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文档简介

1、吸附层析分配层析Hb才干与氧结合，称为氧和血红蛋白。3在人体生长不同时期，Hb的种类与比例不同。出生后3个月，HbA95%，而HbF降至1%以下。4血红蛋白合成受激素红细胞生成素、雄激素调理。5相对分子质量为64458。6降解产物为珠蛋白、血红素。分子量： 376.37 熔点： 290 水溶性： 0.07 g/L (20) 比旋光度： -要取决于要纯化的蛋白质分子量。要取决于要纯化的蛋白质分子量。 商品名为Sephadex，是最传统的凝胶介质，由葡萄糖与3-氯-1,2环氧丙烷交联剂)相互交联而成，交联度由环氧氯丙烷的百分比控制。由于交联度不同，Sephadex颗粒孔隙大小不同。交联度可用“吸水

2、量表示。即每克干凝胶所吸收的水分质量。商品凝胶的型号采用“吸水量的10倍数字来表示。例如每克凝胶吸水量为2.5g即定为G-25型。常用的葡萄糖凝胶有G-25,G-50,G-100,G-150和G-200几种型号。葡萄糖凝胶最大的缺陷是机械强度不高，凝胶颗粒易变形，分辨率不高。但葡萄糖凝胶的价钱最低。实验操作l1凝胶处置。将sephadex g-25凝胶干粉放入过量水中浸泡24h或沸水水浴2h。浸泡后，搅动凝胶再静置，待凝胶堆积后，倾去上层细粒悬液，如此反复多次。l2层析柱的预备。用清洗剂将层析柱仔细清洗干净。清洗过程中不能运用毛刷，以免擦伤层析柱子内壁，影响层析分别效果。固定好层析柱各处的接口

3、，用水检查层析柱各处的接口密封性。将清洗后的层析柱垂直固定在铁架台上。自柱底端出口的聚乙烯管内注入溶液以除去柱管内和尼龙网底部的气泡，待气泡排出后，使溶液在底部留至35cm高既可封锁出水口。l3装柱。 将处置好的凝胶在烧杯内用1倍提及的洗脱液搅拌成悬浮液，自柱顶部沿管内壁渐渐参与柱中。待底部凝胶堆积至5cm左右时，渐渐翻开低端出口管，随之继续缓慢添加凝胶悬浮液直至凝胶体积堆积至25cm高度为止。操作中留意防止气泡与节痕产生。v5加样与洗脱。 翻开平衡好的层析柱低端出口，使柱内溶液流向与床外表相切时封锁出口。将吸有0.5ml样品的加样滴灌在床外表上1mm处沿管内壁悄然转动加样，加完后，翻开底端出口使样品流至床外表，封锁出口，用少量洗脱液同样小心清洗管内壁12次，使样品流至床外表，然后加洗脱液加至距床外表23cm高，接上高位贮液瓶并调好流速即开场洗脱。留意在加样和洗脱过程中应缓慢参与液体，防止冲坏床外表，影响分辨率。v6搜集与测定。 搜集时可运用自动部分搜集器或手工操作，每管接洗脱液3ml.直至第二个洗脱峰降至基线附近。搜集后用721E型分光光度计在451

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