植物生理学实验赤霉素对α淀粉酶的诱导

1、赤霉素诱导赤霉素诱导-淀粉酶的合成淀粉酶的合成*提前打开水浴锅和分光光度计提前打开水浴锅和分光光度计 赤霉素赤霉素（gas）是在研究）是在研究水稻恶苗病是发现的。水稻恶苗病是发现的。 验证赤霉素对验证赤霉素对-淀粉酶诱导形成的生理作用淀粉酶诱导形成的生理作用; ; 掌握对该酶活性定性定量测定的原理与方法。掌握对该酶活性定性定量测定的原理与方法。 种子萌发过程中消耗贮藏物质，需要在一系列酶种子萌发过程中消耗贮藏物质，需要在一系列酶的催化作用下才能进行。这些酶有的已经存在于的催化作用下才能进行。这些酶有的已经存在于干燥种子中，有的需要在种子吸水后重新合成。干燥种子中，有的需要在种子吸水后重新合成。

2、实验证明，启动实验证明，启动-淀粉酶合成的化学信使是赤霉素。淀粉酶合成的化学信使是赤霉素。如果没有胚释放赤霉素，如果没有胚释放赤霉素，-淀粉酶就不能合成。淀粉酶就不能合成。赤霉素诱导赤霉素诱导-淀粉酶淀粉酶的合成的合成 大麦种子萌发时大麦种子萌发时胚胚中中产生的产生的gaga，通过，通过胚乳胚乳扩散扩散到到糊粉层细胞糊粉层细胞，诱导，诱导-淀淀粉酶粉酶的形成，该酶又扩散的形成，该酶又扩散到到胚乳胚乳使淀粉水解。使淀粉水解。 糊粉层细胞是糊粉层细胞是ga作用作用的的靶细胞靶细胞。靶细胞：接受激素，并产生特异理化反应的细胞。靶细胞：接受激素，并产生特异理化反应的细胞。释放释放糊粉层细胞糊粉层细胞胚

3、乳胚乳赤霉素诱导赤霉素诱导-淀粉酶淀粉酶的合成的合成 赤霉素和质膜上的受体赤霉素和质膜上的受体结合，通过膜上结合，通过膜上g g蛋白介蛋白介导的信号传递系统，活化导的信号传递系统，活化细胞内既存的活化因子，细胞内既存的活化因子，该活化因子进入核内使该活化因子进入核内使ga-mybga-myb基因脱阻抑，合成基因脱阻抑，合成ga-mybga-myb蛋白。蛋白。ga-mybga-myb蛋白蛋白为为-淀粉酶基因启动子上淀粉酶基因启动子上转录因子，诱导活化转录因子，诱导活化-淀淀粉酶粉酶 mrnamrna的转录，最后的转录，最后翻译成翻译成-淀粉酶，并分泌淀粉酶，并分泌到胚乳中发挥作用到胚乳中发挥作用

4、 外加的赤霉素可以代替胚的释放作用，从而外加的赤霉素可以代替胚的释放作用，从而诱导诱导-淀粉酶的合成。淀粉酶的合成。 这个反应非常专一，被用来作为赤霉素的生这个反应非常专一，被用来作为赤霉素的生物鉴定法。物鉴定法。 去胚的吸胀大麦种子外加赤霉素，诱导去胚的吸胀大麦种子外加赤霉素，诱导-淀淀粉酶形成，催化淀粉水解为糖。粉酶形成，催化淀粉水解为糖。实验证明：实验证明：大麦种子去胚后，大麦种子去胚后，淀粉不分解；淀粉不分解；去胚后，加去胚后，加ga处理，处理，淀粉水解；淀粉水解；去糊粉层，淀粉去糊粉层，淀粉不水解；不水解；去糊粉层，加去糊粉层，加ga处处理，淀粉不水解。理，淀粉不水解。（不产生（不产

5、生ga）（缺少靶细胞）（缺少靶细胞）（缺少靶细胞）（缺少靶细胞）这一性质已经应用于啤酒工业。这一性质已经应用于啤酒工业。ga对大麦对大麦糊粉层产糊粉层产生生-淀粉淀粉酶的影响酶的影响无胚种子无胚种子i2 ki） 聚合度聚合度颜色颜色无色无色淡红淡红红红棕红棕红紫色紫色蓝紫色蓝紫色蓝色蓝色碘试法碘试法 无胚无胚ga处理处理 ga32108mol/l四、实验操作步骤四、实验操作步骤 取不同浓度的淀粉（取不同浓度的淀粉（0、10、20、30、40、50 g/ml）各）各2.0ml，分别加入，分别加入i2-ki溶液溶液2.0ml，蒸馏，蒸馏水水5.0ml，充分摇匀，于波长，充分摇匀，于波长580nm下

6、测定吸光度下测定吸光度值，以淀粉浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制作值，以淀粉浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制作标准曲线。标准曲线。580( (一）选种与切种一）选种与切种: : 选取大小一致、健康的大麦选取大小一致、健康的大麦种子种子8080粒，用刀片将每粒种子粒，用刀片将每粒种子横切成两半，无胚的半粒和有横切成两半，无胚的半粒和有胚的半粒。胚的半粒。有胚有胚无胚无胚处理处理编号编号醋酸醋酸缓冲液缓冲液mlml赤霉素液赤霉素液mlml蒸馏水蒸馏水 mlml试验材料用量试验材料用量注：注：1ml1ml溶液的吸取用溶液的吸取用1 1个枪头即可，个枪头即可， 移取顺序移取顺序醋缓、水、赤霉素溶液。醋

7、缓、水、赤霉素溶液。（二）（二）淀粉酶的诱导淀粉酶的诱导取取1212只离心试管，编号，按下表加入各种溶液和材料只离心试管，编号，按下表加入各种溶液和材料处理处理重复重复0.1淀粉淀粉磷酸液磷酸液mlml培养液培养液mlml3030保温时间保温时间minmini2-ki溶液溶液mlml蒸馏水蒸馏水mlmlp 141.8有胚有胚0.2摇匀摇匀1025o 581.8无胚无胚0.2摇匀摇匀1025g9121.8无胚无胚+ga0.2摇匀摇匀1025注：注：1.9ml1.9ml、2ml2ml、5ml5ml溶液溶液的移取用的移取用量程量程1000-5000l1000-5000l的加样器，的加样器， 要使用配

8、套的大号枪头，要使用配套的大号枪头，淀粉液淀粉液、i i2 2-ki-ki、水水 分别要换枪头。分别要换枪头。 0.1ml0.1ml用小加样器和配套小枪头，用小加样器和配套小枪头，培养液三种培养液三种分别要换小枪头。分别要换小枪头。从恒温振荡箱内取出昨日对应时间段培养的材料，按下表处理从恒温振荡箱内取出昨日对应时间段培养的材料，按下表处理:比色应快速完成，避免延时误差比色应快速完成，避免延时误差.空白空白: 1.8ml淀粉磷酸液淀粉磷酸液和和0.2ml培养液换成磷培养液换成磷酸缓冲液，其它相同酸缓冲液，其它相同.部分注意事项部分注意事项用震荡器内别人样品用震荡器内别人样品做好的补齐。做好的补齐

9、。0.1%0.1%淀粉磷酸溶液放置在冰箱内，用后请放回原处。淀粉磷酸溶液放置在冰箱内，用后请放回原处。 试管架上的试管和离心管用后请补齐，试管刷干净倒置试管架上的试管和离心管用后请补齐，试管刷干净倒置. .选种、切种选种、切种(严格区分有胚、无胚严格区分有胚、无胚)淀粉酶的诱导淀粉酶的诱导(30下培养下培养24h)酶提液酶提液- -昨日昨日0.1ml30保温保温15mini2-ki溶液溶液2.0ml 蒸馏水蒸馏水5.0ml淀粉液淀粉液1.9ml空白为？空白为？操作操作流程流程无胚无胚有胚有胚无胚无胚gaga重复1重复2重复3重复4平均值淀粉含量（四）结果计算（四）结果计算根据标准曲线计算淀粉的含量：根据标准曲线计算淀粉的含量：c (g/ml) = 151.97d580+0.058 r2=0.9995淀粉水解量（淀粉水解量（% %）=x-yx100* 需要对结果进