松花粉对砷中毒小白鼠肝脏RNA含量及其尿酸含量的影响

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减松花粉对砷中毒小白鼠肝脏 RNA含量及其尿酸含量的影响（作者：单位：邮编：）作者：韦利英，罗艳红，罗凤芬，吴妮，王强，梁通，黄 秀敏【摘要】目的 通过研究松花粉对砷中毒小鼠核糖核酸（RNA）及其尿酸含量的影响来观察松花粉对砷中毒小白鼠的治疗作用。方法将39只小鼠随机分为三组：A组为正常对照组，B组为治疗组，C 组为中毒组。正常对照组饮用蒸馏水；治疗组、中毒组均隔天注射 NaAsO2（1mg/kg）进行砷染毒，治疗组在砷染毒进行的第15天后开始用松花粉灌胃（1g/kg）。至第45天，分别测各组小白鼠肝脏 RNA 及其尿酸的含量。结果 中毒组与正常组相比，小白鼠

2、肝脏RNA含量 和尿酸含量显著增高（P0.01 ）;治疗组与中毒组相比，小白鼠肝脏 RNA含量和尿酸含量显著降低（P0.01）;正常组与治疗组小白鼠肝脏 RNA含量和尿酸含量差异无显著性 （P0.05 ）。结论松花粉能使砷中 毒小白鼠肝脏RNA及尿酸的含量降低并恢复正常，为松花粉在治疗 肿瘤方面有更深的研究提供参考。【关键词】 松花粉 砷中毒 小鼠RNA尿酸在正常情况下，细胞的增殖受到多种因素的调控，调控失衡可 能引起异常的增殖和持续的分裂。肿瘤的发生是由于细胞的增殖与分 化失常所导致的恶性生长现象。而我们知道砷中毒可以导致肿瘤的发 生,因此，对砷中毒小白鼠肝肿瘤或异常增生的诊断和预后具有重要

3、 的意义。核糖核酸(RNA)在生命活动中具有重要的作用，它和蛋白质 共同负责基因的表达和表达过程的调控。 它的变化对肿瘤生物学行为 有直接的影响1。RNA的含量可作为肝肿瘤诊断及判断预后的理 想指标2，另外，它也可以作为肿瘤恶变的指标之一3。松花粉 的排砷、保护机体方面的作用已有研究4, 5，RNA主要在肝脏合 成，通过肾脏排泄，本实验通过测定肝脏 RNA和尿酸的含量来检测 松花粉对砷中毒小鼠的治疗作用。本次实验采用紫外分光光度法，从肝脏 RNA水平上定量 分析正常组、砷中毒组以及松花粉治疗组小白鼠的肝细胞增殖情况， 以肝脏RNA的含量为指标，同时测定尿酸含量，通过对肝脏RNA含量及尿酸含量的

4、变化来分析 RNA的合成及排泄情况，为松花粉在 治疗肿瘤方面有更深的研究提供参考。1材料与方法1.1试剂NaAsO2，分析纯，购自上海试剂总厂第四分厂； 10%NaCI 溶液，0.1mol/L NaOH 溶液，95% 乙醇，10% 乙酸。1.2药品 国珍松花粉，购自中国新时代公司1.3仪器 紫外分光光度计，生化全自动分析仪。1.4动物分组 昆明小鼠39只（购自广西医科大学试验动物 部），雌性，均为12周龄，体重20g左右，普通（清洁）级。将小 白鼠随机分为三组，每组13只。1.5染毒与治疗 正常对照组，自行饮用蒸馏水；治疗组、中毒 组，用亚砷酸钠染毒，1mg/kg体重隔天腹腔注射。15天后，治

5、疗组 的小鼠用国珍松花粉液，浓度为0.09g/ml，0.6ml/只，持续灌胃治疗， 至第30天处理各组动物。1.6采样和检测方法 尿酸的测定方法采用生化全自动分析仪。1.6.1肝匀浆制备 剖腹取新鲜鼠肝，用0.9 % NaCI洗去血液， 除去结缔组织，剪碎，称取 1g肝组织，加1m1 0.14mol/L NaCI溶 液，研钵中研磨，制成肝匀浆。1.6.2分离核蛋白 肝匀浆倒入试管中，4000r/min离心5min， 上清倒入另一试管中为 A管。沉淀加0.25ml 0.14moI/L NaCI搅匀后 再置研钵中研磨，4000r/min离心5min，上清倒入A管，沉淀重复 上述操作，上清并入A管，

6、沉淀弃去。1.6.3纯化核蛋白A管用10%乙酸调pH至4.2，混匀，静置 5min，4000r/min离心5min，倾去上清，沉淀含核糖核蛋白。1.6.4溶解核糖核蛋白 A管沉淀中加0.75m1 10 % NaCl，搅匀， 100 C水浴10min（不断搅拌，防沸溢出），冷却，4000r/min离心5min， 留上清液。1.6.5纯化RNA A管上清液加95%冷乙醇5m1，见乳白色核 糖核酸钠沉淀，混匀放置10min , 4000r/min离心15min，沉淀为纯 化 RNA。166 RNA的溶解 沉淀中加入0.1mol/L NaOH 1.0mI，搅拌溶 解，2000r/min离心10min，

7、上清液则为RNA水解液。1.6.7 RNA 的测定 用4ml 0.1moI/L NaOH 将样品稀释到一定 浓度，以0.1mol/L NaOH调零，测定样品的A260，计算出1g肝组 织中的RNA含量。2结果RNA含量和尿酸含量的测定结果，见表1。表1三组小鼠肝RNA、尿酸含量的测定结果（略）与中毒组比较,a:t=2.81,b:t=4.40,c:t=14.10,d:t=9.05,P均 0.01;与治疗组相比，e:t=1.75,P0.053讨论砷中毒后T淋巴细胞的rDNA转录活性降低，机体肿瘤免 疫力下降5。同时砷还可引起正常细胞的增殖调控失衡，细胞异常 增殖，组织发生瘤变4。实验中也发现砷中毒

8、小白鼠肝部有类似肿 瘤病变。肿瘤一旦发生，如果得不到及时治疗，肿瘤细胞就会持续增 殖和分裂，机体的损伤不断积累，甚至癌变。而在砷中毒小鼠肝脏中， 因癌基因被激活，不论DNA是否明显扩增，激活的癌基因均大量转 录肿瘤性RNA，再产生肿瘤性代谢产物，表现一系列恶性生物学行 为；另外，RNA和蛋白质共同负责基因的表达和表达过程的调控， 随细胞的增殖分化而复制增多，故 RNA及其含量在砷中毒肿瘤的诊 断和预后具有重要意义13 。目前已知，正常机体细胞具有较恒定的 RNA含量，正常 组织癌变常经过由量变到质变的过程，在细胞癌变过程可伴有RNA含量的改变，而RNA主要在肝脏合成，通过肾脏排泄，因此利用紫

9、外分光光度法测定小白鼠肝脏 RNA的浓度，同时测定其尿酸含量， 可反映机体肿瘤细胞的增殖情况。本实验结果显示，砷中毒组小白鼠1g肝组织中RNA的含 量显著高于正常组（P0.01 ），说明砷能促使小白鼠肝细胞异常增殖， RNA随细胞的增殖分化而复制增多。治疗组小白鼠肝脏的RNA含量 显著低于中毒组（P0.01 ），而与正常组差异无显著性（P0.05），证明 松花粉能使砷中毒小白鼠肝脏 RNA的含量降低并恢复正常。其可能 原因有两个：一是松花粉通过促进砷从泌尿系统和消化系统排出，使砷在小白鼠体内血清浓度降低，从而减轻砷的毒性作用，抑制肿瘤的 增长，起到治疗的作用；二是松花粉通过提高T淋巴细胞的rD

10、NA的 转录活性，增强机体免疫力，抑制肿瘤细胞RNA的复制与合成，从而影响细胞的正常转运，抑制细胞的异常增殖，降低砷中毒小白鼠肝 脏RNA的含量，达到抑癌的治疗效果。从尿酸的测定结果来看，正 常组、治疗组和中毒组小白鼠的尿酸依次增高，与肝脏RNA含量的 变化相吻合，RNA在肝脏合成越多，通过肾脏排泄就越多，尿酸含 量越多；反之，RNA在肝脏合成受到抑制，含量变少，通过肾脏排 出也少，尿酸含量减少。尿酸是嘌呤类的终末代谢产物，肝脏是尿酸 生成的主要场所，血清尿酸除部分由肝脏分解破坏或随胆汁排泄外， 主要从肾脏排出，故肾功能减退时尿酸增高。依以上可见，松花粉对砷中毒小白鼠肾功能有保护作用，使其排泄功能恢复正常，其具体机制有待进一步研究。本实验结果可 为松花粉在治疗肿瘤方面有更深的研究提供参考。【参考文献】:1尹格平，苏应宽，庄桂霞，等葡萄胎滋养细胞DNA 及RNA含量的定量分析及临床意义J .中华妇产科杂 志,1994,29(9):538-541.:2 胡成进，杨道理,尹格平，等.肝细胞癌RNA、DNA定量测定及临床意义J.中国肿瘤临床，1997,24(6):531-534.3迟菁华，纪祥瑞,张华，等.葡萄胎DNA和RNA含量与恶变的关系J.青岛大学医学院学报，2001,37(1):25-27.4罗艳红