实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法1017

1、实验六、植物组织中总糖和实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定还原性糖含量的测定1 1、实验目的、实验目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法掌握总糖和还原糖含量的测定方法 学习总糖和还原糖提取的方法学习总糖和还原糖提取的方法2 2、实验重点和难点、实验重点和难点 利用利用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的二硝基水杨酸法测定还原糖含量的实验原理实验原理 多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖3 3、实验原理、实验原理3.13.1、还原糖的概念、还原糖的概念 指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖

2、（如麦芽糖、乳糖等）；糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖多为非还原糖。多糖多为非还原糖。 葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，故它们都是还原糖。故它们都是还原糖。3.23.2、3,5-3,5-二硝基水杨酸比色法二硝基水杨酸比色法 总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用别提取出来，对没

3、有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，物，3,5-3,5-二硝基水杨酸二硝基水杨酸( (黄色）则被还原为棕红色黄色）则被还原为棕红色的的3-3-氨基氨基-5-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在分光光度计，在540nm540nm波长下测

4、定光密度值，查对波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。的含量。 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.90.9。相对密度法相对密度法折光法折光法旋光法旋光法物理法物理法3.33.3、糖含量测定方法、糖含量测定方法化学法化学法还原糖法还原糖法碘量法碘量法比色法比色法直接滴定法直接滴定法 (改良的兰改良的兰爱农法）爱农法） 高锰酸钾法高锰酸钾法 萨氏法萨氏法 3，5二硝基水杨酸二硝基水杨酸 酚酚硫

5、酸法硫酸法蒽酮法蒽酮法半胱氨酸半胱氨酸咔唑法咔唑法 纸色谱纸色谱 薄层色谱薄层色谱 gc hplc 半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖 葡萄糖氧化酶测葡萄糖葡萄糖氧化酶测葡萄糖 发酵法发酵法 测不可发酵糖测不可发酵糖 重量法重量法测果胶、纤维素、膳食纤维素测果胶、纤维素、膳食纤维素 色谱法色谱法 酶法酶法4 4、操作步骤、操作步骤4.14.1、制定标准曲线、制定标准曲线管号管号012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81.0蒸馏水蒸馏水/ml1.00.80.60.40.20dns试剂试剂/ml2.02.02.02.02.02.0沸水浴中准确煮沸沸

6、水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水蒸馏水/ml9.09.09.09.09.09.0葡萄糖浓度葡萄糖浓度/mg/ml00.20.40.60.81.0a5404.24.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取(1)还原糖：30ml水冲研钵2-3次1g土豆研成匀浆3ml水三角瓶中50水浴0.5h冷却定到100ml混匀,过滤取滤液作为还原糖提取液(2)总糖：1g土豆研成匀浆3ml水三角瓶中沸水浴0.5h冷却,用naoh中和,加水定容到100ml混匀,过滤取滤液作为总糖提取液12ml水冲研钵2-3次10ml6mhcli2-ki检测4.34.3、用、用3,5-3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、二硝基水杨酸法测还原糖、总糖含量总糖含量管号管号空白对照空白对照还原糖还原糖样液管样液管总糖样液管总糖样液管样液样液/ml01.01.0水水1.000dns试剂试剂/ml2.02.02.0沸水浴中准确煮沸沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水蒸馏水/ml9.09.09.0a5405 5、数据处理与问题、数据处理与问题 5.1、计算浓度 5.