ToxoIgGAvidity作业指导书

1、文件编号:LAB OP MY020第4页.共6页版木：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书E 170/e 601/e 411弓形虫IgG亲和力测试(Toxo IgG Avidity)1.分析原理采用双抗体夹心法.整个过程18分钟完成。恨据 Tore。IgG 的测试结果.6IU/nK500IU/Ml500IU/mL1500IU/Ml 1500IU/mL 4000IU/M14000IU/Ml样本不稀释手工1:20稀释样本（通用稀释液手工1:50稀释样本（通用稀释液手工1:100稀释样本（通用稀释液将稀释后的样本（6-500 Z间则不用稀释）分为两份，一

2、份用通用稀释液1:2稀偉，勿一份用Diluent Toxo Avidity稀释液1:2稀释，室温放置10分钟,上机做测试.1）第1步：10 ML标本.生物素包被的垂组弓形虫特异性抗原和钉（Ru）标记的弓形虫特异性抗原混匀.形 成夹心复介物：2）第2步：加入链琢亲和素包被的微粒让上述形成的复介物通过生物素与链瑋亲和索间的反应结含到微粒上.3）第3步：反应混和液吸到测址池中.微粒通过磁铁吸附到电极上未结合的物质被清洗液洗去.电极加电压 后产生化学发光.通过光电倍增符进行测定。仪器通过2点定标曲纽以及试剂条码捉供的母定标曲线计算出 结果.2. 标本要求血淸：按标准常规方法采集。血浆：肝素（锂.纳人E

3、DTA-K,、枸椽酸钠抗凝均可。如用枸椽酸钠抗凝.结果应+10札标本在18 C 23C可稳定1 Ml在2 C -SC可稳定8周.-20C可稳定6个月。只能冻融5次。含沉淀的标本使 用前需离心。不耍加热灭活标本。标本和质控液禁用烝氮钠防腐。标本.定标液和质控品在测定前的隘度应与室 温平衡：放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏煉装配套试剂，试剂：M链姦亲合素包被的磁珠微粒（透明瓶盖人1瓶.6.5 mL：包被链赏亲合素的磁珠微粒 0. 72 mg/mL；防爛剂。R1生物索化的弓形体抗原(灰色瓶盖 1瓶.9mL：生物素化弓形体恃异性抗原(重组.大

4、肠杆菌.400ug/L： TRIS缓冲液 50 mol/L, pH7. 5：防腐剂。R2 Ru(bpy)5标记的弓形体黑色瓶盖.1瓶.9也 钉复介体标记的弓形体特异性抗原(垂组大肠杆菌100 u g/L： TRIS 缓冲液50 mol/L pH7. 5：防腐剂。校准品：(试剂盒附帯)Cal 1阴性定标液(口盖) 2M. 1.0ml/)K.人血淸廉质Cal 2阳性定标液(黑盖).2瓶，1.0m瓶,人血清基质质控品：Elecsys PreciControl Toxo IgG 货号 05802580190其他所需材料：常规实验设备Elecsys E 170/E 411Elecsys 系统清洗液(Sy

5、sClean)，货 11930346122Elecsys E 170分析仪所襦材料：Elecsys 系统缓冲液(FroCell M),货-；018S0310190Elecsys 检测池洗液(CleanCell M)，货 1880293190Elecsys PC/CC杯,货 03023141001Elecsys 淸洗液(Probe初sh M)货号03005712190Elecsys 反賊杯/加针头/废物袋(CUP/TIP) 货 12102137001Elecsys 系统淸洗适配器(SysClean Adapter M).货-)03027651001Elecsys E 411分析仪所希材料：Ele

6、csys 系统缓冲液(ProCell ) 货116629SS122Elecsys 测址池淸洗液(CleanCell).货11662970122Elecsys 系统淸洗液(SysWash) 货-11930316122Elecsys 适配器(Adapter for SysClean).货 11933159001Elecsys 反感杯(CUP) 货号 11706802001Elecsys 加样头(TIP) 货号 117067990014. 仪器和校准使用仪器：罗氏公司生产Elecaya 2010. E 170 e601 e 111全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器枝准：毎批试剂必皴用新鲜试剂和狡准一

7、次.另外.以下情况需耍再次定标：枝准过期:批枝准稳定28天.盒枝准7天。根据耍求进行标定：如质控结果超出范阖时：更换某些试剂时根据规定进行多次标定。5. 操作步骤参见仪器标准操作规程,6. 质最控制用质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验峑的具体耍求。检测 值应落在确定的范用内.如出现质控值落在范用以外.应采取校正措施。7. 计算方法x 100DilToxoAv处F里等份的IU/mLDilUni处理等份的IU/mL& 结果解释Elecays Toxo IgG抗体亲和力检测获得的结果解桶如下:亲和力（Avi% ）结果解释80高亲和力9.分析性能检测范围：

8、0.13-650 IU/mL精密度：精密测定便用实验方案屮W Elecsys试剂.样品和质控品确定.进行每个样品的单一亲和力测定.包括手工检测.根据检测匸作流程处理。诬复性批内蒂密度）卩21单一测定（样品处理由单一操作人员进行）。槐块间将度:XXXXXX医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书E 170/e 601/e 411弓形虫IgG亲和力测试(Toxo IgG Avidity)文件编号：LAB OP MY020 第4页.共6页版木：A/0生效日期：2008-02-01护8每个样晶的单一结果（每个模块2个运行.4个模块）。获得以下结果：Elecsys 2010和cobas e 411 分析仪

9、重复性匕样本平均值Avi%SDAvi%CV%HSC1492.14.3HS2751.31.7HS3930.60.6PCd Toxo IgG Avidity 1423.07.3PC Toxo IgG Avidity 2860.91.0b）重复性二批內稱密度 cj HS二人血;:青d） PC=PreciControlMODULAR ANALYTICS E170 , cobas g 601 和cobas e 602分析仪模块间精密度样本平均值Avi%SDAvi%CVoHS 1422.25.2HS2514.38.7HS3561.52.7HS4801.21.5HS5790.81.0HS6870.50.5H

10、S7920.50.5HS8940.00.0PC Toxo IgG Avidity 1531.52.8PC Toxo IgG Avidity 2900.50.510.干扰因素该方法不受黄追（胆红3tag. dl）、溶血（血红蛋CK5.6g, dl） x弗血（脂质2000mg/dl）生物素60n 等干扰.接受高剂量生物素5mg/7）治疗的病人.至少要等量后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风 湿因子1500U/ml）和透析的干扰。异常旃人应结合病史.临床其他检査结果综合起来进行诊断。11 临床意义弓形虫病是一种由原生体寄生虫弓形虫引起的常见传染病。主耍通过摄入被猫粪便污染的债物或水（且含成熟弓

11、形 虫囊合子）或者摄入没有做熟的受感染动物肉类而获得嗾染。健康个体屮原发性急性感染大多症状轻微甚至无症状.文件编号:LAB OP MY020第7页.共6页版木：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书E 170/e 601/e 411弓形虫IgG亲和力测试(Toxo IgG Avidity)常有长期持续的潜伏感染。但担 免疫抑制者(如器官移植.AIDS患者潜伏弓形虫感染的复发常诱发脑膜脑炎。 由于弓形虫可以通过胎盘.因此怀孕期间原发性母体弓形虫感染可能导致胎儿严重损害。大多数先天性感染娶儿在 出生时没有临床症状.但后來可能会发展成严垂的后遗症如智力和将

12、神运动发育迟缓.脉络视网膜炎以及听力丧 失。胎儿嗾染率随孕龄的增长而增加.不过早期母体感染时出现严垂临床表现的风险更高.对妊娠期间的急性感染 进行早期药物治疗可以阻止先天损害并改兽临床表现的严垂程度。无急性临床症状的情况下.弓形体感染的诊断基 丁血淸学标志物检测.即针对弓形虫的IgG和1枫1纳抗体彼认为是急性期的标志.但由丁原发感染数月圧至数年 后的多克降刺激或者残留或持续IgM检测也可以观察到阳性IgM结果。由于这一爭实.需耍互补技术落助完善嗾染 口期.从而可对怀孕进行适当的辅导和管理。弓形体IN抗体亲和力测定绘13前报可靠的方法.在掖后4个月内排除 感染的发生。Elecsys Toxopl

13、asma IgG抗体的亲和力检测测定弓形虫IgG抗体在感染后的功能结合亲和力。在非主 耍反应或感染远程阶段产生的抗体较主耍反应期间产生的抗体.具有更髙的抗原亲和力。N校低或灰色地带的亲合 力结果不可推断出任何临床解释。亲和力测试应在奸娠早期进行：妊娠四个月以后的高亲和力结果不能排除妊娠早 期的原发性感染.当时低亲和力弓形体IgG抗体可能己经存在。妊娠前三个月的离IgG抗体亲和力检测可以被认为是 过往感染的良好指标。12翁考文献1. Montoya JG, Liesenfeld O. Toxoplasmosis. Lancet 2004:363:1965976.2. Luft BJ, Remin

14、gton JS. Toxoplasmic encephalitis in AIDS.Clin Infect Dis 1992:15:211-2223. Khalifa KES. Roth A. Roth B. et al. Value of PCR for Evalualiong Occurrence of Parasitemia in Immunocompromised Patients with Cerebral and Extracerebral Toxoplasmosis. J Clin Microbiol 1994:32:2813-2819.4. Remington JS. Me L

15、eod R & Desmonls G 200L Toxoplasmosis. 205-346. in J.S. Remington & J.O. Klein (ed.), Infectious Diseases of the Fetus and Newborn Infant. 5lh ed. W.B. Saunders. Philadelphia. Pa.5. Thulliez P. Maternal and foetal infection: in Toxoplasmosis (eds D.H.M. Joynson. T.G. Wreghitt) Cambridge University Press. 2001:193-213 ISBN 0521 44328 &6. Wong SY, Remington JS. Toxoplasmosis in pregnancy. Clin Infect Dis 1994:1