ALK的病理学和诊断指南ppt课件

1、前往目录前往目录 阳性结果阳性结果规范：分开的红规范：分开的红/绿信号绿信号非典型：单个红点非典型：单个红点非典型：分开非典型：分开 + 单个红点单个红点 ALK 阳性的定义阳性的定义: 15% 的细胞呈阳性的细胞呈阳性Varella-Garcia et al., ASCO 2021; Abs #10533 阴性结果阴性结果1 规范：交融信号规范：交融信号非典型：单个绿点非典型：单个绿点1. Varella-Garcia et al., ASCO 2021; Abs #10533肿瘤区域确实定肿瘤区域确实定 对一玻片进展对一玻片进展H&E染色染色 标出肿瘤区域不包括坏死区域、原位癌和小细胞癌标

2、出肿瘤区域不包括坏死区域、原位癌和小细胞癌 用标志好的用标志好的H&E染色玻片作为模板，在未染色玻片上标注肿瘤区域染色玻片作为模板，在未染色玻片上标注肿瘤区域* (后续步骤参见未后续步骤参见未染色玻片染色玻片)FFPE样本的制备样本的制备从组织块上切下从组织块上切下 2段，厚度段，厚度51m置于外表带正电荷的载玻片上置于外表带正电荷的载玻片上去石蜡去石蜡预处置预处置蛋白酶处置蛋白酶处置与探针杂交与探针杂交清洗清洗 (杂交当日杂交当日)DAPI复染复染预备好玻片自以下步骤开场*FISH法中应运用来自H&E染色的延续10片内的切片Vysis ALK Break Apart FISH Probe K

3、it Package InsertVysis ALK Break Apart FISH Probe Kit Package Insert 至少计数至少计数50个肿瘤细胞以确保结果的准确性个肿瘤细胞以确保结果的准确性 1 假设红色和绿色探针分别假设红色和绿色探针分别 2个信号直径个信号直径 ，那么以为，那么以为FISH信号为阳性信号为阳性1 ALK 重排能够普及整个肿瘤而非部分重排能够普及整个肿瘤而非部分2 约约5%-11%的细胞会出现假阳性分别的细胞会出现假阳性分别1,2 ALK重排细胞比例的添加与克唑替尼治疗的肿瘤缓解程度重排细胞比例的添加与克唑替尼治疗的肿瘤缓解程度并无关联并无关联3Var

4、ella Garcia et al., IASLC 2021; Abs #MTE36.12. Camidge et al., Clin Cancer Res 2021; 16:5581-55903. Camidge, IASLC 2021; Abs #MO04.04Courtesy I. Wistuba 病理报告要运用准确的言语，如病理报告要运用准确的言语，如 “EML4-ALK 重排重排 15% “ALK 异常异常 还包括其他变异，如还包括其他变异，如ALK基因拷贝数添加，此变异未被确基因拷贝数添加，此变异未被确以为对以为对ALK抑制剂应对的预测性标志物抑制剂应对的预测性标志物1Courte

5、sy I. Wistuba1. Raftopoulos et al., IASLC 2021, Abs #O05.06 运用高敏感度检测系统后，越来越多的数据支持运用高敏感度检测系统后，越来越多的数据支持IHC可用作初步筛查可用作初步筛查的方法的方法 敏感度和特异度可达敏感度和特异度可达100%，虽然在不同研讨中存在差别，虽然在不同研讨中存在差别 与与FISH相比，相比，IHC是一种更常规的技术，本钱低、任务量相对小是一种更常规的技术，本钱低、任务量相对小ALK IHCFISH患者患者 1:IHC显示显示ALK表达量高，表达量高，FISH显示重排显示重排患者患者2:IHC显示无显示无ALK表达

6、，表达，FISH显示无重排显示无重排Mino-Kenudson Clin Cancer Res 2021; 16:1561-1571. 从临床实验过渡到大规模运用从临床实验过渡到大规模运用IHC 前，还需求对以下方面进展规范：前，还需求对以下方面进展规范： 最好的抗体和检测系统是什么最好的抗体和检测系统是什么 应采用哪种评分系统应采用哪种评分系统 有哪些生物学相关的截止点有哪些生物学相关的截止点 采用适当的质量控制采用适当的质量控制抗体研究数量供货商敏感度范围特异度范围ALK18Dako9%-100%97%-100%5A46Abcam, Novocastra18%-100%96%-100%D5

7、F31Cell Signaling100%99%Adapted from Yi et al., J Thorac Oncol 2021; 6:459-465and Mitsudomi et al., ASCO 2021, Abs #7534 多重多重 RT-PCR用于筛查一切用于筛查一切ALK 交融变异体交融变异体1,2 显色原位杂交技术显色原位杂交技术(CISH) 3 运用规范明视野显微镜，运用规范明视野显微镜， 数据可存档数据可存档 465例样本结果显示与例样本结果显示与FISH (k=0.92) 和和IHC (k=0.82)高度一致高度一致分别型CISH 探针显示ALK 重排Takeuc

8、hi 等报道的新发现的EML4-ALK变异体4的RT-PCR结果1. Takeuchi et al., Clin Cancer Res 2021; 14:6618-66242. Li et al., ASCO 2021; Abs #105203. Kim et al., IASLC 2021; Abs #O05.02EML4-ALK融合变异体V1V2V3AV3BV4V5AV5BV6V7EML4-ALK.V1+-EML4-ALK.V2-+-EML4-ALK.V3A-+-EML4-ALK.V3B- +-EML4-ALK.V3AB-+-EML4-ALK.V5A-+-EML4-ALK.V5B-+-EML4-ALK.V6-+-EML4-ALK.V5A/6-+ - +-EML4-ALK.V4-+-EML4-ALK.V7-+EML4-ALK.V4/7-+-+Danenberg et al., ASCO 2021, Abs #10535 现行指南中建议进展现行指南中建议进展EGFR 突变检测突变检测 提议在规程中添加提议在规程中添加ALK 筛查；随着诊断时间的缩短以及更好利用标本，筛查；随着诊断时间的缩短以及更好利用标本，方法将不断被优化方法将不断被优化Mitsudomi et al. ASCO 2021; Abs #7534 顺序同时Horn and Pao, 临床肿瘤学杂