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文档简介

1、过氧化物酶染色(Washburn法)1. 实验原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶(POX), pox能分解过氧化氢释放岀新生氧，使四甲基联苯 胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氧化钠结合，再进一步 氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于细胞质内。2. 标本采集2.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子 严重缺陷引起的岀血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚 期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。2.2标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液2.3标本采集要求高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的 无菌注射器。临床上首选穿刺部位为骼后上棘；翻身困难，需多部 位穿刺患者可选择骼前上棘为穿刺

2、部分。小于3岁的小儿还 可选择胫骨头内侧为穿刺部位。3. 标本储存：室温避光处保存，若不能及时测定，可采用 95%乙醇固定2分钟，可保存数天。4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收的标准：溶血、稀释标本不能作测定。6试剂6.1联苯胺溶液（I液v紫红色）：联苯胺0.3g,加36%亚硝 基铁氧化钠溶液lml,再取95%乙醇加到100ml,水浴加热 助溶。贮于棕色瓶中，可保存数月。工作时应小心溶液污染 皮肤。6.2稀双氧水（II v液无色）：临用前将3%双氧水2滴放入盛 有5ml蒸馆水的滴瓶内，混匀7.操作步骤7.1新鲜干燥血片或骨髓片，滴加I液数滴（覆盖血膜为宜）, 室温放置12分钟，勿冲洗即滴加

3、II液数滴，混合后室温 放置8分钟，流水冲洗。7.2滴加95%乙醇脱色，水洗后瑞姬染液染色，复染时间约20分钟，复染后镜检观察结果。&结果判断可报告阳性程度或阳性细胞百分比。阴性：无蓝黑色颗粒和蓝黑色物质。弱阳性：蓝黑色颗粒量少且细小，相当于（十）。阳性：蓝黑色颗粒量多，粗细不一，相当于（+）。强阳性：细胞充满粗大紧密蓝黑色颗粒，相当于（+）。9 临床意义9.1粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以 下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。嗜酸性粒细胞颗 粒更粗大，呈深蓝色。嗜碱性细胞为阴性。9.2单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其 颗粒细小稀疏。9.3某些网状细胞及吞噬

4、细胞可呈不同程度的过氧化物酶弱 阳性反应。9.4所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。9.5该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴 细胞性白血病的关键化学染色。FAB分型规定前者阳性率V 3%。10.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度高。11.注意事项 11.1标本应新鲜，且未受其他化学物的污染。若标本采集后 不能及时测定，可采用95%乙醇固定2分钟后，可保存数天。11.2双氧水（II液）最适浓度为0.05mol/L左右，浓度过高, 将会抑制酶的活性。双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗 不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。涂片中粒细胞若 看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。若双氧水加于血片上不产生气泡，则示失效，应重做试验。11

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