实验四+食品中细菌总数及大肠菌群的检测完ppt课件

1、实验四实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测食品中细菌总数及大肠菌群的检测主讲：郑海涛一、目的要求一、目的要求1 1、掌握食品中微生物学根本目的的检测、掌握食品中微生物学根本目的的检测方法。了解食质量量与细菌和大肠菌群数方法。了解食质量量与细菌和大肠菌群数量的重要关系量的重要关系2 2、经过实验，初步掌握食品中污染的活、经过实验，初步掌握食品中污染的活细菌计数方法，以判别食品的卫生质量细菌计数方法，以判别食品的卫生质量1 1、菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以运、菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以运用这一方法察看细菌在食品中繁衍的动态，以便对被检样品进用这一方法察看细

2、菌在食品中繁衍的动态，以便对被检样品进展卫生学评价时提供根据。展卫生学评价时提供根据。 2 2、大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌、大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌属、由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌属、枸橼酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和肠杆菌属。枸橼酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和肠杆菌属。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染目的来评价该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染目的来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。食品的卫生质量，

3、具有广泛的卫生学意义。二、实验原理二、实验原理 一、待测样品：一、待测样品： 奶粉复原液、豆腐等。奶粉复原液、豆腐等。 二、培育基二、培育基平板计数琼脂培育基、月桂基磺酸盐胰蛋白平板计数琼脂培育基、月桂基磺酸盐胰蛋白胨 肉 汤 胨 肉 汤 L S T 、 煌 绿 乳 糖 胆 盐 肉 汤 、 煌 绿 乳 糖 胆 盐 肉 汤BGLB, 225m1无菌生理盐水、无菌生理盐水、 9m1无无菌生理盐水、菌生理盐水、1mol/L氢氧化钠、氢氧化钠、1mol/L盐酸。盐酸。 三、无菌培育皿、革兰氏染色液、移液器、枪三、无菌培育皿、革兰氏染色液、移液器、枪头、培育箱、水浴锅、电子天平、电炉、玻头、培育箱、水浴

4、锅、电子天平、电炉、玻璃珠直径为璃珠直径为5mm、试管架、酒精灯、灭、试管架、酒精灯、灭菌镊子、菌镊子、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、不锈钢酒精棉球、玻璃蜡笔、不锈钢勺等。勺等。三、实验资料三、实验资料四、操作方法一、细菌总数：一、细菌总数： (1) (1) 以无菌操作将检样以无菌操作将检样2525克克( (或或25ml)25ml)放于装有放于装有225ml225ml灭菌生灭菌生理盐水和玻璃珠的三角瓶中，充分振荡制形成理盐水和玻璃珠的三角瓶中，充分振荡制形成1:101:10的均匀的均匀稀释液，样品稀释液，样品PHPH值应在值应在6.5-7.56.5-7.5之间，必要时用之间，必要时用1mol/L1

5、mol/L氢氢氧化钠或氧化钠或1mol/L1mol/L盐酸调理盐酸调理( (固体食品需先用无菌均质器均固体食品需先用无菌均质器均质后再稀释质后再稀释) )。 (2) (2) 用移液器，汲取用移液器，汲取1:101:10稀释液稀释液1ml1ml，注入含有，注入含有9ml9ml灭菌生灭菌生理盐水的试管内，振摇均匀，制成理盐水的试管内，振摇均匀，制成1:1001:100的稀释液。的稀释液。 (3) (3) 另取枪头，按上述操作进展另取枪头，按上述操作进展1010系列稀释成不同浓度的系列稀释成不同浓度的稀释液，如此每递增稀释一次，即换用稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1 1支无菌枪头。支无菌枪头。

6、(4) (4) 根据对标本污染情况的估计，选择根据对标本污染情况的估计，选择2-32-3个稀释度，分别个稀释度，分别在作在作1010倍递增稀释的同时，即汲取该稀释度的稀释液倍递增稀释的同时，即汲取该稀释度的稀释液1ml1ml于灭菌培育平皿内，每个稀释度作两个平皿。于灭菌培育平皿内，每个稀释度作两个平皿。 (5) (5) 稀释液吸入平皿后，将融化并冷却至稀释液吸入平皿后，将融化并冷却至4545的平板计数的平板计数琼脂培育基注入平皿约琼脂培育基注入平皿约15ml15ml，并转动平皿使其混合均匀，并转动平皿使其混合均匀，同时将营养琼脂培育基倾入加有同时将营养琼脂培育基倾入加有1ml1ml灭菌生理盐水

7、的灭菌灭菌生理盐水的灭菌平皿作空白对照。平皿作空白对照。 (6) (6) 待琼脂凝固后，翻转平板，置待琼脂凝固后，翻转平板，置36+136+1恒温箱内培育恒温箱内培育48482 2小时后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，小时后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克样品所含菌落总数。即得每克样品所含菌落总数。菌落总数的检验程序菌落总数的检验程序检样25g(或25ml)样品225ml稀释液，均质10倍系列稀释选择2-3个样品匀液各取1ml,分别参与无菌培育皿内每皿参与15-20ml培育基摇匀361培育482h计算菌落数，报告梯度稀释操作方法操作方法二、大肠菌群检验：二、大肠菌群检验

8、： 取样品及稀释方法与菌落总数检验方法一样，做成取样品及稀释方法与菌落总数检验方法一样，做成1:10的均匀稀的均匀稀释液为检样，取样量为释液为检样，取样量为1ml及及0.1ml(相当于相当于1克及克及0.1克奶粉样品克奶粉样品)各各3管。管。1初发酵实验初发酵实验 选择待测样品选择待测样品3个适宜稀释度接种于个适宜稀释度接种于LST发酵管内，接种量在发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料以上者，用双料LST发酵管；每一稀释度接种发酵管；每一稀释度接种3管，置管，置361温箱内，培育温箱内，培育242小时，如一切发酵管都不产气，继小时，如一切发酵管都不产气，继续培育续培育242小时，察看倒管内能

9、否产气，如未产气可报告为大小时，察看倒管内能否产气，如未产气可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，那么进展复发酵实验。肠菌群阴性；如有产气者，那么进展复发酵实验。 2复发酵实验复发酵实验 将一切产气的将一切产气的LST发酵管分别转接在发酵管分别转接在BGLB肉汤管中，置肉汤管中，置361温箱内，培育温箱内，培育48h 2 小时小时,然后取出，察看产气情况。然后取出，察看产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管产气者，计为大肠菌群阳性管 3报告报告 根据复发酵实验的阳性管数，查大肠菌群最能够数根据复发酵实验的阳性管数，查大肠菌群最能够数(MPN)检索检索表。得出每表。得出每1m1(g)食品中存在的大肠菌群数的近似值。食品中存在的大肠菌群数的近似值。检样25g或25ml225ml稀释液，均质10倍系列稀释，选三个适宜稀释度接种LST肉汤管361培育482h不产气产气接种BGLB肉汤361培育482h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表，报告LST发酵管景象发酵管景象1 1影响杂菌总数准确性