品管部QC岗位职责标准汇集8000030

1、颁发部门无菌检查操作规程接收部门生效日期操作标准-质量制定人制定日期文件编号审核人审核日期文件页数共7页批准人批准日期分发部门1.目的:建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。2. 范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。3. 责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。4. 定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。5. 内容：5. 1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌 衣放置架及挂钩、拖鞋等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，

2、局 部洁净度100级超净工作台。缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外 光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1 %新洁尔灭或2%甲酚液擦拭操作台及 可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌 1小时。在每次操作完 毕，同样用2%甲酚或0.1 %新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小 时。5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程 中需检查空气中菌落数。取直径 90mn双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯 旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37 T预培养48

3、小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间 的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露 30分钟后 将盖盖好，置35-37 C培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加 总数不得超过10个。无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径W 5卩m的粒数不得超过3.5个/ 升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s ；细菌菌落数平均1个，可根据无菌状况 定期置换过滤器。5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用 5%甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75 %酒精棉及拖鞋等。5.2仪器、用具：5.2.1真空泵

4、、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g ）、抽滤瓶（500ml）、 三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉） 、不锈钢 吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约 5cn），孔径应在0.45 0.02卩m ）载玻片、 洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。5.2.2用具的包扎：5.2.2.1移液管在移液管上端管内，松松地塞进少许原棉，然后放入不锈钢灭菌筒内。5.2.2.2 试管在管口塞上纱布棉塞。5.2.2.3无菌衣、裤、帽、口罩将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入布袋，扎紧袋口，再用牛皮纸

5、包好。5.2.2.4注射器洗涤干净的注射器及注射针头装配好后，放入垫有纱布的带盖容器内（饭第6页/共7页盒）一层层放好，上面盖上纱布，然后盖上容器的盖子，用牛皮纸包好。522.5滤器将检验合格后微孔滤膜先有水中浸泡湿润， 取出后固定在细菌过滤器的滤板 上，滤板下、滤膜上均用耐高温垫圈垫好，上好滤器。在灭菌前滤器的螺勿 拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入容器内，再将盛滤器的 容器盖好盖子，用牛皮纸包扎。5.2.3用具的灭菌：将包扎好的用具，在121土0.5 C蒸汽灭菌柜中灭菌30分钟，物品取出时切 勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压， 易致染菌，应置温 箱或或加

6、温烘干。5.3培养基、试剂：5.3.1 一般采用商品干燥培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养 基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。使用前，按要求分装灭菌好的细菌培养基须经30-35 C培养48小时，真菌培养基须经20-25 C培养72小时，证明无菌生长后方可使用。制备的需气菌、厌气菌培养基应半个月内用完，在供试品接种前，培养基指 示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约 1/5,否则须经水浴煮沸加热，只限加 热一次。5.3.2革兰氏碘液：先用3-5ml蒸馏水溶解2.0g碘化钾，再加入1.0g碘片，搅拌溶解后，加蒸 馏水稀释至300ml，摇匀。置密闭棕色瓶中备用。5.3.3结

7、晶紫染色液：将结紫1.0g溶解于20ml95%乙醇中后，与80ml1%草酸铵溶液相混合，静置 48小时使用。此液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。5.3.4沙黄染色液：将0.2g沙黄溶解于10ml95%乙醇中，待完全溶解后再加蒸馏水至 100ml。5.3.5生理盐水：称取9g氯化钠，加水1000ml溶解，分装后于121土 0.5 C湿热灭菌30分钟。供作稀释剂用536 75%乙醇量取无水乙醇75ml,加水稀释至100ml，摇匀，即得。5.3.7 0.1% 新洁尔灭：量取5炳洁尔灭20ml，加水稀释至约1000ml，摇匀，即得。5.4培养基灵敏度检查：5.4.1新购的干燥培养基或采用不同牌号原材

8、料的新鲜培养基，其质量均应符 合灵敏度检查要求。取藤黄微球菌Micrococcusluteus CMCC( B) 28001 的营养琼脂斜面和白色念珠菌Candida albicans CMCC (F) 98001的真菌培养基琼脂斜面的新 鲜培养物，分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；取生抱梭菌Clostridium sporogenes CMCC (B) 64941不含琼脂的需气、厌气培养基新 鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸至灭菌离心管内，离心，弃去上清液，沉淀菌体 用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌悬液。然后以 10倍系列稀释后，制成1ml中 含10-100个菌并计数。(2)取藤黄

9、微球菌、生抱梭菌的需气、厌气培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，取接种至霉菌培养基内，20-25 C用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。将藤黄微球菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为9ml 的需气、厌气菌培 养基 3管, 生抱梭菌的上述(1)或 的稀释液各1ml，分别接 种至每管装量为12ml的需气、厌气菌培 养基 3管, 白色念珠菌的上述(1)或 的稀释液各1ml，接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基 作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。结果判定：以每株菌接种后的培养基不得少

10、于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。5.4.2配制的培养基应在凉暗处保存，一般不得超过2周，临用前细菌和霉菌培养基分别经30-35 C和20-25 C培养不少于48小时和72小时，证明无菌生长 后方可使用。5.4.3需气菌、厌气菌培养基在试管中装量高度不得少于7Cm其指示剂氧化层不得超过培养基深度的1/5,否则须经水浴煮沸10分钟，但只限加热一次。无菌试验培养时间结束时，指示剂氧化层应不超过培养基深度的1/ 2。5.5对照用菌液的制备：5.5.1试验用菌种、菌种的复苏、菌种的接种与保存等均应按照“抗生素微生物 检定法”标准操作规程项下操作。5.5.2金黄色葡萄球菌菌液用接种环取金黄

11、色葡萄球菌Staphy-lococcusaureus CMCC (B) 26003的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至营养肉 汤培养基内，在30-35 C培养16-18小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:1065.5.3生抱梭菌菌液用接种环取生抱梭菌CMC( B) 64941的需气菌、厌气菌培 养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30-35 C培养18-24小时后，用灭菌生理盐水稀释成 1:10 6。5.5.4白色念珠菌菌液用接种环取白色念珠菌CMC( F) 98001的真菌琼脂培养 基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在 20-25 C培养24小 时后，用灭菌生理盐水稀释成

12、1:105。5.5.5上述制备的菌液，一般当日使用。5.6进入无菌室的操作要点：5.6.1根据试验程序，将用具物品搬入缓冲间，打开紫外光灯和空气过滤装置并使其工作1小时以上。5.6.2操作人员用肥皂水刷洗双手,关闭缓冲间紫外光灯,进入缓冲间内,关闭第 一层门,用2%来苏尔或0.1%新洁尔灭溶液洗双手,用消毒毛巾擦干,换上无菌衣、 帽、口罩及消毒鞋。5.6.3关闭无菌室内紫外光灯，进入第二层门并将用具搬至无菌室内，关闭无菌 室门。5.6.4凡进入无菌室后不应再外出取物品，因此，在每次试验中所用物品必须计 划好，并准备好备用物品。从进入第一层门直至无菌室内，随操作人员的进入应 喷雾2%来苏尔或0.

13、1 %新洁尔灭溶液。5.7检查法：5.7.1无菌检查法包括：直接接种法和薄膜过滤法。前者适用于非抗菌作用的供 试品；后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。5.7.2操作时，应先用0.1%新洁尔灭浸泡或擦拭容器表面后，以无菌的方法取内容物。5.7.3凡无菌检查中，均应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作阴性对照。5.7.4供试品制备：用灭菌镊取出注射器，在火焰旁将针芯插入针管并安上针头，盖为橡皮塞 时，用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取药液。按规定须稀释或灭 活的供试品，可直接或将瓶内供试液抽出至灭菌玻璃容器内进行灭活处理并稀 释至规定的体积和浓度；抽取瓶中内容液体时，应将供试品倒置并使针头

14、在液 面下。5.7.5直接接种法：按规定量取供试品，以无菌操作将该供试品分别接种于需气菌、 厌气菌培养 基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌液1ml，作阳性对照，另接种于真菌培养 基5管。轻轻摇动，使供试品与培养基混合。需气菌、厌气菌培养基管置30-35 C、 真菌培养基管置20-25 C培养7日。在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。 阳性对照管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培 养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长， 可取该培养液适量转种至同种新 鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养

15、液涂片，染色，用显微镜观察 是否有菌。5.7.6薄膜过滤法：将微孔滤膜过滤装置、抽滤瓶、排气管与真空泵相连，真空泵可置无菌室外。取规定量供试品，按规定的方法处理后，加入0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，混合后，通过装有孔径不大于0.45卩m的薄膜过滤器，减压抽干后，用0.9% 无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次至少100ml，取出滤膜分成3等份，分别加 入上述二种培养基中，按规定温度和时间培养。阳性对照管应根据供试品特性加 入相应对照菌液1ml （抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧 菌药物，以生抱梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌）。阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。5.8结果判断：当阳性对照管显浑浊并确有菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得 的结果判定：如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽浑浊但经证明并非 有菌生长，均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何