九联检项目可行性报告

1、九项呼吸道感染病原体 IgM 抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法 ）项目推荐书注册证号：国食药监械（进）字 2010第 3400365号生产厂家：西班牙 VIRCELL公司中国独家代理：郑州安图生物工程股份有限公司公司简介代理公司： 安图生物专业从事体外诊断产品的研发、生产和销售的高新技术企业 体外诊断试剂 GMP认证（ 2001 年， 2003年， 2008 年） 体外诊断试剂 ISO13485认证（ 2006 年 UL，2009 年） SFDA认证中心体外诊断试剂生产质量体系考核（ 2008 年） 河南省二类体外诊断试剂生产质量体系考核（ 2008 年） 医疗检测仪器（酶标仪 /发光仪等） I

2、SO13485/CE/IVDD认证郑州安图生物成立于 1998 年，是从事体外诊断产品的研发、生产和销售的高新 技术企业。安图生物已经通过国家药品 GMP 认证、 ISO13485-2003国际质量体 系认证、国家体外诊断试剂质量体系考核。通过河南省 50 户成长型高技术企 业、河南省体外诊断试剂工程研究中心、河南省级企业技术中心、河南省免疫 诊断试剂工程技术研究中心认定。是河南省体外诊断行业的龙头企业，综合实 力国内同行业中名列前茅。公司主营业务涵盖体外诊断试剂、医学检验仪器、 软件和临床医学检验服务领域。产品品种包括：传染病检测系列、肿瘤检测系 列、内分泌检测系列、甲状腺功能检测系列、糖尿

3、病检测系列、细菌和耐药检 测系列、儿童发育检测等七大系列检测试剂，以及酶标仪、洗板机、发光仪、 免疫自动化系统等四大系列检测仪器。安图生物定位于发展民族产业：高点起 步，打造安图品牌；定位于专业性公司：专注免疫和微生物诊断产品；定位于 技术创新型企业：保证核心竞争力的可持续性；定位于市场先导型企业：保证 企业健康、高速发展。西班牙 VIRCEL公司简介：VIRCELL成 立于 1991 年，专业从事微生物诊断试剂的开发和生产。公司目前拥 有近 200 个品种，涵盖多种检测方法： 酶联免疫分析 免疫荧光分析 细胞培养 分子生物等，产品在全球范围销售，目前已销往 50 多个国家。2008 年销售分

4、布：CELLBRUCAPT6%20%IFA14%ELISA60%CULTUREVIRCELL公司相关质量认证：1999年通过 ISO 9002: 1994质量认证；2009年更新 ISO 9001: 2008质量认证； 2003 年获得 CE认证；2005年获得 ISO 13485: 2005认证产品销往全球 50 多个国家：South2,99%0,98%21,17% NorthAmerica Africa AsiaAmerica0,19%Oceania0,13%Europe74,55%1、检验项目现状分析2、VIRCELL产品优势及性能分析3、收费标准及效益分析4、产品技术参数1、检验项目现

5、状分析目前市面上所见同类项目产品存在着以下几点缺陷：1、一般产品多为国产酶联法，在产品灵敏度、特异性方面不是十 分符合临床诊断；2、没有一个厂家产品能同时涵括此 9 个项目，而且方法学不统 一，使用科室在使用的过程中因操作的繁琐、复杂，难以做好 有效的质量控制；3、目前国内此九个项目文号齐全的厂家只有我公司拥有，其中几 个项目（如肺炎衣原体、副流感病毒等）国内除我公司外其他 厂家均为无证产品，按照我国目前现行法律，使用单位在使用 时无法得到产品质量的有效保证，这样就使得使用单位使用后 存在法律风险 ：如因产品质量问题带来的医患纠纷时，使用单 位无法得到法律的有效保护；而且面临着药监部门罚款，这

6、样 的话也使用单位不仅面临法律的制裁及经济上的损失，而且其 专业地位也会因此而受到影响。2、VIRCELL产品优势、临床意义及性能分析产品优势：全国独家九项全部拥有国家批准文号且方法学经典、统一，操作 简单，质量可靠，既满足临床需要又规避法律风险； 性能稳定、无交叉反应； 产品经 ISO 9002 CE认 证，品质保证； 一卡九项，避免漏检； 有效期长达 18 个月。临床意义：呼吸道感染性疾病的早期、快速、准确诊断； 对病原体的鉴别诊断提供导向性依据； 指导临床合理用药。产品性能：九项呼吸道感染病原体 IgM 抗体检测试剂盒，采用间接免疫荧光法（ IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体

7、的 IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清 1 型、肺炎支原体、 Q 热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病 毒、乙型流感病毒和副流感病毒 1、2 和 3 型。用于呼吸道感染疾病的辅助诊断。1. 检测原理间接免疫荧光法（ IFA）（图 1）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生 的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中 除去。在下一步骤中，抗原 -抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果。图 1 ：九项呼吸道感染病原体 IgM 抗体检测试剂盒检测原理2. 试剂盒组成及用途组分成分和用途载玻片检测

8、的物理载体，覆有聚四氟乙烯并包被有针对检测物的特异性抗原， 包装袋内有一袋硅胶以防潮。质控品用于证明试剂盒及试验的有效性，含有人血清及防腐剂。吸附剂羊抗人 IgG用来吸附人 IgG 避免干扰 IgM 检测，含有防腐剂。FITC结合物荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，含有染色液、防腐剂和蛋白稳定 剂。和抗原抗体复合物反应，并显色。封闭介质甘油缓冲液，便于观察。磷酸盐缓冲液（PBS）用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫球蛋白和结合物。3. 操作步骤实验前准备1）实验所需物品准备： 1000ml 量筒、 1000ml 烧杯、离心管、微量移液器、温育湿盒、洗 瓶、水平摇床、恒温箱、盖玻片、荧光显

9、微镜。2）PBS洗液的准备：将 1 瓶 PBS粉末倒入烧杯中，加入 1L 蒸馏水中，摇匀直至完全溶解， 配好后储存在 2-8oC 备用。3）使用前，将所有试剂平衡至室温，将恒温箱调至37 。实验步骤1）样本的稀释：按 1:1 比例稀释血清标本，即 25L血清加入 25L PB中S 。阴阳性对照不需 要稀释。2）用吸附剂处理稀释后的血清：将30L稀释后的血清加入 150 L吸附剂中，彻底混匀。阴阳性对照不需吸附剂处理。处理后的血清要离心（ 13000r， 10min ）除去沉淀，以防干扰检测。3）在载玻片的每孔中加 15L吸附剂处理过的血清。在一个载玻片的每孔中加入15L不稀释的阳性对照，在另一

10、个载玻片的每孔中加入15L不稀释的阴性对照。4）将载玻片放入湿盒中， 37 温育 90 分钟。PBS中并放置在水5）用 PBS洗液的缓慢水流冲洗载玻片（避免直接冲入孔内）后，浸泡在平摇床上轻轻摇动 10 分钟。将载玻片用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。6）载玻片自然风干。7）每孔加入 15 L FITC结合物溶液（不需稀释）。8）将载玻片放入湿盒， 37 温育 30 分钟。9）重复 6 和 7 的洗涤步骤。10）加几小滴封闭介质，小心盖上盖玻片。11）尽快用荧光显微镜在 400 倍放大率下观察结果。如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8oC 不超过 24 小时。简明操作程序：判断4

11、结 果有效性判断每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应为：阳性对照 ：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光 （在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同 时观察到着色的合胞） ；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果 绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性对照 ：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。阳性结果荧光图谱：图谱：阴性结的荧光样本结果判断阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞

12、病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光 （在副流感病毒和呼吸道合胞 病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈 现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙 型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色1. 性能指标.灵敏度和特异性采用方法学对比进行阴阳性符合率分析，阳性符合率代表灵敏度，阴性符合率代表特 异性，结果如下：病原体对比方法样本数量阳性符合率阴性符合率嗜肺军团菌IFA82%肺炎支原体ELISA62%Q 热立克次体

13、IFA74%肺炎衣原体IFA61%腺病毒ELISA74%呼吸道合胞病毒ELISA97%甲型流感病毒ELISA46%乙型流感病毒ELISA40%副流感病毒ELISA36%5.2 精密度分析内精密度在相同实验条件下由同一个操作人员在同一次试验中对3 份血清（ 2 份阳性和 1 份阴性）分别进行 5 组加样检测。结果：滴度变化不超过一个稀释度。分析间精密度在 5 种不同条件下 （不同操作人员或不同试验日期）对 3 份血清（2 份阳性和 1 份阴性）进行检测。结果：滴度变化不超过一个稀释度。病原体干扰物质样本例数结果交叉反应和干扰嗜肺军团菌肺炎支原体、肺炎衣原体和 Q 热立克 次体、革兰氏阴性细菌 （

14、布鲁氏菌，沙 门氏菌）和抗核抗体20肺炎支原体嗜肺军团菌、肺炎衣原体和 Q 热立克 次体12立克次体肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团 菌、同种属的细菌 （发疹伤寒等的病原 体）和抗核抗体无交叉反应或干扰20肺炎衣原体20嗜肺军团菌、 Q 热立克次体和肺炎支 原体，同种属的细菌 （发疹伤寒等的病 原体）和抗核抗体腺病毒RSV、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒8呼吸道合胞病 毒腺病毒、甲型和乙型流感病毒和副流 感病毒或根据病毒分类（麻疹）10甲型流感病毒RSV、乙型流感病毒、腺病毒和副流感 病毒8乙型流感病毒RSV、甲型流感病毒、腺病毒和副流感 病毒8副流感病毒RSV、甲型和乙型流感病毒和腺病毒8其

15、它干扰研究对 25 份类风湿因子阳性血清进行了 2 种病毒和 2 种细菌抗原 IgG 和 IgM 抗体的检测。 对另外两份血清进行了每种抗原 IgG 和 IgM 抗体的检测。在 IgM 检测中，用抗 IgG 抗体对 血清进行了吸附处理。结果显示，吸附剂可以有效避免类风湿因子的干扰。经验证，吸附剂也可以有效地避免 IgG 抗体过量造成的假阴性。3、收费标准及效益分析目前江西省九项收费标准合计为 425元/ 例，该项目无需过多的设 备投资，主要设备为荧光显微镜， 此项目不仅能给使用单位带来 可观的经济效益，更重要的是，规避了使用单位使用无证产品带 来的法律风险、提高了使用单位的检测水平也就相应的提高了使 用单位的专业地位，这样的社会效益和经济效益必将给使用单位 带来更美好的发展前景 ！赣发改收费字 2005175 号项目项目编号三级 医院二级 医院一级 医院套用 方法合胞 病毒6呼吸 道合 胞病 毒抗 体测 定201512副流 感8副流 感抗 体检 测302520军团 菌2军团