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文档简介

1、利用大肠杆菌消费胰岛素利用大肠杆菌消费胰岛素基因工程育种 胰岛素作用机理 胰岛素是机体内独一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。作用机理属于受体酪氨酸激酶机制。一调理糖代谢胰岛素能促进全身组织对葡萄糖的摄取和利用，并抑制糖原分解和糖原异生，因此，胰岛素有降低血糖的作用。 促进肌肉、脂肪组织等处的靶细胞细胞膜载体将血液中的葡萄糖转运入细胞。经过共价修饰加强磷酸二酯酶活性、降低cAMP程度、升高cGMP浓度，从而使糖原合成酶活性添加、磷酸化酶活性降低，加速糖原合成、抑制糖原分解。经过激活丙酮酸脱氢酶磷酸酶而使丙酮酸脱氢酶激活，加速丙酮酸氧化为乙酰辅酶A，加快糖的有氧氧化。

2、经过抑制PEP羧激酶的合成以及减少糖异生的原料，抑制糖异生。抑制脂肪组织内的激素敏感性脂肪酶，减缓脂肪发动，使组织利用葡萄糖添加。二调理脂肪代谢胰岛素能促进脂肪的合成与储存，使血中游离脂肪酸减少，同时抑制脂肪的分解氧化。胰岛素缺乏可呵斥脂肪代谢紊乱，脂肪储存减少，分解加强，血脂升高，久之可引起动脉硬化，进而导致心脑血管的严重疾患；与此同时，由于脂肪分解加强，生成大量酮体，出现酮症酸中毒。三调理蛋白质代谢胰岛素一方面促进细胞对氨基酸的摄取和蛋白质的合成，一方面抑制蛋白质的分解，因此有利于生长。腺垂体生长激素的促蛋白质合成作用，必需有胰岛素的存在才干表现出来。因此，对于生长来说，胰岛素也是不可短少

3、的激素之一。 四其它功能胰岛素可促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入细胞内；可促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。2.提取质粒 从大肠杆菌的细胞质中提取质粒,质粒为环状。此质粒将作为胰岛素基因的载体。 1.碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。 2.煮沸法 3.基因重组 取出目的基因与质粒,先利用同种限制性内切酶将质粒切开,再运用DNA衔接酶将目的基因与质粒“缝合,构成一个能表达出胰岛素的DNA质粒。 4.将质粒送回大肠杆菌 在大肠杆菌的培育液中参与含有Ca+的物质,如CaCl2,这使细胞会吸收外源基因.此时将重组的质粒也放入培育液中,大肠杆菌便会将重组质粒吸收. 将大肠杆菌用氯化钙处置，以增大大肠杆菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒可以进入受体细胞，此时的细胞处于感受态理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和包容外来DNA的生理形状。5.胰岛素的产生 在大肠杆菌内,质粒经过表达转录与翻译后,便产生出胰岛素蛋白质.经过大肠杆菌的大量繁衍,便可大量消费出胰岛素! 留意

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