中药对耐甲氧西林葡萄球菌的体外敏感性研究

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减中药对耐甲氧西林葡萄球菌的体外敏感性研究（作者：单位：邮编：）作者：栾耀芳，吴国英，孔祥山，王军【摘要】 目的 对多重耐药的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS ）进行中 药体外敏感试验，观察其诸多改变对中药治疗作用的影响， 筛选有效 中药。方法 采用琼脂扩散法，以临床收集的 MRS 30株为实验组， 非耐甲氧西林的葡萄球菌30株为对照组进行体外敏感性研究，所选 中药通过水提、醇提法制备药液，观察各种中药的抑菌环直径。结果 所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为：半枝莲水提液、半枝莲醇提 液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白 头翁水提液、鱼腥草水提

2、液、白头翁醇提液、射干水提液。实验组与 对照组细菌的抑菌效果经统计学分析，P0.05,差异无显著性。结论 对 MRS弓I起的感染，在抗生素选择压力增大的情况下，中药可以成为 治疗的较好选择。【关键词】 中药；耐甲氧西林葡萄球菌；体外敏感性耐甲氧西林葡萄球菌（MRS ）通过合成分泌B -*基金项目：山东中医药管理局“十一五”计划项目（编号：2005-218）内酰胺酶及改变膜的渗透性、基因突变等方式，使自己呈现多重耐 药性。通常MRS不论其体外药敏试验结果如何，所有的青霉素类、 头孢菌素类、伕内酰胺类/伕内酰胺酶抑制剂均无临床疗效，并且绝大 多数对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素耐药，临床治疗起来非

3、常困 难。那么细菌的诸多改变是否影响中药的治疗作用呢？这一方面未曾 见有报道，为此我们选择了具有清热解毒、 清热燥湿作用的中药通过 水提与醇提的方法制备药液，对MRS进行了体外敏感性的对比研究， 并对有效中药进行筛选，现报告如下。1实验材料1.1中药选择 鱼腥草：三白草科植物蕺菜Horttuynia cordataThunb.的干燥地上部分，切段。射干：鸢尾科植物射干 Belamcanda chinensis （L.） DC.的干燥根茎，切片。蒲公英：菊科植物蒲公英 Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz. 、碱地蒲公英 T.sinicum Kitag. 或同属数种植物

4、的干燥全草，切段。半枝莲：唇形科植物半枝莲 Scutellaria barbata D.Do n 的干燥全草，切段。白头翁：毛茛科植物 白头翁Pulsatilla chinensis （Bge.） Regel的干燥根，切薄片。以上 药物均购自我院中药房。1.2实验菌株 来自本院门诊及病房临床标本中分离的葡萄球菌。 选择经鉴定为耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS ）菌株30株为实验组， 其中MRSA 8株，MRCNS 22株；非MRS菌株30株为对照组， 其中金黄色葡萄球菌17株，其他凝固酶阴性葡萄球菌13株。（仪器： 英国先德SENSITITRE全自动微生物鉴定仪，鉴定符合率95%以上。MRS鉴定采

5、用2004年NCCLS出版的药敏试验指南 M100 S14手册推荐的30头孢西丁纸片法。）2实验方法2.1中药制备2.1.1中药水提液 取中药鱼腥草、射干、蒲公英、半枝莲、白头翁各500g ,分别置提取容器中，加水适量，浸泡20min ,继续加水6 8倍（根据药物容积不同，加水量不同），加热煎煮提取2次（2h, 2h ）， 过滤去渣，合并2次提取液，慢火浓缩至 500ml左右（1g/ml ），灌 封，备用1。2.1.2中药醇提液 取中药鱼腥草、射干、半枝莲、白头翁各500g， 分别置提取容器中，加 65%乙醇适量，浸泡20min，继续加提取溶 剂68倍量，加热煎煮提取2次（2h, 2h ），过

6、滤去渣，合并2次滤 液，回收乙醇。慢火浓缩至500ml左右（1g/ml ），灌封，备用12.2菌液制备 挑取培养1824h的纯菌落，制成0.5麦氏单位， 浓度相当于（11.5）X108CFU/ml的菌悬液，备用。2.3操作以无菌棉棒蘸取菌悬液，均匀涂抹于M-H琼脂平板，稍倾，在平板上打56个直径6mm左右的孔，深度约为45mm， 加入浓度为1g/ml的中药液60山置平板于35 C37 C孵箱培养， 24h后量取抑菌环直径，以无菌生长的透明环的直径为最终结果。3结果经24h培养观察，所有中药对实验组及对照组细菌表现出不同的 抑制效果，结果见表1、表2、表3，图1。表1不同中药对两组细 菌的抑制效

7、果比较 表2中药的不同提纯方法对实验组细菌抑制效 果比较 表3中药的不同提纯方法对对照组细菌抑制 效果比较从表 1中可以看出，所试中药对实验组及对照组细菌在抑菌效果上经统计 学分析，均P0.05，差异无显著性，因此，无论是显示多重耐药的葡 萄球菌还是普通的葡萄球菌，中药的抑菌效果是基本相同的，说明这 些多重耐药的特殊菌的诸多改变尚未影响中药的治疗作用，这样在用药环境上比较西药显示出了很大的优势， 无需实验室进一步分类即可 用药，可做到及时、高效。另外，根据抑菌环直径大小，所试中药体外抑菌效果从强到弱 依次为：半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、 鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白

8、头翁水提液、鱼腥草水提液、白头 翁醇提液、射干水提液。从表2、表3中可以看出，鱼腥草醇提液、射干醇提液、蒲公英醇 提液抑菌效果均明显优于相应的水提液，经统计学分析，P0.01，两者对比差异有非常显著性。对照组半枝莲水提液效果优于醇提液， 经 统计学分析，P0.05，两者对比差异有显著性。而白头翁其醇提液、 水提液在抑菌效果上经统计学分析，P0.05，两者对比差异无显著性。4讨论MRSA自1961年被发现后，到20世纪80年代后期就已成为全球 发生率最高的医院内感染病原菌之一。 全世界范围内，目前能够被证实对MRSA有效的只有万古霉素。因此，MRSA被列为世界三大最 难解决感染性疾患的第一位，甚

9、至有专家将之称为“超级病菌”。2007 年10月17日美国弗吉尼亚贝德福德一名17岁高中生就因感染MRSA而死亡。我国20世纪70年代上海报道MRSA约占金黄色葡 萄球菌的5% , 19851988年上海及北京等地区为 10%24% , 19941996年上升到50%77.9% :2, 2001年我国的全国调查 报道波动在40%90% : 3,比利时报道波动在1.6%62.4%，表 明世界各地都有不同程度的增长，甚至各医院病房之间亦可有明显差 异4 30%60%MRSA 定植的病人以后会并发感染，一旦某部 门发生MRSA流行，则院内MRSA感染发生率增加，病死率高，会 给患者造成极大痛苦。但抗生素的开发明显滞后，并且始终围绕高效、 广谱，其用于临床的后果自然是细菌的耐药性越来越强，在这一方面无疑中药具有很大优势，我们国家是中药生产大国，药源广泛，价格 低廉，如果能够及早得到开发利用，必将惠及全社会。【参考文献】1谢秀琼.现代中药制剂新技术，北京：化学工业出版社，2004，4.2韦莉萍，靳士英，李春梅，等.金黄色葡萄球菌医院感染危险因素的调查.中国抗感染化疗杂志，2001，1