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文档简介

1、基因组dna的提取和电泳(实验五)实验报告一、实验目的了解dna提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析dna技术。二、器材和试剂1器材水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等2.试剂1. lmol/l tris.cl(ph8.o)的配制：称取12.11g的tris,置于80 ml的创出0,加入浓盐酸 (约4.2 ml),调节ph值至8.0,定容至100 ml。2. 0.5 mol/l edta(ph8.0)的配制：18.61g na2edta-2h2o,加入 80 ml 的 ddh2o,用 naoh颗粒调ph值至8.0 (约需2g),定容至100 ml。3. 提取缓冲液的

2、配制:100 mmol/l tris.ci(ph8.0), 20 mmol/ledta, 500 mmol/l nacl, 1.5%sds4. 80/4/16氯仿：异戊醇：乙醇5. 6xloading buffer : 0.15%漠酚蓝，0.15%二甲苯青 ff , 5 mmol/ledta , 50%甘油6. 5xtris-硼酸(tbe)缓冲液成分及终浓度配制il溶液各成分的用量445 mmol/l tris 碱 445 mmol/l硼酸盐10 mmol/l edta 水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/l edta (ph 8.0)补足il三、实验步骤1. 在15汕的禽心

3、管屮加入5ml的提取缓冲液，60°c水浴预热。2. 植物叶l-2g,剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状， 6(tc水浴保温20 min,其间不时缓慢摇动。3. 5000 rpm离心5分钟，仔细吸取上清液至另一离心、管中，4. 加入5 ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀(需带手套，防止皮肤损伤)，室温下静置 5-10分钟，使水相和有机相混匀。5. 室温下离心5000 rpm离心5分钟。6. 仔细吸取上清液至另一离心管中，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出 现絮状沉淀。7. 离心5000 rpm,离心5 min,弃去异丙醇，室温晾干。&视沉淀多少，加入iml左右ddhzo溶解，可在60°c水浴中放置15分钟以上助溶。9.取dna样品5 pl,加入1 ml6xloading buffer,混匀，加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔 中，电泳，检测dna的分子大小。4、实验结果和讨论实验分析：本次实验由于种种原因我是和植保102班的同学一起做的，我们组3人，实验 过程比较严谨，受到了老师的表扬，实验结果也很令人满意。下面是实验过程中的注意点：1、研磨不能太久太用力，会导致dna片段断掉。2、实验 室的某些试剂，如氯仿，有毒性，应带手套进行。电泳的时候不知是时间的原因还是都做得不错，结果相差不是很远（如上图），第五组

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