HPLC法测定果蔬中维生素C

1、农业基础科学现代农业科技2011年第3期表1精密度试验结果样品变异系数%123456 平均刀豆角 31.6031.2030.8030.930.3031.2031.000.441.42 西瓜皮9.809.409.509.49.309.309.450.192.01维生素C含量 mg/100g标准差mg/100g注表中检出量均为5次平行测定平均值。表2回收率样品样品含量nig/100g加入标样量mg检出量mg回收率%苹果 11.9220.019.4497.2 菜瓜 14.2020.018.4492.2 辣椒 155.9050.054.90109.8 西红柿 16.0820.019.4497.2 杏1

2、5.3620.019.9499.7维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它能增强人体抵抗力，预防坏 血病，因此又称抗坏血酸。维生素C分布很广，主要存在于植物性食物的果实、 浆果和蔬菜中。因此，测定水果及蔬菜中的维生素C含量，对评定其营养 价值有重要意义。维生素C的测定方法有多种，包括容量法、比色法以及荧光光度法、电位 法1和紫外分光光度法2-3等，各种方法均有特长和不足。高效液相色谱是近 年来发展起来的一种快速、高效的分离技术。运用这一现代色谱工具进行维生 素C的检测，国内外曾有报道4-60在此基础上，开展了液相色谱测定果蔬中维 生素C的工作，效果较好。现将试验情况总结如下。1材料与方法1.

3、1仪器与试剂仪器:高效液相色谱仪，美国Wateis201型，包括510泵、U6K进样器、481紫外检测器、740数据处理机;MILLI-Q型超纯水装 置；GL-20型高速冷冻离心机。试剂:磷酸二氢钱，偏磷酸，浓磷酸，抗坏血酸；均 为分析纯。1.2样品前处理用超纯水配制0.5%的磷酸二氢披，用0.45pm膜过滤，将浓磷酸调至pH值为2.3作为流动相。标样配制:准确称取维生素C标样50mg ,用3%偏磷酸定容至500111L容量瓶摇匀，再吸取ImL定容至lOOniL。样品制备:大量样品,迅速称取切碎样品100g加等量3%偏磷酸,倒入组织捣碎机捣碎,称取匀浆20.0g ,用3%偏磷酸定容至lOOni

4、L容量瓶。少量样品，称取样品15g倒入研钵内，加入少 量3%偏磷酸充分研磨成糊状，全部转移定容至lOOmL容量瓶。将定容好的容量 瓶超声提取lOmin，取上清液5mL , 0C、270017mm离心lOniui,用0.45pm膜过 滤后进样。1.3试验方法色谱条件住谱柱NOVA PAKC 18;流动相0.5%NH4H 2PO 4,流速lniL/niui;纸速lcni/niui;洗脱时间2.5mm ;检测器481紫外检测器；波长243.5nm ;灵敏度O.lAuFS ;进样量10|.iL o根据经典的保留值法和样品中维生素C与加入标样后色谱峰迭加来定性。将 标准液注入色谱柱中，经740数据处理机

5、采用单点外标法进行定量，直接打印出分 析结果。2结果与分析2.1精密度配制0.0050mg/niL的标准维生素C溶液，进样量从2.5pL开始，以响应值与进样量绘制标准曲线均成线性。试验结果见表1。回归方程为:y=1.030x -2.431x10-5(1=0.9997HPLC法测定果蔬中维生素C郝学宁刘雪莲(青海省农林科学院分析测试中心，青海西宁810016摘要通过高效液相色谱法和国标法2种方法测定了果蔬中的维生素C ,通过精 密度、准确度、回收率等方法对比结果表明:液相色谱法是一种高效、快速、 准确、高灵敏度的分离分析方法。关键词HPLC法；果蔬；维生素C ;测定中图分类号0652.63文献标

6、识码A文 章编号 1007-5739(2011 03-0030-02Deteimination of Vitamin C in Vegetables and Fnnts with HPLC MethodHAO Xue-nuig HAO Qiang-qiang LIU Xue-lian(Analysis and Testing Center of Qinghai Agiicultuie and Foiestiy Sciences , Xinmg Qingliai 810016Abstract In this paper , high performance liquid cluomatogiap

7、hv and national standard method were used to deteimnie V C ui flints and vegetables. Tlirough the precision , accuracy, lecoveiy methods , etc., such as comparative results showed that liquid clHomatography was an efficient, fast, accurate and lugli sensitivity separation analysis method.作者简介郝学宁（195

8、5-,男,河北永清人,高级实验师，从事农化分析工作。收稿日期2010-12-18试验条件下维生素C的最小检测量为2.5xl0-9g o2.2方法可靠性历经制样全过程，在不同基样中加入维生素C,回收考察其准确度，结果见表2。由表2可知，样品平均回收率为99.2%。标准维生素C和典型样品的色谱图见图1。部分样品的测定结果与2, 6-二氯苯酚弓|喙酚钠盐滴定30法结果比较见表3。2.3柱效在有预柱的情况下，1根柱子经过500余次的进样，柱效无明显变化。柱压一直保持在1500Pa左右。维生素C峰的保留时间稳定 在 1.8min ls o2.4维生素C溶液的可保存性在（202 C的室温下，经连续测定维生

9、素C的氧化程度，结果见表4。由表4可知，标样在试验浓度下，24h内无变化，48h内稍有下降；而样品中由于存在抗坏血酸酶,211内分别比原浓度下降3.2%和6.0%, 4811内分别比原浓度下降14.5%和11.2%。因此，样品应迅速处理后立即上机为好。3结论试验结果表明，反相HPLC -UV检测法具有样品用量少、预处理简单、流动相无毒、速度快、选择性好、灵敏度高等特点 7-8,具有较高的精密度和准确度。与普通应用的2, 6-二氯苯酚卩弭朵酚钠盐滴定 法比较，定量结果基本一致，但对常有色素物质存在,造成滴定法滴定终点观察困 难的生物组织液更能发挥其特长。4参考文献1 陈秋丽，甘振威，张娅婕，等电

10、位滴定法测定深色蔬菜和水果中的维生素CJ.吉林大学学报：医学版，2004(5:821-822.2 李军.紫外分光光度法测定果蔬中的维生素CJ.河北职业技术师范学院学报,2000, 14(1:41-44.3 耿立威.西红柿中维生素C的分光光度法测定J.吉林师范大学学报启然科学版,2003,24(3:91-92.4 王雪梅，高素莲，于金文.HPLC法测定新鲜草莓中水溶性维生素J.食品科 学,1999,20(5:52-53.5 冯德明，周晓霞用高效液相色谱(HPLC法测定饮料中维生素C的含量J饮料工业，2003,6(1:43-46.6 李连朝，康靖全，杨德祥，等用反相高效液相色谱法测定食物、药物和生

11、理液中的维生素CJ.色谱，1986(6:335. 7陶宗晋.色谱法M.北京科学 出版社,1986:69.8中国土壤学会农业化学专业委员会.土壤农业化学常规分析方法M.北京： 科学出版社，1983:338.(上接第29页K =936.3712, K =893.8137。由比较知，稻-鱼区的环境容纳量为K =936.3712,稻-鸭-鱼区的环境容纳量为 K =893.8137,易知在这2个区鱼鸭的活动对蜘蛛的数量影响不大，稻-鸭-鱼区的K值稍小，则说明鸭活动对 蜘蛛的数量变化稍有影响，而在常规用药区，由于化学农药的破坏性作用， K值最大仅为444.2196,这也反映了化学农药的副作用，化学农药的不

12、合理施用会 对生态环境造成极大的破坏17o在3个区的自然增长率，常规用药区、稻-鱼区、稻-鸭-鱼区分别为I =0.0631、,0.1532、,0.1373。说明在稻-鱼区和稻-鸭-鱼区，蜘蛛的数量增长 属于较高增长率，说明此复合生态系统中，鸭和鱼对蜘蛛的数量增长繁殖影响不大, 而在常规用药区，化学农药在杀灭害虫的同时也杀死了天敌蜘蛛，自然增长率r值 仅0.0631,比稻-鱼区的1-值0.1532和稻-鸭-鱼区的I值0.1373低58.8%和 54.0%。处于极低的增长率，化学农药的危害由此可见一斑。4致谢研究过程中得到桃江县农业局刘若书高级农艺师、林温华站长的帮助，特此致谢!5参考文献1冉茂林

13、，陈铮我国稻田养鸭的发展及研究现状J冲国畜牧杂志,1993, 29(5:58-60.2王缨，雷慰慈.稻田种养模式生态效益研究J.生态学报，2000, 20(2:311-316.3郑永华，邓国彬，卢光敏.稻鱼鸭复合生态经济效益的初步研究J.应用生态学报,1997, 8(4:431-434.4郑永华，邓国彬.稻鱼鸭种养共生模式效益的研究及综合评价J.生态农业研究,1998,6(1:48-51.5刘向东，张孝羲，郭慧芳,等稻田蜘蛛群落对稻飞虱的控制功能作用研究J生态学报，2001, 21(1:100-105.6朱凤姑，丰庆生，诸葛梓稻鸭生态结构对稻田有害生物群落的控制作用J浙江农业学报，2004,

14、16(1:37-41.7杨治平，刘小燕，黄璜，等稻田养鸭对稻鸭复合系统中病、虫、草害及蜘蛛的影响研究J生态学报,2004,24(12:2756-2760.8农业部农作物病虫测报总站农作物主要病虫测报办法M.李祖荫，译北京:农业出版社,1981.9金岚环境生态学M.北京倚等教育出版社，1992.10 T岩钦昆虫种群数学生态学原理与应用M.北京科学出版社，1980.11 瓦利，格拉德韦尔，哈塞尔昆虫种群生态学分析法M.北京:科学 出版社,1981.12 皮切尔，哈特.渔业生态学M上海:华东师范大学出版社,1986. 13史密 斯生态学模型M.郎所，译.北京:科学出版社,1979.14 孙儒泳.种群科学管理与数学模型种群的盛衰兴亡M.上海:上海科学技术出版社，1983.15 苏金明，阮沈勇.Matlab 6.1实用指南M.北京：电子工业出版社， 2002.16 郭晶.MATLAB 6.5辅助优化计算与设计M.北京电子工业出版 社,2003.17 傅克文.农业环境的化学污染M.北京:农业出版社，1985.表3测定方法比较结果样品维生素C含量 mg/100g色谱法滴定法苹果 18.007.34 苹果 211.9212.42 早酥梨 6.765.94 茄子 7.306.47 辣椒120.10117.40 白菜