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文档简介

1、thp1 细胞培养生物实验：thp-1细胞培养 tp-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原la型为:a2，9,5，drw1，drw2。工具/原料 培养基：pi-1640 （invtrogn #1875-09) 胎牛血清:ftal bovinserum (bs,gibco #1099141） 二甲亚砜：dmso(sigma d50) 双抗p/ (pnicllin/streptomycn）（gibc#510-122）方法步骤1. 细胞培养：thp1细胞培养于含有10%fs+%p/s的rm-1640培养基中，培养环境为37，5

2、%c2。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基,或直接传代。2. 2细胞传代:当细胞密度达到约8x05esml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出,离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x15ell/m。3. 3细胞冻存：取差不多1x107个细胞,用1l含有1so的fbs重悬,转入冻存管，于-80冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。en注意事项 细胞养不好，可能的原因有，th-1细胞特别依赖细胞浓度，at上10 5到06每m，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。 细胞株的来源很重要,如直接来源于at（aericn typecultr lctio 美国模式菌种保藏中心）生命力要

3、强于国内细胞库的。 注意细胞的密度一定要高，介于55 06/之间,增值的快。细胞数量太少,不适合tp-1生长,一般状态不好的thp-在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基 严重泛黄,细胞数会增加。这一点不同于同是单核细胞系的7细胞。 thp-细胞适合在细胞ph环境偏酸性环境生长，对培养基变化非常敏感，所以 尽量使用相同的1640。 传代后切忌常移出培养箱观察,否则会影响细胞生长,状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般h1 生长相当快,对于状态已经不好的情况，建议传代后4天再观察,一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增;)tp-细胞喜欢酸性条件,你不要老是换培养基。越酸的条件,细胞密度越大，细胞就长得越好;2)不要频繁换液，一般次换液离心一次(只是补充培养基)3) 使用1640（atcc推荐),注意加碳酸氢钠2.5g就可以了,

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