免疫分型教程

1、. 40-免疫分型教程(1)正常骨髓免疫分型 精品.上图是正常骨髓经cd45、cd71、cd33染色后组成的cd45/ssc、cd71/cd33双参数散点图；通过这两个组合，能够分辨骨髓的正常细胞、检查是否有异常细胞存在、评估细胞的成熟情况。cd45/ssc图中可见：1，cd45强阳性ssc低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体）；2，中等强度的cd45表达，ssc信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色及红色细胞群体）；3，cd45表达与ssc信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体）；4，cd45阴性，ssc信号最低的有核红细胞和细胞碎片；cd33/cd71图中可见：1，cd33

2、表达最强的单核细胞群体（绿色）；2，粒细胞cd33表达较单核弱，不成熟粒表达cd71，成熟后不表达。3，淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达cd33、cd71。cd11b/cd15图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获得cd11b，粒细胞高表达cd15）：1，单核细胞（绿色）高表达cd11b，cd15中等到表达；2，粒细胞（蓝色及橘红色）高表达cd15，蓝色成熟粒cd11b表达较橘红色不成熟粒细胞强，幼稚髓细胞仅表达cd15而无cd11b。3，t、b淋巴细胞不表达cd15、cd11b，nk细胞表达cd11b而无cd15（红色细胞）。4，有核红细胞及碎片不表达cd15

3、和cd11b。 根据骨髓细胞cd45/ssc图中分布情况设门圈定各类细胞：r1门为成熟淋巴细胞；r2门为正常单核细胞位置；r3门正常粒细胞位置；r4门为幼稚淋巴细胞出现位置；r5门为有核红细胞或细胞碎片位置；r6门为幼稚髓细胞出现位置；白血病细胞通常会在r4、r6两门位置处出现。精品.m0免疫分型m0:急性髓细胞白血病微分化型 原始细胞在光镜下类似l2型细胞,核仁明显,胞浆透明,嗜碱性,无嗜天青颗粒及auer小体,髓过氧化酶(mpo)及苏丹黑b阳性细胞3%的幼稚细胞表达mpo，较m0多。不表达cd11b，cd15，cd16等。m1:cd11b-/+,hla-dr+,cd13+,cd33+,cd

4、34+,cd14+,mpo+,tdt-/+to+/-精品.m2免疫分型cd45/rals图中细胞分布广泛与m1不同，这是因为m2细胞已进一 步分化幼稚细胞减少，粒细胞增多并与blast windows区域内细 胞相连。因细胞没有明显分群，很难将异常细胞与正常相区分， 故设立多个门进行分析检测其成熟度抗原的表达情况。m2免疫表型与m1类似，hla-dr，cd33，cd13阳性。上图中可见 幼稚细胞cd33与cd71表达均比成熟粒细胞强。cd13表达强于cd33。精品.m2肿瘤细胞弱表达cd15与cd11b,说明细胞已分化。 cd34表达显著降低。m2肿瘤细胞不表达cd5,cd7和tdt等抗原，如

5、病例伴t(8;21),则 经常表达cd19偶表达cd56。一般肿瘤细胞mpo强阳性。偶见形 态为m2并伴t(8;21)，但cd13-，cd33-，cd14-，而mpo+。精品.细胞分布广泛，幼稚细胞较m1少。cd13和cd33阳性，且cd13表达高于cd33。精品.hla-dr阳性，cd15弱阳性。m2肿瘤细胞伴t（8，21）cd19阳性。精品.m3免疫分型上图为m3v，少颗粒型早幼粒白血病细胞，细胞中颗粒少rals信号 低而集中，ss座标上出现大量肿瘤细胞。肿瘤细胞大，fs信号强。 通过cd45/rals双参图可辨别出m3与m3v。下为经典m3多颗粒细胞的 cd45/rals和ss/fs图。

6、m3与m3v在免疫表型上无区别。精品.m3肿瘤细胞特征性地不表达髓系早期标志物cd34和hla-dr；部分病例中cd9特征性地阳性，但不是完全特异。cd2在m3与m3v中会出阳性表达，在hla-dr阴性的病例中，与染色体t(15,17)异常相关。精品.肿瘤细胞cd33表达比正常粒细 胞强与正常单核细胞相似， cd13表达多样。肿瘤细胞不表 达晚期髓细胞分化抗原cd15， cd16和cd11b。肿瘤细胞完全不表达cd15，与正常早幼粒细胞表达cd15相区别；正常早幼粒细胞细胞周期中含高比例s期细胞，而肿瘤细胞中几乎不见细胞周期。肿瘤细胞mpo阳性，上图中mpo与lactoferin双染来区分成熟

7、粒 细胞。肿瘤细胞除表达cd2外，很少表达t或b系抗原。m3肿瘤细胞因其胞浆内多颗粒，细胞具有很强的自发荧光。m3:cd33+,cd13+,mpo+,cd34-,hla-dr-,cd11b-,cd14-,cd15-,tdt-精品.m4免疫分型典型的m4病例cd45/rals图中会出现一群异常的单核细胞和一群骨髓幼稚细胞，肿瘤细胞较m0，m1细胞的fs和ss信号增强。有时这两群细胞会相互叠加占据blast windows和成熟单核细胞位置，故难圈出独立成群的肿瘤细胞。对于m4病例一般都设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据其成熟度的不同，表型也可能互不相同。本例为m4eo，增多的嗜酸细

8、胞rals信号与早幼粒相似cd45信号与单核细胞相似，本例中为r4门中紫色细胞。幼稚细胞群表达cd34，hla-dr，而异常单核细胞则cd34阴性，hla-dr阳性。精品.幼稚细胞cd33阳性，cd14阴性，而异常单核细胞则为cd33阳性，cd14，cd64阳性。cd64表达如象本图中强阳性表达则为单核细胞特异性标志。m4肿瘤细胞在cd11b/cd15图中会特征性分布如上，存在幼稚细胞及各期的粒细胞及单核细胞。cd2表达与m4eo有很大相关性，可能与16号染色体异常有关。m4/blast population: cd13+,cd33+,cd34+,hladr+,cd11b-,cd14-m4/a

9、bnomal monocytic cell:cd13+,cd33+,cd34-,hla-dr+,cd11b+,cd14+/-,cd4+/-精品.m5免疫分型m5肿瘤细胞从细胞大小、颗粒度和cd45表达都向成熟单核细胞过渡，形成一大细胞群体。m5分为二个亚型m5a和m5b，前者细胞稍大，与成熟单相比cd45表达弱但不独立成群。精品.髓系细胞的分化情况可从cd15/cd11b双参数图中观察,本例中肿瘤细胞cd15较平常高,但低于右上角黑色的粒细胞.不成熟的单核细胞cd11b表达弱.如出现cd33阳性，cd13，cd34阴性。m5肿瘤细胞通常高表达cd33，cd13表达多样。cd4是髓系幼稚细胞向单

10、核系分化的敏感指标。精品.cd14一般表达在成熟单核细胞上，本例中肿瘤细胞cd14阴性，cd64阳性。amml病例中，cd64在单核细胞上表达特别强。本例中cd61弱阳性,这种情况是由于幼稚细胞与血小板粘附造成的。m5a: hla-dr+,cd11b+/-,cd34+,cd33+,cd13+,cd14-/+,cd4+/-m5b: hla-dr+,cd11b+,cd34-,cd13+,cd16+/-,cd14+,cd4+/-精品.m6免疫分型本例中可见两群幼稚细胞，m6的定义是红系祖细胞占骨髓幼稚细胞群体的50%强，而其他系别的幼稚细胞可占30%以上。固诊断m6时要依据形态学红系细胞的数量来确定

11、，如仅根据免疫分型很难得出正确诊断，必须结合形态计数幼稚细胞数量来确定。以上是典型的m6免疫分型图，出现两群幼稚细胞。肿瘤细胞可通过cd71强阳性表达加以确认，在一些红细胞稍成熟病例中血型糖白a阳性。hla-dr，cd34和cd33或cd13通常阳性。精品.很多m6病例中会出现一群髓系幼稚细胞，如本例中的红色细胞群体。m6;cd71+,gp-a+,cd34+/-,hla-dr+/-,cd13+/-,cd33+/-,cd34+/-,cd14-,cd11b-精品.m7免疫分型本例中幼稚细胞cd45/rals信号都不强。与b-all，m6的肿瘤细胞相似。m7肿瘤细胞表达cd61和cd41，髓系抗原表

12、达多样。成熟血小板粘附地白细胞也会表达cd41和cd61，这时会对诊断产生影响，此时要加做cd62来确认是否为成熟血小板粘附造成cd41或cd61阳性。精品.本例cd34阳性，cd71弱阳，其他系别抗原不表达。其他系别抗原均为阴性，与m0、m1相似。m7:hla-dr+,cd34+,cd33+/-,cd14-,mpo-,tdt-精品.tall 免疫分型t-all的肿瘤细胞cd45表达较b-all细胞强，肿瘤细胞在cd45/ssc图中可能会出现在blast windows或单核细胞区或 与正常淋巴细场胞相混。本例中肿瘤细胞cd10阳性，约三分之一的t-all会出现该 现象，但cd19绝对阴性。本

13、例cd34阳性，约40%的t-all的肿瘤细胞cd34阳性，与细胞是否表达原始或成熟表型无关。精品.t-all肿瘤细胞表面cd3经常阴性,但如用pe标记的cd3抗体则经常能检测到弱阳性。cd3/cd5双参数图中，肿瘤细胞总出现在正常t细胞以外的位置上,上图中黑色阳性颗粒为正常t细胞.肿瘤细胞cd4/cd8表达多样化,但是总与正常t细胞的表达不两只,如发现cd4/cd8双阳性则提示为t-all。t-all最敏感的指标是cd7,但其特异不强有近30%的aml同样阳性。当cd7与hla-dr联用时其特异性增强，许多t-all，特别是在儿童，cd7强阳性而不表达hla-dr，而在aml中cd7弱表达并

14、伴hla-dr阳性。t-all因与t细胞的成熟度相关，可被分为三期：pre-thymic：cd7+，cd1a-，cd4/8-，cd3-；thymic:cd7+，cd4/8+，cd3-；matrue:cd3+,cd1a-;精品.原始t细胞all与aml很难区分，要加测胞浆内cd3。t-all最常见的表型是：cd2，cd5，cd7，cd1，cd4/8双阳性，cd3弱阳性，tdt强阳性。次其次为：cd2，cd5，cd7 和tdt强阳性。再次为：cd2，cd5，cd7伴cd4或cd8部分表达，cd3表达少并少量表达tdt。t-all的共同特征是：下调表达t系抗原或出现异常抗原的联合表达。精品.b al

15、l免疫分型急性b淋巴细胞性白血病可大致分为早前b-all，前b-all和成熟b-all，区分他们的依据是免疫球蛋白的表达及其表达位置。 具体情况如下：1,成熟b细胞all表达表面免疫球蛋白（sig）2,前b细胞all细胞胞浆内表达免疫球蛋白重键(cu)而不表达轻链3,早前b-all则两者都阴性然而上述情况在用于诊断b淋巴细胞性白血病时常出现混淆。因为胞浆内免疫球蛋白重链cu在诊断过程中很少被检测，从而那些表面ig阴性的病例全都被归于前b-all。早前b细胞型（b-precursor or early pre-b）占儿童急淋的65%左右，占成人的50%左右。 白血病细胞，根据形态对应fab的l1

16、或l2型，处于b细胞成长的最原始阶断。 细胞小而无颗粒，流式细胞分析期细胞的前向和侧向光信号很弱；特异性地，其细胞表面或胞浆内不表达免疫球蛋白。 白血病细胞通常至少部分地表达干祖细胞抗原cd34和不成熟淋巴细胞抗原hla-dr或tdt。 另外，少数罕见病例会同时表达cd10和b细胞相关抗原cd19。其他在早前b细胞型白血病细胞上表达的 b细胞抗原有cd9，cd22和cd24；这些抗原通常在b细胞成熟的中晚期才表达。 cd20也是一具有广泛意义的抗原，但它的表达变异很大，会经常出现cd20阴性的细胞；这种混合型表达cd20与以cd20集中地、高表达的成熟b细胞有很大的区别。早前b白血病细胞的免疫

17、表型与正常原b细胞很相似，但白血病细胞抗原的异常表达常会出现：同时异常地表达早期和成熟抗原，异常地抗原交叉表达（特别为髓系抗原），或最常见的为抗原表达的强度变化。在儿童all中，早前b细胞白血病的免疫分型与疾病预后有很大的相关性，除cd10阴性的肿瘤特别是婴儿，其预后一般较好。 婴儿cd10阴性的白血病事实上经常会出现染色体11q23异常,从而导致mll基因重排，预后差。其他11q23异常的白血病可出现的免疫表型包括表达髓系抗原cd15并失去抗原cd24。 白血病细胞通常会表达cd34和其他一些髓系抗原，但表达情况多变。 除表达髓系抗原外，细胞还会强表达b系抗原cd19。 其他一些预后比较差的

18、如t(9;22)并由此而形成bcr-abl融合基因病例，这种情况多见于成人all，而儿童相对少见，由引可解释为什么成人all的预后较儿童的差。 ph1染色体阳性的病例经常会表达髓系抗原，这与cd34、cd10、cd19和cd25表达有重要关系，但目前尚无相关性的统计数据来定义此亚型。 一些儿童早前b细胞白血病预后特别好，除上述病例中超二倍体肿瘤以外，那些伴t(12;21)(p21;q22)的病例预后也较好。这些易位产生了融合基因tel/aml1，并主要见于种早前b细胞白血病，并且好发于1-10岁的儿童。流式免疫分型发现，这些病例特异地强表达cd19，cd10和hla-dr，并会出现双峰表达cd

19、34，部分细胞表达或失去cd9，部分细胞弱表达cd20。cd66c（korsa-3544）一致地不表达。cd10高表达伴cd9和cd20弱表达与tel/aml1融合基因的产生有紧密关系。精品.b-precursor-all的肿瘤细胞fs/ss信号弱，cd45表达也不强，有些病例的肿瘤细胞在cd45/ssc图中与有核红细胞位置相当。b-precursor-all对应于fab分型的l1和l2型。b-precursor-all的肿瘤细胞cd10/cd19强阳性，cd33弱阳性如使用pe标记的cd33抗体检测阳性增强但不可据此判定为混合型白血病。通常根据cd10表达与否可将b-precursor-all分为两亚型：cd10+和cd10-，cd10+的病人预后较好精品.b-precursor-all与b-cell-all的区别在于肿瘤细胞表面是否表达免疫球蛋白轻链。pre-b-all胞浆重链阳性而表面免疫球蛋白轻链阴性。如同cd19，hla-dr在b-all中也广泛表达，但它没有特异性。其他有用的指标有cd22和cd20，前者几乎与cd19有相同的特异性而后者弱。cd24在许多b-all中表达，但它在一些aml也表达。在b-all