(完整word版)3脑脊液常规检查的标准操作程序

1、(文件编号：S0P-JZ-003.00第1版/第0次修改文件名称：脑脊液常规检查标准操作规程编写人李林审核人彭进岳阳市一人民医院The First People s Hospital of Yueyang批准人刘培香第1页，共6页实施日期：2011-9-1一、目的规范脑脊液常规检查。二、适用范围适用于脑脊液的常规检测，包括：一般性状的检查、潘氏试验、细胞总数计数、白 细胞计数与分类、革兰氏染色、抗酸染色、墨汁染色。三、支持性文件全国临床检验操作规程（第三版）、临床检验基础（第三版）四、标本处理1、 标本收集后应立即送验，一般不能超过 1h。收到标本后应立即检查，久置可致细胞 破坏，影响细胞计数

2、及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解。2、 细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。五、一般性状检查主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、 灰白浑浊等。脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养 基。1、红色:如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意：（1）将血性脑脊液试管离心沉淀（1500r /min），如上层液体呈黄色，隐血试验阳 性，多为蛛网膜下腔出血，且出血的时间已超过 4h。如上层液体澄清无色， 红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿

3、刺外伤引起出血时也可见到。因脑 脊液渗透压较血浆高所致。2、黄色:除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色。黄疸患者 的脑脊液也可呈黄色。但前者呈黄色透明的胶冻状。3、米汤样：由于白（脓）细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。4、绿色:(文件编号：SOP-JZ-003.00第1版/第0次修改文件名称：脑脊液常规检查标准操作规程编写人李林审核人彭进岳阳市一人民医院The First People s Hospital of Yueyang批准人刘培香第2页，共6页实施日期：2011-9-1可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。5、褐或黑色：见于侵犯脑膜的中枢神

4、经系统黑色素肉瘤。五、潘氏（Pandy）球蛋白定性试验1、原理脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。2、试剂5%苯酚溶液：取纯苯酚25m1,加蒸馏水至500m 1用力振摇，置37C温箱内12 天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。3、操作取试剂23m1,置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液 I 一 2滴，衬以黑背景，立 即观察结果。4、结果判断阴性：清晰透明，不显雾状。极弱阳性（土）:微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。弱阳性（十）:灰白色云雾状。阳性（2十）：白色浑浊。强阳性（3十）:白色浓絮状沉淀。最强阳性（4十）：白色凝块。5、临床意义正常时多为阴性。有脑组织

5、和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性 脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强 阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。六、细胞计数（一）、细胞总数1、器材及试剂（1）细胞计数板；（2）红细胞稀释液（配法同血液红细胞稀释液）。(文件编号：SOP-JZ-003.00第1版/第0次修改文件名称：脑脊液常规检查标准操作规程编写人李林审核人彭进岳阳市一人民医院The First People s Hospital of Yueyang批准人刘培香第3页，共6页实施日期：2011-9-12、操作(1) 对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，

6、计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每 卩l的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多， 可计数一大格内的细胞x 10,即得每卩I脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘 以 106。(2) 浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20卩I，加入含红细胞稀释液0. 38m1的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数 4个大方格中的细 胞总数，乘以50,即为每卩I脑脊液的细胞总数。(二) 、白细胞数1、非血性标本：小试管内放入冰乙酸1 2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加 混匀的脑脊液34滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞 计数法计数。

7、2、血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。每卩I脑脊液内白细胞校正数=每 卩I脑脊液内白细胞未校正数 每卩I脑脊液内内红细胞数X每 卩I血液内白细胞每卩I血液内红细胞3、参考值正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞。成人：(0 8) X 10v 6/L儿童：(0 15) X 10 v 6/L多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7： 3，偶见内皮细胞4、附注(1)计数应及时进行，以免脑脊液凝固，使结果不准确。(文件编号：SOP-JZ-003.00第1版/第0次修改文件名称：脑脊液常规检查标准操作规程编写人李林审核人彭进岳阳市一人民医

8、院The First People s Hospital of Yueyang批准人刘培香第4页，共6页实施日期：2011-9-1（2）细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。前者不溶于乙酸，加优质墨汁后 可见不着色的荚膜。 计数池用后，应用75%乙醇消毒60min。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。（三）、细胞分类1、直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数 单个核细胞（包括淋巴细胞及单核细胞）和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率 表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。2、染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可

9、将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清I滴，推片制成均匀薄膜，置室温或 37C温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。 如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。（四）、临床意义1、中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的 性质有关。2、中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴 细胞为主。3、细菌感染时（化脓性脑膜炎），细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。4、脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。七、细菌直接涂片检查（一）、革兰氏染色临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化

10、脓性脑脊髓膜炎时，应作细菌学涂片检查。操作如下：1、将脑脊液立即离心沉淀，取沉淀物涂片 2张。2、涂片应在室温中，或置37 E温箱中干燥，切勿以火焰烘烤。3、经火焰固定后，一张涂片用亚甲蓝染色 30s，另一张作革兰氏染色，操作如下：（1）加结晶紫染1min，清水冲去染液，倒去玻片上水。(文件编号：SOP-JZ-003.00第1版/第0次修改文件名称：脑脊液常规检查标准操作规程编写人李林审核人彭进岳阳市一人民医院The First People s Hospital of Yueyang批准人刘培香第5页，共6页实施日期：2011-9-1加碘液染1min,水冲。 加脱色液（75汇醇），不时摇动1

11、030s，至无紫色脱落为止，水洗。 加复染液，染30s，水洗。干后镜检。4、注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述。报告检查到革兰氏阴（阳）性细菌，或未见革兰氏细菌。（二）、抗酸染色临床上怀疑为结核性脑脊髓膜炎时，应作抗酸染色。单张涂片抗酸染色阳性率较低，但如果检查涂片增至4张，阳性率可达80%以上。操作如下：石炭酸复红染色法：1、涂片经火焰固定后，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸气出现，切不可沸腾。染 色5min，冷却后水洗。2、加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。3、加复染液，染0.51min,水洗。4、干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。金永染色法：1、涂片固定后加第1液510min,不必加热。2、弃去第1液后水洗，加第2液（脱色液）脱色至无红色脱落为止，水洗。3、加第3液（复染液）复染30s，水洗，待干，油镜镜检。抗酸菌染成红色，非抗酸 菌及细胞染成谈蓝色。八、真菌检查-新形隐球菌检查1、操作（1）取脑脊液，以2000r/min离心10min，以沉淀物作涂片，加优质经过滤的细墨汁 I 滴，混合，加盖玻片检查。（2）先用低倍镜检查，如发现在黑色背景中有圆形透光小点，中间有一细胞大小的圆形物质，即用高倍镜仔细观察结构，新形隐球菌直径520