初始污染菌检查

1、生物学检查生物学检查n初始污染菌检查n空气中细菌总数检测方法n物体表明和生产人员手细菌总数检测方法微生物学检查微生物学检查无菌检查无菌检查微生物限度检查微生物限度检查细菌、真菌数量细菌、真菌数量控制菌控制菌其他（其他（初始污染菌初始污染菌） 指标含义（！）指标含义（！） 通过测定检品细菌总数可用来判明检通过测定检品细菌总数可用来判明检品品细菌细菌污染的程度，以及生产单位所用的污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综综合依据。合依据。gb15980-1995 一次性

2、使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版 附录 微生物限度检查法 和检验量和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品（10个包装）供试液制备供试液制备培养培养菌落计数菌落计数采样方法采样方法 供试液制备1. 供试品是供试品是敷料、可以破坏性类敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取可用无菌手续称取10g,放入放入100ml灭菌生理盐水中灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为充分振荡后取样。作为1：10的供试液。的供试液。2.供试品是供试品是液体液体取取10ml加至加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。

3、作为灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供的供试液。试液。3.对供试品对供试品不能采用破坏性不能采用破坏性取样可用浸有取样可用浸有无菌无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2.加入灭菌生理盐水加入灭菌生理盐水100ml。作为供试液。作为供试液。4.可用破坏性可用破坏性方法取样供试品：方法取样供试品：（参照（参照中华人民共和国中华人民共和国药典药典2010年规定进行年规定进行)5. 对有对有内腔内腔的医疗用器的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后 取样。取样。6. 对

4、一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械对一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械:直接用直接用定量洗脱液（定量洗脱液（1ml/10cm2）冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。梯度稀释梯度稀释1ml1ml1ml1ml1ml供试液供试液9mlnacl9mlnacl1:101:1001:1000 将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，） n灭菌产品管道类内腔10cfu/件次，外部100cfu/件次，非管道类100cfu/件次，敷料类100cfu/g；消毒产品1000cfu

5、/件次或重量（g）供试液制备供试液制备推荐的制备方法样样 品品 制制 备备供试液制备供试液制备梯度稀释梯度稀释加加 样样用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入，移入100ml灭菌生理盐水中，灭菌生理盐水中，不时振摇。作为不时振摇。作为1：10供试液。供试液。供试液供试液10倍递减稀释。倍递减稀释。尽量避免丝线等杂物的混入。尽量避免丝线等杂物的混入。（1）每个稀释级各吸取）每个稀释级各吸取1ml至每个灭至每个灭 菌平皿，每个稀释级注菌平皿，每个稀释级注5个平皿。个平皿。（2）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 时，倾注上

6、述各个平皿时，倾注上述各个平皿15ml，另，另倾注一个注入倾注一个注入1ml稀释液（灭菌生理盐水）稀释液（灭菌生理盐水）灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。纱布模拟纱布模拟培养培养琼脂凝固后，倒置，琼脂凝固后，倒置，37 培培养养48h基本概念 细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。限制条件 平板菌落计数法的

7、特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下：计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下：以菌落数为基础。以菌落数为基础。 cfu(colony forming units):一个菌落就是一个细菌形成单位，它一个菌落就是一个细菌形成单位，它 可以由一个也可以由多个菌细胞形成。可以由一个也可以由多个菌细胞形成。受特定培养基和培养条件限制。受特定培养基和培养条件限制。有繁殖能力的菌细胞才能认定有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌活菌”。细菌计数细菌计数菌落特征菌落特征(氯化三苯基四氮唑试剂)，平皿

8、号细菌数平行行间1：101:100阴性阴性对照对照3748h菌落计数菌落计数373748h h菌落计数菌落计数 菌落均值菌落均值1、选取平均菌落数在、选取平均菌落数在30300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。 如只有如只有1个稀释级平均菌落数在个稀释级平均菌落数在30300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀之间，则将稀释级的菌落数乘以稀 释倍数报告。释倍数报告。2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，则先计算两稀释级菌落之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数高稀释级的平均平板菌落

9、数稀释倍数稀释倍数比值比值= 低稀释级的平均平板菌落数低稀释级的平均平板菌落数稀释倍数稀释倍数当比值当比值2时，则以时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值当比值2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。补充：如有补充：如有3个稀释级，平均菌落数均在个稀释级，平均菌落数均在30300之间，则以后之间，则以后2级计算级间比级计算级间比值报告。（增加解释值报告。（增加解释2）菌落计数基本规则菌落计数基本规则3、如各稀释级平均菌落数均在、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀以上，则

10、按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按稀释度最低的平均菌以下，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。落数乘以稀释倍数报告。4、如各稀释级平均菌落数均不在、如各稀释级平均菌落数均不在30300之间，则以最接近之间，则以最接近30或或300的稀释级的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。平均菌落数乘以稀释倍数报告。5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应时，应报告菌数为报告菌数为10个个/g或或ml。6、菌落计数的报告，菌落数在、

11、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于以内时，按实有数值报告。大于100时，采用时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为为“不可计不可计”时，应表明样品的稀释度时，应表明样品的稀释度菌落计数基本规则菌落计数基本规则细菌计数结果及报告方法空气中细菌总数检测方法空气中细菌总数检测方法 n测定空气中动态下细菌总数。 采用：车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，将普通营养琼脂平板（9cm直径）

12、按上述采样点和高度布放，暴露15min后立即关盖，于37温箱培养24h后观察后果，求出5个或3个采样点的平均菌数计算公式计算公式n菌数/m3=式中： a平板面积，cm2； t平板暴露时间，min； n平均菌落数。灭菌和消毒产品分别500和2000cfu/m3atn50000物体表面和生产人员手细菌总物体表面和生产人员手细菌总数检测方法数检测方法 :n将内径为5cm5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，根据物体表面积大小，采平行样14个，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的采样管中。n对生产人员手采样：被检人五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂抹