实验12植物组织中丙二醛含量的测定(精)_第1页
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文档简介

1、植物组织中丙二醛含量的测定古一、实验目的1. 掌握植物体内丙二醛含量测定的原 理及方法。2. 了解丙二醛积累对细胞的伤害:、实验原理逆境或衰老膜脂的过氧化作用丙二醛通过MDA 了解膜脂过氧化作用及间接反应植物组织 受伤害程度；MDA在酸性和高温条件下与硫代巴比妥酸（TBA）反 应生成红棕色的三甲川（3, 5, 5-三甲基恶哇2,4- 二酮），最大吸收波长532nm,最大干扰物质可溶 性糖（吸收峰450mn）,用双组分分光度法排除。 计算公式P173： 44-2. 44-3丙二醛3,5,5三甲基恶哇2,4 二酮（三甲川）HN硫代巴比妥酸TBA三、实验器材1、材料：受干旱.高温、低温等逆境胁迫的植

2、 物叶片或衰老的植物器官2、仪器：紫外分光光度计.离心机3、试剂：10%三氯乙酸（TCA） 0. 6%硫代巴比妥酸（先加少量Imo 1/L氢氧化钠溶解， 再用10%三氯乙酸定容）石英砂实验步骤1 MDA的提取：称lg叶片，加入2ml 10% TCA及少量石 英砂，研磨至匀浆，再加8ml 10%TCA进一步研磨， 定容至10ml,匀浆以4000r/min离心lOmin,其上清液即为MDA提取液。2 MDA的测定:取2ml MDA提取液（对照加2ml蒸馅水）, 加2ml 0. 6 % TBA,混和液在沸水浴中保温15min后， 立即置于冰浴中冷却，然后离心lOmin,于波长 532mn、450nm

3、600nm下测定0D值。五、结果计算以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计算衰 老和正常组的值。MDA浓度(pinol/L)=6 45 (D5 32-D600) -0. 56D450植物纽织鲜車（g）MDA含量（mol/g FW）=咧浓度3 “提取液休积z注意事项D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下 的光密度值。 MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min 之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降; 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温 离心机离心。可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大 吸收在450 nm）,当植物处于干旱、高温.低温等逆境时 可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。思考题

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