甾体激素类药物的分析课件

1、甾体激素类药物的分析第十章第十章甾体激素类药物甾体激素类药物的分析的分析甾体激素类药物的分析基基 本本 要要 求求1 1掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方 法之间的关系。法之间的关系。2 2掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3 3掌握甾体类药物的含量原理与方法。掌握甾体类药物的含量原理与方法。4 4熟悉甾体类药物杂质检查的方法。熟悉甾体类药物杂质检查的方法。甾体激素类药物的分析基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819 概述概述甾体激素类药物的

2、分析分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素甾体激素类药物的分析分类结构特点肾上腺皮质激素21个C，A环为4-3-酮基，C17-为-醇酮基或-羟基雄性激素与蛋白同化激素19个C，A环为4-3-酮基，C17-为-羟基或酯孕激素21个C，A环为4-3-酮基，C17-为甲酮基或-羟基或-乙酰氧基雌性激素18个C，A环为苯环，C3-酚羟基， C17-为-羟基甾体激素类药物的分析OHOOHOCH2OHHHH 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素氢化可的松氢化可的松OHOHCH3HHHHOFCH3OOPONaOONaO

3、H地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松醋酸地塞米松甾体激素类药物的分析雄性激素雄性激素OCH3HHCH3OHHCH3甲睾酮甲睾酮甾体激素类药物的分析OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睾酮丙酸睾酮甾体激素类药物的分析OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙甾体激素类药物的分析孕激素孕激素黄体酮黄体酮OCH3HHHCH3OHCH3甾体激素类药物的分析OCH3HHCH3OOHCH3OCH3CH3孕激素孕激素醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮甾体激素类药物的分析雌性激素雌性激素炔雌醇炔雌醇OHCH3HHHCCHHO甾体激素类药物的分析雌性激素雌性激

4、素OHCH3HHHHHO雌二醇雌二醇甾体激素类药物的分析OHOHHHCH3HCCH炔诺酮炔诺酮此外此外甾体激素类药物的分析OHOHHHH3CHCCH炔诺孕酮炔诺孕酮甾体激素类药物的分析一、结构与性质一、结构与性质 1. 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应 C C1717 醇酮醇酮基基还还 原原 性性甾体激素类药物的分析2. 2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应 C C17 17 羟羟基基可成酯可

5、成酯甾体激素类药物的分析3. 3. 孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应C C17 17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰化纳反应化纳反应甾体激素类药物的分析4. 4. 雌性激素雌性激素主要活性基团主要活性基团性性 质质A A环为环为33OH OH 苯环苯环UVUV、与重氮苯磺、与重氮苯磺酸盐反应酸盐反应C C17 17 乙炔基乙炔基与与AgNOAgNO3 3反应反应C C17 17 羟基羟基可成酯可成酯甾体激素类药物的分析二、鉴别试验二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应甾体激素甾体激素类药物类药物呈

6、色呈色H H2 2SOSO4 4 H H3 3POPO4 4 HClOHClO4 4 HClHCl（母核）（母核）甾体激素类药物的分析与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀释加水稀释泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙带橙 清清甾体激素类药物的分析( (二二) ) 官能团的反应官能团的反应肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OH1、C17 醇酮基醇酮基还原性还原性呈

7、色反应呈色反应此外还有斐林试此外还有斐林试液、多伦试液液、多伦试液甾体激素类药物的分析甾酮类甾酮类激素药激素药物物呈色呈色羰基试剂羰基试剂2.C2.C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼甾体激素类药物的分析具有甲酮具有甲酮基或活泼基或活泼亚甲基的亚甲基的甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛3.3.甲酮基甲酮基甾体激素类药物的分析黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化纳氰化纳其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色甾体激素

8、类药物的分析有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl4.4.有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈色呈色 甾体激素类药物的分析雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羟基酚羟基甾体激素类药物的分析含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银6. 乙炔基的沉淀反应乙炔基的沉淀反应RCCHAgNO3RCCAg甾体激素类药物的分析 ( (三三) )制备衍生物测定制备衍生物测定m.p.m.p.盐酸氨基脲盐酸氨基脲苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙缩氨基脲衍生物缩氨基脲衍生物1. 缩氨基脲的生成缩氨基脲的生成m.p

9、.约约180（分解）（分解）2. 酯的水解酯的水解丙酸睾酮丙酸睾酮碱性条件碱性条件睾酮睾酮m.p.为为150150 156甾体激素类药物的分析-3-3-酮酮、苯环苯环、其他共轭结构、其他共轭结构（四）（四）UVUV法法1. 结构依据结构依据240nm240nm左右左右280nm左右左右甾体激素类药物的分析2. 示例示例 甾体激素类药物的分析结构特征：酚羟基、结构特征：酚羟基、C C17 17 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO（五）（五）IRIR法法甾体激素类药物的分析1505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm

10、-1OH 酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨苯环的骨架振动架振动甾体激素类药物的分析黄体酮黄体酮COHHHCH3O结构特征：结构特征：-3-3-酮、酮、C C1717- -酮基酮基甾体激素类药物的分析1700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H双键双键甾体激素类药物的分析（七）（七）TLCTLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点要求供试品溶液所显主斑点的的颜色颜色和和位置位置与对照品溶液的主与对照品溶液的主斑点相同。斑点相同。

11、甾体激素类药物的分析（八八） HPLCHPLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的的色谱图中，供试品峰的t tR R与与对照品峰的对照品峰的t tR R一致。一致。甾体激素类药物的分析三、三、 特殊杂质检查特殊杂质检查（一）其他甾体的检查（一）其他甾体的检查甾体激素类药物的分析检查方法（具有一定分离能力）检查方法（具有一定分离能力） TLCTLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）

12、 HPLCHPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）甾体激素类药物的分析（1 1）TLCTLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色甾体激素类药物的分析例：氢化可的松中其他甾体的检查例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：供试液：本品本品+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 浓度：浓度：3.0mg/ml3.0mg/ml对照液：对照液：供试液（供试液（3.0mg/ml3.0mg/ml）+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 60g/ml 60g/ml 层析：层析：供试

13、液供试液 点样、展开、斑点检出。点样、展开、斑点检出。 对照液对照液判断：判断：供试液如显杂质斑点，不得多于供试液如显杂质斑点，不得多于3 3个，其颜个，其颜 色与对照液的主斑点比较，不得更深。色与对照液的主斑点比较，不得更深。甾体激素类药物的分析（2 2）HPLCHPLC法（主成分自身对照法）法（主成分自身对照法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v规定杂质峰面积规定杂质峰面积甾体激素类药物的分析硒的检查硒的检查（二）（二）来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢有毒有毒方法方法药物药物氧瓶燃烧氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定二氨基萘比色法

14、测定甾体激素类药物的分析（三）有机溶剂残留量的检查（三）有机溶剂残留量的检查（灵敏度法）（灵敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限= 3.1ng= 3.1ng丙酮丙酮 5.0%5.0% 内标法内标法 + + 校正因子校正因子以地塞米松磷酸钠为例以地塞米松磷酸钠为例 GCGC法法甾体激素类药物的分析地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠检查检查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮 精密称取本品精密称取本品0.16g，置，置10ml量瓶量瓶中，精密加内标溶液中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)与丙酮与丙酮100l(7

15、9mg)置置100ml量瓶中，精密加内标溶液量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得，并不得出现甲醇峰。出现甲醇峰。甾体激素类药物的分析（二）游离磷酸盐的检查（二）游离磷酸盐的检查地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠对照品比色法对照品比色法甾体激素类药物的分析 POKHPOH%.%.L %. 甾体激素类药物的分析（一）（一）HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPLC（大多内标法）（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其（甾体激素类药物

16、常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）色法有干扰）四、含量测定四、含量测定甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析（二二）UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药孕激素、口服避孕药 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基（1） 原理原理异烟腙（黄）异烟腙（黄）酮基酮基异烟肼异烟肼 CHCl（

17、缩合）（缩合）1. 异烟肼比色法异烟肼比色法（三）比色法（三）比色法甾体激素类药物的分析CONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）甾体激素类药物的分析（2 2）方法）方法对照品法对照品法异烟肼异烟肼挥去乙醇挥去乙醇对照液对照液供试液供试液A CHCl暗暗45甾体激素类药物的分析（3 3）讨论）讨论反应速度（反应专属性）反应速度（反应专属性）A.C C3 3= O = O C C1717= O = O 、 C C2020= O= O C C1111= O = O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C C3 3酮基酮基甾体激素类药物的分析B. 溶剂的选择溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙

18、醇甲醇、乙醇无水甲醇无水甲醇无水乙醇无水乙醇甾体激素类药物的分析C.C.水分、温度、水分、温度、O O2 2与光线的影响与光线的影响 含水量含水量腙水解腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时不挥发溶剂、不吸收水分时 O O2 2与光线无影响与光线无影响t 甾体激素类药物的分析D. 酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸酸: :异烟肼异烟肼 = 2:1= 2:1最大最大A A甾体激素类药物的分析 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C C17 17 -醇酮基醇酮基强还原性强还原性（1 1）原理）原理2. 四氮唑比色法四氮唑比色法有色甲瓒有色甲瓒四氮唑盐四氮唑盐醇酮基醇酮基 a a 77COH - 还原还原 甾体激素类药物的分析CNNNNH三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）nmmax490480 e2 H甾体激素类药物的分析Cl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3蓝四氮唑蓝四氮唑（BT）甾体激素类药物的分析（2）方法方法对照品法对照品法氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC4045