热休克蛋白70对供心一氧化氮及一氧化氮合酶表达的影响

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减热休克蛋白70对供心一氧化氮及一氧化氮合酶表达的影响(作者：单位：邮编：)【摘要】目的 探讨热休克蛋白70 (HSP70)对供心一氧化氮(NO)、 一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法 Wistar大鼠18只，分为2组：对 照组(C，n二9)，腹腔注射生理盐水0.5 ml，24 h后取离体心脏灌注 康斯特保护液(HTK液)，4 C保存3 h后建立Langendorf离体心脏 灌注模型，灌注KH液2 h ;实验组(E,n = 9)腹腔注射重酒石酸去甲肾 上腺素(溶于生理盐水中)3.1 mol/kg(0.53mg/kg)，腹腔注射24 h后 取离体心脏，处理方法同

2、C组。测定心肌HSP70含量、NO、NOS的 含量以及相关生化指标并做统计学处理比较。结果HSP70含量E组较C组明显增高(P0.01) ,NO、NOS的含量E组较C组明显增多 (P0.01)，生化指标E组明显优于C组。结论 心肌HSP70高表达对 供心具有明显的保护效应，并且其促进心肌NO、NOS的表达,可能是HSP70发挥心肌保护作用的因素之一。【关键词】 热休克蛋白70; 一氧化氮；一氧化氮合酶Abstract: OBJECTIVE To investigate the protection of heat shock prote in 70 on donor heart and the

3、 effects on expressi on of myocardial cell nitric oxide (NO) and nitric oxide synthase (NOS) of isolated rat heart. METHODS 18 Wistar rats were ran domly divided into 2 groups. Control group (C,n = 9) ,Normal saline 0.5ml was injected in traperit on eally and 24 hours later isolated hearts were stor

4、ed in 4 C for 3 hours with Histidine-tryptophan-ketoglutarate (HTK) soluti ons, and the n isolated hearts were perfused for 2 hours by Langendorff model. Experimental group (E,n = 9), Noradrenaline Bitartrate 3.1 gmol/kg(0.53mg/kg) was injected in traperit on eally and 24 hours later isolated hearts

5、 were stored in 4 C for 3 hours with HTK,and then isolated hearts were perfused for 2 hours with Krebs-He nseleit (K-H) soluti ons by Langen dorff model. Myocardial HSP70 content , the expression of NO , NOS and related biochemical indicators were detected. RESULTS HSP70 , NO and NOS in E group are

6、higher tha n those in C group and biochemical in dicators in E group is better than that in C group . CONCLUSION This study dem on strated that the high expressi on of HSP70 has obvious protecti on on donor heart ,and it can markedly affect the expression of NO , NOS of isolated rat heart and it is

7、perhaps one of importa nt factors for myocardial protecti on.Key words : Heat shock protein 70 ; Nitric oxide ; Nitric oxidesynthase热休克蛋白(heat shock protein , HSP)是一组所有的细胞能在 应激情况下由热休克基因所编码合成的序列高度保守的伴随细胞蛋 白，并能对抗更为严重的应激损伤，研究发现在高温、缺氧、再灌注、 局部损伤或感染等多种有害因素1 刺激均可产生热休克蛋白。 HSP70是HSP中最保守、最主要、含量最丰富的一类。实验表明一 氧化

8、氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)作为效应因子可介导心肌缺血再 灌注损伤的保护作用，HSP70心肌保护作用是否与供心缺血再灌注 后NO、NOS表达有关尚未可知，本实验的目的是探讨HSP70在发挥 供心心肌保护作用时与 NO、NOS的关系。1资料与方法1.1实验动物和分组 雄性Wistar大鼠18只，体重250350 g, 由青岛市药检所动物中心提供，随机分为2组(n=9):对照组(C组):腹腔 注射生理盐水0.5 ml,注射后24 h取离体心脏，灌注 Histidine-tryptophan-ketoglutarate(HTK) 心脏保护液，储存于 4C保存 液中 3 h,然后心脏行 Lang

9、endorff 灌注 Krebs-Henseleit(K-H)液 2 h; 实验组(E组),腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1卩 mol/kg(0.53mg/kg) , 24 h后取离体心脏，余处理步骤同C组。心脏灌 流结束后取左室心肌组织测定。HTK液和KH液自行配制2,配 制试剂购自上海惠兴生化试剂有限公司。1.2测定指标1.2.1心肌肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH ) 10min漏出 率测定。复灌后10min ,留取冠脉流出液,置于-20 C冰箱中保存，以备 测定心肌酶漏出量。全自动生化分析仪测定 CK、LDH浓度。单位: IU/（10min g）。CK（LDH）

10、漏出率二CK （或 LDH ） （IU/L） xiOmin 漏出液 1000X心肌湿重（g）1.2.2心肌含水量（MWC）测定。实验结束后在固定部位取心 室肌约100 mg，先用滤纸吸干心肌表面水分，使用电子天平称心肌 湿重。然后将心肌置入100 C恒温烤箱烘烤5 h，待恒重后称干重， 计算MWC。单位：%。MWC=心肌湿重-心肌干重心肌湿重X 100%。1.2.3心肌NO、NOS含量测定。试验结束后在同一部位取心肌组织约200 mg，吸干水渍后置入液氮保存。测定前称重，剪取100 mg左右心肌组织块，研磨成10 %匀浆，低温离心，取上清液,测定上清 液中NO、NOS含量（化学法，试剂盒由南京

11、建成生物工程研究所提供，严格按操作步骤进行测定）。1.2.4免疫组织化学法检测心肌组织 HSP70含量。试验结束后 在同一部位取左室心肌组织，10%甲醛液固定，制备石蜡切片。免疫 组化染色严格按照说明书进行（采用 SP法，试剂由北京中杉金桥生 物技术有限公司提供）。HSP70表达位于心肌细胞细胞质，DAB染色 棕色颗粒为阳性产物。光镜观察后应用MPIAS-1000型多媒体彩色病理图像分析系统进行图像分析，并自动测量染色阳性面积。每张切 片随机选10个视野（X400）,以染色阳性面积占视野面积的百分比的均值作为HSP70的表达量。1.3统计学方法 数据以均数士标准差（s ）表示,使用SPSS 1

12、3.0统计软件进行t检验，相关关系采用直线相关分析。2结果2.1心肌HSP70、NO、NOS的含量 HSP70表达量E组明显 高于C组（t=17.96 , P0.01），见图1、图2;心肌NO、NOS的含量 E 组明显高于 C 组（t=4.96 , P0.01 ; t=7.19 , P0.01）,见表 1。表1心肌HSP70表达、NO、NOS的含量（略）注：*与C组比较，P0.01图1 E组HSP70表达（X400）（略）图2 C组HSP70表达（X400）（略）2.2心肌生化指标 LDH和CK 10 min漏出率、MWC含量E 组较 C 组明显降低（t=15.81，P0.01 ; t=9.8

13、2,P0.01 ; t=4.13,P0.01）, 见表2。表2心肌组织的CK和LDH10min漏出率、MWC （略）注：*与C组比较，P0.013讨论热休克蛋白又称应激蛋白，参与细胞的损伤与修复。HSP70是一族最保守和最重要的热休克蛋白家族。HSP70在应激后生成最为显著，它作为分子伴侣参与细胞内蛋白质的折叠、装配 维持某些肽链的伸展状态，以利其跨膜转位，在线粒体、内质网等不同的区域内发挥作用，在细胞的信息传递、生长、分化中具有重要的 调控作用，同时它又可以促进某些变性蛋白质的降解清除，重新激活 某些酶的活性，维持细胞的正常生理功能，作为一种内源性保护物质 对脏器损伤产生自身保护作用3o目前

14、国内外已有许多实验证明了 HSP70在心肌缺血再灌中发挥了保护作用。 NO、NOS在心肌缺血 再灌注中的作用引起人们的注意并进行了广泛的研究，大量证据表明NO系统在缺血再灌注过程中扮演着重要角色，但研究结果分歧较 大。有人认为NO、NOS可能是减轻心脏缺血再灌注损伤的保护性 因素之一4-6，对HSP70发挥供心保护作用是否与 NO、NOS有 关，关系如何也少有报道。心脏移植是终末期心脏病确定的治疗手段，供心保护效果 在很大程度上决定了移植的成功与否，并对移植后的远期疗效也起到 重要作用。心脏移植过程要经历常温缺血、低温保存、以及缺血后的 再灌注。目前理论研究和临床实践都证实了心肌缺血再灌注损伤

15、的存 在7-8 ,低温保存的目的是降低组织代谢,减少缺氧组织对营养的 需求，但是也同时破坏了正常的生理状态，一定程度上加重心肌结构 和功能的损害9。本实验模拟心脏移植过程，将离体供心经过3个小时的低温保存（两组均采用目前成功应用于临床并具有卓越心肌 保护作用的HTK液作为心肌保护液）后进行再灌注，结果表明，与 C组比较，E组在再灌注期间丄DH、CK的漏出率及MWC含量减少，E 组NO、NOS的含量明显高于 C组，说明NO、NOS在心脏移植过 程中对供心心肌缺血再灌注及低温保存期间的损伤具有保护作用。 本 实验证明心肌NO、NOS的含量与HSP70的表达呈明显的正相关(r=0.887，0.953

16、)，证实了 HSP70可促进供心心肌细胞 NO、NOS的表达，这也提示我们HSP70促进NO、NOS的表达可能是其发挥 供心心肌保护作用的机制之一。【参考文献】1 Morimoto R, Sarge KD, A bravya K. Transcriptional regulation of heat shock genes:a paradigm for inducible genomic response J . J Bio l Chem,1992,267(31):21987-21990.:2张涛，高长青，李佳春，等.康斯特保护液对中低温 离体大鼠心肌的保护作用J.中国体外循环杂志，2006，

17、4 (1): 33-35.3 Gusarova V,Caplan AJ,Brodsky JL,et al.ApoproteinB degradation is promoted by the molecular chaperones HSP90 and HSP70 :JBiol Chem,2001,276(27):24891-24892.4 Sumeray MS ,Rees DD , Yellon DM. Infarct size andnitric oxide synthase in murine myocardium J . J Mol Cell Cardiol .2000 ,32(1)

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