第4节生物技术

1、新型注射（植入）给药系统非注射给药系统第三节第三节 蛋白质类药物新的给药系统蛋白质类药物新的给药系统新型注射（植入）新型注射（植入）给药系统给药系统控释微球制剂脉冲式给药系统复乳液中干燥法低温喷雾提取法喷雾干燥法超临界萃取法控制型微球制剂应用的高分子聚合物控制型微球制剂应用的高分子聚合物n目前已经实际应用的生物可降解材料有目前已经实际应用的生物可降解材料有聚乳酸（聚乳酸（plapla）或聚丙交酯）或聚丙交酯- -乙交酯乙交酯（plgaplga，聚乳酸乙醇共聚物），改变丙，聚乳酸乙醇共聚物），改变丙交酯与乙交酯的比例或分子量，可得到交酯与乙交酯的比例或分子量，可得到不同时间生物降解性质的材料。不

2、同时间生物降解性质的材料。首次经fda批准的蛋白质类药物微球制剂是-醋酸亮丙瑞林聚丙交酯-乙交酯微球。醋酸亮丙瑞林聚丙交酯-乙交酯微球怎么制备的？为什么要制成微球？复乳液中干燥法例例 亮丙瑞林微球的制备亮丙瑞林微球的制备治疗前列腺癌治疗前列腺癌制备制备 复乳液中干燥法复乳液中干燥法内水相内水相: 醋酸亮丙瑞林醋酸亮丙瑞林,明胶明胶,水水,混合加混合加热至热至60 油油 相相:聚乳酸聚乳酸(pla) 或或 聚乳酸乙醇酸聚乳酸乙醇酸共聚物共聚物 plga 溶于二氯甲烷溶于二氯甲烷 制制 备备 工工 艺艺 内水相内水相 油相油相 油相加入水相制成油相加入水相制成w/o微乳剂微乳剂 冷却至冷却至15

3、在在5000r/min下用喷嘴下用喷嘴 聚乙烯醇水溶液聚乙烯醇水溶液 w/o/w乳剂乳剂 30 下缓慢搅拌下缓慢搅拌2h或旋转蒸发除去二氯甲烷或旋转蒸发除去二氯甲烷, 得硬化的圆形微球得硬化的圆形微球 醋酸亮丙瑞林体内外释放与plga(聚乳酸乙醇共聚物）平均分子量的关系n 体外释放 体内释放n时间 剩余醋酸 plga 剩余醋酸 plga n ( d) 亮丙瑞林% 平均分子量 亮丙瑞林% 平均分子量n0 100 12000 100 12000n7 70 10500 79 10500n14 57 9400 60 8800n21 37 5600 37 5000n28 21 5000 30 2800n

4、35 0 2600 20 2200说明醋酸亮丙瑞林随plga的降解而不断释放，在体内外大体一致，体内能维持一个月。低温喷雾提取法n生物大分子药物与保护剂的均匀粉末加n生物可降解性聚合物的有机溶液中n混合成混悬液n喷头雾化后喷入冰冻的乙醇溶液低温-70聚合物载体中有机溶液在乙醇中不断扩散，分离微球，低温干燥除去乙醇得粉末状微球喷雾干燥法生物大分子药物及其稳定剂的混合粉末或水溶液溶有高分子聚合物的有机溶剂混合形成混悬液经喷嘴雾化干燥制得微球超临界萃取法ress超临界溶液快速膨胀技术包埋在聚乳酸小球中洛伐他丁晶体gas气体反溶剂技术制备了氢化可的松微球 肝炎、破伤风、白喉等疾病所用预防药物肝炎、破伤

5、风、白喉等疾病所用预防药物即疫苗或类毒素均为抗原蛋白，其中乙肝疫苗即疫苗或类毒素均为抗原蛋白，其中乙肝疫苗已能用生物技术制造。使用这些疫苗全程免疫已能用生物技术制造。使用这些疫苗全程免疫至少进行三次接种，才能确证免疫效果，由于至少进行三次接种，才能确证免疫效果，由于种种原因，全世界不能完成全程免疫接种而发种种原因，全世界不能完成全程免疫接种而发生辍种率达生辍种率达70%70%，因此为了提高免疫接种的覆盖，因此为了提高免疫接种的覆盖率，减少一些重大疾病的死亡率，世界卫生组率，减少一些重大疾病的死亡率，世界卫生组织疫苗发展规化主要目标之一，就是将多剂疫织疫苗发展规化主要目标之一，就是将多剂疫苗发展

6、为单剂疫苗，其中之一就是研制成脉冲苗发展为单剂疫苗，其中之一就是研制成脉冲式给药系统。此项研究，目前正在研究中。式给药系统。此项研究，目前正在研究中。脉冲式给药系统非注射给药系统鼻腔给药系统口服给药系统直肠给药系统口腔黏膜给药系统经皮给药系统肺部给药系统 降钙素、催产素、加压素、胰岛素、lhrh激动剂布舍瑞林 甘胆酸盐、胆酸盐、去氧胆酸盐、葡萄糖胆酸盐鹅去氧胆酸盐、乌索去氧胆酸盐等 有些分子量大的药物透过性差，生物利用度低，吸收不规则，且产生局部刺激性等，应用受到限制。 鼻腔给药系统上市的药物常用的鼻腔黏膜促进剂存在的问题n蛋白质类口服给药主要存在的问题：蛋白质类口服给药主要存在的问题： (1

7、)在胃内酸催化降解；在胃内酸催化降解； (2)在胃肠道内的酶水解；在胃肠道内的酶水解； (3)对胃肠道粘膜的透过性差；对胃肠道粘膜的透过性差； (4)受肝的首过效应作用。受肝的首过效应作用。口服给药系统 胰岛素口服给药是人们非常关注胰岛素口服给药是人们非常关注的热点，因为目前胰岛素主要靠注射的热点，因为目前胰岛素主要靠注射给药，而且每天频繁注射（给药，而且每天频繁注射（3-4次），次），这给慢性糖尿病患者身体、心理与经这给慢性糖尿病患者身体、心理与经济上的极大负担。济上的极大负担。 无疑是对药学工作者的一个严峻无疑是对药学工作者的一个严峻的挑战。的挑战。 目前研究的几种主要剂型微乳制剂纳米囊和

8、纳米粒胰岛素肠溶胶囊胰岛素脂质体新型吸收促进剂的应用n-8-(2-羟苯基）-氨基辛酸钠 snac与胰岛素形成非共价键结合的物理复合物20-25分钟达到峰浓度；注射胰岛素45分钟时达到峰浓度生物黏附材料与肠溶性材料的联合应用技术n常用的直肠吸收促进剂n水杨酸、5-甲氧基水杨酸、去氧胆酸钠、聚氧乙烯、烯胺衍生物如d-甘氨酸钠、d-亮氨酸钠，d-苯丙氨酸钠等。直肠给药系统口腔黏膜给药系统胰岛素口腔黏膜剂内层胰岛素与甘胆酸钠外周黏附层hpc羟丙基纤维素与卡波普 第四节 蛋白质类药物制剂的评价方法制剂中药物的含量测定制剂中药物的活性测定制剂中药物的含量测定紫外分光光度法反相高效液相色谱法bca法（二辛可

9、宁酸)nbca法bca(bicinchoninincacid )二二辛可宁酸与二价铜离子的硫酸辛可宁酸与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即合一起即成为苹果绿，即bca工作试剂。在碱性条件工作试剂。在碱性条件下，下，bca与蛋白质结合时，与蛋白质结合时，蛋白质将蛋白质将cu2 还原为还原为cu ，一，一个个cu 螯合二个螯合二个bca分子，工分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。蛋白质浓度成正比。制剂中药物的活性测定酶联免疫测定法体外药效方法体内药效

10、学方法获得待分析物的未标定抗体获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体载体连接形成固相抗体 洗涤除去未结合的洗涤除去未结合的抗体及杂质抗体及杂质 加入封闭蛋白溶液以封闭载体加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点表面残留的蛋白结合位点洗涤并除去未结合的封闭蛋白洗涤并除去未结合的封闭蛋白加受检标本（抗原）形成加受检标本（抗原）形成固相抗体抗原复合物固相抗体抗原复合物 洗涤除去其他洗涤除去其他未结合的物质未结合的物质 加酶标抗体生成加酶标抗体生成抗体抗体待测抗原待测抗原酶标记抗体酶标记抗体的复合物的复合物 彻底洗涤彻底洗涤未结合的未结合的 酶标抗体酶标抗体 加底物进行加底物进行酶催化反应酶催化反应 根据颜色反应的根据颜色反应的程度进行该抗原程度进行该抗原的定性或定量测定的定性或定量测定酶联免疫测量法elisa试剂盒试剂盒酶联免疫井酶联免疫井dnm-9602gdnm-9602g酶标分析仪酶标分析仪dnm-9602 dnm-9602 标配酶标分析仪标配酶标分析仪 dnm-9602adnm-9602a酶标分析仪酶标分析仪几种酶标分析仪几种酶标分析仪复习题n1、生物技术药物制剂的概念n2 2、蛋白质的理化性质有哪些？、蛋白质的理化性质有