实验3革兰氏染

1、实验内容实验内容一、一、细菌染色标本观察细菌染色标本观察 （操作）（操作） （革兰染色法）（革兰染色法）l【菌种】齿垢【菌种】齿垢l【试剂】生理盐水、革兰染液【试剂】生理盐水、革兰染液l【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、 显微镜等显微镜等l【方法】【方法】1 1、细菌涂片标本的制片、细菌涂片标本的制片 2 2、革兰染液染色、革兰染液染色 3 3、油镜下观察结果、油镜下观察结果 一一、革兰染色法革兰染色法由丹麦医生由丹麦医生hans christian gramhans christian gram于于18841884年创立年创立。

2、器具：器具：接种环（上）和接种针（下）接种环（上）和接种针（下） 柄约22cm25mm绝缘柄约7.5cm金属柄约14.5cm58cm安装环(针)的螺口(约8mm)细菌涂片的制备细菌涂片的制备l操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）aseptic area10-20cm外焰外焰焰芯焰芯内焰内焰菌液采取法菌液采取法细菌涂片的制备细菌涂片的制备细菌涂片的制备细菌涂片的制备 一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片涂片 干燥干燥 固定固定【操作步骤】固定的目的：固定的目的：l使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘

3、得更牢固；得更牢固；l可改变菌体对染料的通透性；可改变菌体对染料的通透性；l加热固定可杀死细菌，比较安全。加热固定可杀死细菌，比较安全。 结晶紫结晶紫 1 1 碘液碘液 1 1 95% 95% 乙醇乙醇 30” 30” 复红复红 1 1 冲洗冲洗 滤纸干燥滤纸干燥 油镜观察油镜观察冲洗冲洗冲洗冲洗冲洗冲洗二、革兰染液染色二、革兰染液染色初染初染媒染媒染脱色脱色复染复染【操作步骤】紫色（紫色（g）革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色革兰氏染色甲甲菌菌乙乙菌菌初染初染结晶紫结晶紫媒染媒染碘液碘液脱色脱色乙醇乙醇复染复染稀释复红稀释复红紫色（紫色（g）红色（红色（g-）革兰氏染色步骤示

4、意图革兰氏染色步骤示意图【结果】【结果】l细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌；细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌；l而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；阳性菌阳性菌紫色紫色 阴性菌阴性菌红色红色【革兰氏染色法的原理【革兰氏染色法的原理 】 1、细胞壁通透性学说、细胞壁通透性学说 2、等电点学说、等电点学说 3、化学学说、化学学说 通透性学说通透性学说g+菌菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。脂质含量少，乙醇不易进入。g-菌菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。大量脂质，乙醇

5、易渗入。 等电点学说g+菌菌等电点（等电点（pi23）g-菌菌等电点（等电点（pi45） 在相同在相同ph条件下条件下g+菌所带负电荷比菌所带负电荷比g-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。结合较牢固，不易脱色。化学学说化学学说g+菌菌菌体内含有大量菌体内含有大量核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐，可，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色使已着色的细菌不易被乙醇脱色g-菌菌 菌体内含菌体内含核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐很少，故易很少，故易被脱色被脱色注 意 事 项1.涂片的厚度。涂片的厚度。2.固定的程度。固定的程度。3.染色的时间控制：一一半一。染色的时间控制：一一半一。4.冲洗的方法，不要对着涂片区。冲洗的方法，不要对着涂片区。5.95% 乙醇脱色