0. 0O5mol/L砸酸溶液溶解 并稀释至1000ml, 在规龙6&波长处走吸光度 并计箕共吸收系数。试剂浓度 (g/ml)波长 (nm)透光率 (%)碘化钠1.002200.8亚硝酸钠5. 003400.8(3)杂散光的检査：按下农白勺试剂和浓度，酉己伟?J成水溶液， jSJciii石英吸”夂池,中，在规定的波长处涣J定 透光率，应

5、苻合表中的规定。193.紫外分光光度法对溶剂的要求：用IciiK英吸收池盛溶剂，以空化为空白，测 定其吸光度，涪剂和吸收池的吸光flCSL满足以卞 耍求：波长220nm-240nm241nnr-250nm 251nm-300nm 300nm以上吸光皮耍求不得粗过040 不俗粗过0. 20 不得越过010 不得粗过00520i 4.紫外分光光度法测定法：I 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批 - 溶剂为空白对照，釆用lcm的石英吸收池，在规定的吸 I 收峰波长2mn以内测试几个点、的吸光度，以核对供试 I 品的吸收峰波长是否准确.囁除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波 长2

6、mn以内；否則应考虑该试样的真伪.纯度以及仪 程器波长的准确性.琴应以吸光度最大的波长作为测定波长. 一般供试品溶液的吸光度读数，以在0. 3-0. 7之间的误 差较小.仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度， 否则测得的吸光度会偏低.狭缝宽度的选择，应以减 小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供 试品的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。 21I毛紫*可见分光光度法在药品 检验中的应用| 药興和超品标准中应用嬢9_可见分光法的项目*吸收系数.鉴别、颜色检査、纯中国药典2005年版中收载的甲苯Mt丁軀 和坡宴米松弄品种，均在性状项下测定其吸

7、收 系数。23一种手段，即绘編?J出药物的吸收光谱曲 线与标弓理化的数资料及药品标准中，一般只列出各化 合物JH大吸收（升时也列出JR小吸收）的波长 ttJto对于其*两个以上瑕大吸收的筠物可以 进一步筒化操作，无需费时作吸收光谱曲线， 只戛测出各垠大吸收波长处的吸收反，求出这 些吸收度的比值，测出它们相对tftJt的比值却 24 可。维生素B12的鉴别规定每lm 1中含维生素B1225Mg 的水溶液，照分光光度法测定，在278、361与 550nm的波长处有最大吸收。A361nm/A278nm应为.70-1. 88。A361nm/550nm应为315-3. 45.26若一种化合物对紫外光和可

8、见光区的某一 波段呈光学送明（即不吸收班几乎不吸收）, 1 而不纯杂质升吸收时，贝U该物质的生产精制 应当进行到规定浓长处的吸收系数降剧JR低 时为止。*些药物誠以此作为杂质限皮检查的依摒。歧外，有些药物的杂质是遇过比色 法与杂质对照品比校进行控制6&。检查肾上腺素中的酮体:取肾上腺素，加 0. lmol/L盐酸溶液，制成每1血1中含2mg的溶液, 照分光光度法，在310mn的波长处测定，吸光 度不得过0. 05。28节氟瘗嗪和氢氯瘗嗪等药物中，芳香第一胺的检查，均采用比色法。将样品用亚硝酸重氮化 后与二盐酸蔡乙二胺生成偶氮化合物，在518nm波长处测定吸光度，应不得超过规定限度。枸椽酸哌嗪和

9、磷酸哌嗪检查项下,根据第一胺 和氨与亚硝基铁鼠化钠在丙酮的存在下的碱性 溶液中呈黄色至红色的反应，釆用比色法，测 定600nm与520nm波长处的吸光度比值，以此 来控制药品中杂质伯朕和氨的含量。31葡萄糖注射液和葡萄糖氯化钠注射液中的杂质5理甲基糠醛，在284nm测定吸光度，控制杂 质的含量。如药典规定，1%葡萄糖溶液的吸 光度不得大于0.32,按5凳甲基糠醛的E1%lcni 为13()8计算，含5痉甲基糠醛应在0.00024% 以下。32碘解磷定注射液:分解产物的检查规定，用 O.lmol/L盐酸溶液将样品稀释制成每lml中含 0.01 mg的溶液，在294与262nm的波长处分别 测定吸

10、光度，A294/A262应不小于3.1.碘解磷定的01 moVL盐酸溶液在225和294nm 波长处有最大吸收，在262nm波长处有最小吸收 其顺式异构体及其水解产物毗唉:2-甲醛N甲碘物 同条件下在294nm波长处均无吸收，这些杂质在 262nni处有吸收，如有杂质存在会导致碘解磷定 溶液的A294/A262比值降低.33盐酸土宴素：杂质吸收度检查规定,本品 2mg/ml的盐酸甲醇溶液在430nm波长处的吸光 度不得过05。本品10mg/ml的盐酸甲醇溶液在 490nm波长处的吸光度不得过02.盐酸土霉素在酸性溶液(pH2.0 )中，最大吸 收为353nm,在上述所述波长和浓度条件下，盐 酸

11、土霉素几乎无吸收。34商典中含贅测九右法可分为:(1) 对照品比校法(2) 吸收系数法(3) 计界分光光度法(4) 比色法37测 定波长没几乎设黃玖收38应用范囲:单一成分商剂白勺测定。分配制 供试品濬液和对照品港液对照品溶液所含对照品的脣应为供试品溶液中 披测组分标示量的10% 以内。 所用溶剂.宾它试剂、操作方法和条件都应保计莽公式： Cs=Cr*As/ArCs：联试品溶液的浓JRAs:供试品溶液的吸光JSCCr：对照品溶液的浓度Ar:时照品溶液的吸光度40(2) 吸收系数法用单一成分药剂的测定。但其它成分在杭测组分的测定波长没有或几乎没有吸收* z(3)计养分光光度法联立方程式法双波长分

12、光光度法三波长分 光光反法系数俗卒法44计算公式：A=ECL以中国药典2000年版氯霉素含量测定为例：精密称取氯霉素0.1009g,置100ml量瓶中， 加乙醇10ml振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀, 精密量取2ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻 度，在278nm波长处测定吸光度为0.596,按氯 霉素(CmH12C12N2O5)吸收系数(E1%lcm)为 29X 计 算氯霉素含量。已知：A=0.596E=298L=1则：C=A/(E*L)=0.596/(298* 1 )%=0.002% 氯霉素含量43=0.002%* 100* 100/(0.1009*2)=99.1 %(4)比色法供试品本* 在紫外一可见光区没 k 强吸收, 威在朱外区虽有吸收，但为了进免干扰或提 离灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测龙盐酸可乐定片及注射液：在适宜的dH值条件 下，渙酚蓝溶液与盐酸可乐定定量结合成有色 络合物，用氯仿提取后，直接比色测定，对照 品同法操作，并计算含量。46醋酸泼尼松眼膏及醋酸氢化可的松软膏：縉醇类化合物在Ch上的a酮醇侧链(CHOHCO) 具有还原性。它能使氯化三苯四氮哇在碱性(氢氧化四甲基镂)条件下被还原为红色，在485nm的波长处测定。计其公戎:Cs=Cr*As/ArCs： 侯试品溶液的浓度As:供试品溶液的吸光度Cr：对照品溶