动物细胞融合与单克隆抗体ppt

1、电彩人喜条交一、动物细胞箴合定义:两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程也称细胞杂交融合后形成的具有原来的成为杂交细2、诱导觀合的因素生物法：灭活的病毒诱导融 合.（病毒表面含有的糖蛋白和一 些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发 生作用，使细胞互相凝聚，使细 胞膜上的蛋白质分子和脂质分子 重新排布，细胞膜打开，细胞发 生融合。）诱导融化学法：厶1=1病毒颗粒黏丄附细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞軌合、形成杂种细朋包膜连接hmjksbbcxmtv j（三）动物细胞融合的应用1 突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为 可能。（至今种间、属间、科间，甚至动物与 植物之间的细胞融合已获得成功。）鼠鸡、鼠兔、

2、鼠猴、人鼠、人兔、人鸡、人一蛙、酵母菌一鸡、人一胡萝卜2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。二、单克隆抗体什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、 并能与该抗原发生特异性结合的具有 免疫功能的球蛋白。b淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体。(-)获得抗体的传统方法1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。2、缺点：产量低，纯度低，特异性差。丄一 tjy3:叫一 丫vb4)- wb3 83yyy(r'yy人们发现，在动物发生免疫反应的过程中, 体内的b淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每一个b

3、细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体, 必须克隆单一的b淋巴细胞，形成细胞群。1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念用单个b淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。2、怎样才能获得单克隆抗体?提示仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增 殖的？提示3：有什么方法能使b细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？如何大量生产单克隆抗体?利用b淋巴细胞产生抗体的功能。利用肿瘤细胞无限增殖的特性。利用细胞融合的技术将两种细胞融 合获得具有b淋巴细胞和肿瘤细胞 特性的杂交瘤细胞。利用动物细胞培养技

4、术大量培养杂 交瘤细胞。注射抗原一筛选，继续培养足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群b体外培养、注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克制备过程)单克隆抗体的制备在具fjt谕送件用 的培菲車i垢养专一抗悴专一抗体柞伍同种杂交舉腿分幵一井宛曄右一抗体检验h1牲细胞"吊売婕詆体体9卜堵养g忆薩航坤单抗的制备过程要点:1.动物特异性免疫2.分离b淋巴细胞（）；找到骨髓瘤细胞（）。注意b淋巴细胞是一个系列。（）3.细胞融合三种融合方式：（4.第一次筛选：在“”上培养筛选（只有bg杂交瘤细胞存活。但bg杂交瘤细胞也是一个系列:ng<> 而,gg在此培养基上不能存活。）5.第二次筛选：在“&qu

5、ot;培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。每个杂交瘤细胞，并优酷专一抗体检验阳性1.动物特异性免疫2.分离b淋巴细胞（）；找到骨髄瘤细胞（）。注意b淋巴细是一个系列。3.细胞融合三种融合方式：（）4.第一次筛选：在“”上培养筛选(bi1.动物特异性免疫1.动物特异性免疫（只有bg杂交瘤细胞存活。但bg杂交瘤细胞也是一个系列:如bgngo而，gg在此培养基上不能存活。）1.动物特异性免疫1.动物特异性免疫5.6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，或注射到第二次筛选：在“”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。每个杂交瘤细胞，并进行问题强化:1）、本过程利用了哪些原理?免疫原理,细胞融合

6、原理和动物细胞培养原理2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与b细胞融合?这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有b细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体3）、为何要进行两次端选?第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得4）、如何进行第2次筛选?瘤细胞。特异性强，灵敏度高，可大量制备。3、单克隆抗体的应用 1、:在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等，与常规抗体相比，具有特点.羊芜隍抗体与早孕测试试剂主要成分：抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体原理：定性测定尿液中的人绒毛膜促 异性结合） j能与抗人绒毛膜fettfei第黑疑曇豐特特异性强，

7、灵敏度高，可大量制备3、单克隆抗体的应用1、:在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等，与常规抗体相比，具有特点.2、 :主要用于癌症治疗。生物导弹:单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。生物导弹j用癌细胞作为抗原，免疫小鼬制备抗癌细胞单克隆抗体，井与抗癌药物连接，便制成了生物导弹，注入患者体内，借助单克隆抗依的导向作用,将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损 伤正常细胞，又减少了药剂的用量。为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细 胞间的融合？就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理 的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都 不可能是100%。仅用

8、两个细胞融合，其效率太低 不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个 细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到 的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的 应用就是单克隆抗体的制备。植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、 植物细胞全能性细胞膜的流动性细胞融合的方法诱导方法去除细胞壁后诱 导原生质体融合 物理（离心、振 动、电激）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱导细胞融合物理、化学方法（同左）灭活的病毒用途获得杂种植株主要用于制备单克隆抗体思考与探究1 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有 什么不同？植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术 基本相

9、同，不同的是植物体细胞融合前需 去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合 是两个体细胞直接融合。资料:目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫 性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单 克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定 位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主 要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。2制备单克隆抗体时，为什么要选用b淋巴细 胞和骨髄瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的b淋巴细 胞，b淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗 原。动物在免疫反应的过程中，每一种b淋巴细胞能 分泌

10、一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体， 必须使能分泌该单一抗体的b淋巴细胞大量增殖。b淋 巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖; 骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无 限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种b淋巴细胞 与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会 兼有两个亲本细胞的特性在体外培养条件下能不 断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（b）a.结果是相同的b.杂种细胞的形成过程基本相同c操作过程中酶的作用相同d诱导融合的手段相同2.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和b淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂

11、交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是（c ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 b淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细朋 杂交瘤细胞b.d.a.c.植物体细胞杂交的意义:打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍, 培育作物新品种。、动物细胞融合细胞融合是正常的生命活动。受精作用()动物细胞融合的概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多 个动物细胞结合形成一个细胞的过程。杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或 多个细胞遗传信息的单核细胞。()动物细胞融合的过程与植物原生质体融合原理相同，方法类似。用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程病毒颗粒卜细胞核细胞核（三）单克隆抗体的应用与常规抗体相比

12、，单克隆抗体特异性强, 灵敏度高，并可大量制备。应用主要有：1、作为诊断试剂准确、高效、简易、快速2、用于治疗疾病和运载药物把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合, 制成“生物导弹” / 11为什么灭活的病毒能作为诱导剂?因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分 子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细 胞发生融合。不灭活的病毒能作为诱导剂吗？不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。有限稀释法进行单克隆：ilfj通过适当的晞释达到分离单个细胞进行 培养的目的。（1）取出阳性孔的细胞进行计数。（2）用培养液将其稀释到每毫升10个细胞。（3）如果在96孔板每孔加0.1ml其几率为每 孔内落入一个细胞。（4）根据检测

13、的阳性结果再次进行克隆化。如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就 是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需 抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤 细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过 一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞 分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液 可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞 还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进 行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增 殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆 化培养。在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤 细胞的情况下，培养得到的细胞群是单个 杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体 必然是化学性质单一的，特异性强的单克 隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆 的含义，只不过克隆的不是b淋巴细胞，而 是杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖，又能产生 专一抗体。整个制备过程为何要经过两次筛选?用特定的选择培养基筛选出多种余交瘤细胞第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）:筛选 出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体的概念:由单个杂交瘤细胞进行无性繁殖，也就是通过 克隆，形成细胞群，这一