自动化全血分析的临床应用

1、仪测血液细胞分析资中县人民医院检验科 陈正文2002年仪测血细胞分析的发展仪测血细胞分析的发展n十六世纪人类认识到十六世纪人类认识到血液中细胞的存在血液中细胞的存在n其后的其后的200年，显微技术的不断发展，人们对年，显微技术的不断发展，人们对血中细胞成份进行分类血中细胞成份进行分类 n1956年，年，coulter根据细胞的低导电性，设计根据细胞的低导电性，设计了第一台了第一台a型单通道分析仪型单通道分析仪 n现今，结合组织化学和免疫组化、高频传导现今，结合组织化学和免疫组化、高频传导及激光散射等技术，生产出的五分类、多参及激光散射等技术，生产出的五分类、多参数血细胞分析系统已得到普及。数血

2、细胞分析系统已得到普及。仪测血液细胞分析的方法仪测血液细胞分析的方法1、电阻抗法：电阻抗法： 当细胞快速流经小孔时，由于细胞是不良导体，小孔电阻加大，相当于小孔的当细胞快速流经小孔时，由于细胞是不良导体，小孔电阻加大，相当于小孔的横截面积减少，在电流恒定的情况下，出现瞬间的电压变化而产生一个电脉冲，电横截面积减少，在电流恒定的情况下，出现瞬间的电压变化而产生一个电脉冲，电脉冲的数量就是流经小孔的细胞数；电脉冲的大小与细胞大小成正比，因此能进行脉冲的数量就是流经小孔的细胞数；电脉冲的大小与细胞大小成正比，因此能进行细胞分类。细胞分类。2、光散射法：光散射法： 全血标本首先需要按照一定比例稀释成细

3、胞悬液，在鞘液的作用下，形成细胞流，全血标本首先需要按照一定比例稀释成细胞悬液，在鞘液的作用下，形成细胞流，细胞被排成单列快速通过光学检测区，当流动中的细胞和测定光束相交时，由于血细胞被排成单列快速通过光学检测区，当流动中的细胞和测定光束相交时，由于血细胞透光度与鞘液不同，引起光散射变化，引发一脉冲信号，信号的大小与细胞体细胞透光度与鞘液不同，引起光散射变化，引发一脉冲信号，信号的大小与细胞体积有关，以此来进行细胞计数及体积测定。积有关，以此来进行细胞计数及体积测定。3、组织化学法：组织化学法： 在稀释液及溶血素的配合作用下，使红细胞膜在极短的时间内完全溶解，使各在稀释液及溶血素的配合作用下，

4、使红细胞膜在极短的时间内完全溶解，使各种种wbc维持颗粒状态，保持一定的体积。从而保证了维持颗粒状态，保持一定的体积。从而保证了wbc计数的可靠性。将释放计数的可靠性。将释放的血红蛋白经化学处理后转化为较为稳定的血红蛋白衍生物，在的血红蛋白经化学处理后转化为较为稳定的血红蛋白衍生物，在540nm左右有最大左右有最大吸收峰，可用比色法进行定量测定。吸收峰，可用比色法进行定量测定。自动化仪器的分析原理自动化仪器的分析原理电阻抗法库尔特基本原理电阻抗法库尔特基本原理 自动化仪器的分析原理自动化仪器的分析原理血红蛋白测定基本原理血红蛋白测定基本原理 n 不同类型的血细胞分析仪，血红蛋白测定原理是相同的

5、。血液经溶血剂作用后，红细胞溶解，释放血红蛋白，与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物，在特定波长（一般在530-550nm）下比色，吸光度的变化与液体中hb含量成比例。n 不同系列血液分析仪配套溶血剂配方不同，形成的血红蛋白衍生物亦不同，吸光度各异但最大吸收峰均接近540nm。全血分析测定测参数全血分析测定测参数（sysmex kx-21)wbcrbcpltwbc分群分群rdwpdwmcvmpvhgbmchmchc红细胞参数红细胞参数脉冲计数脉冲计数脉冲高度、宽度脉冲高度、宽度比色法比色法计算值计算值n用于诊断贫血的参数用于诊断贫血的参数rbc、hct、hgbn用于贫血分类的参数用于贫血分类的参数

6、mcv、mch、mchc、rdw白细胞参数白细胞参数nwbc、wbc分群分群血小板参数血小板参数nplt、mpv、pdw、白细胞参数白细胞参数wbc分群与传统形态学分类的关系及区别分群与传统形态学分类的关系及区别(三分类三分类)小细小细胞群胞群中间细胞群中间细胞群大细大细胞群胞群淋巴淋巴细胞细胞单核单核细胞细胞大淋大淋巴细巴细胞胞嗜酸嗜酸细胞细胞嗜碱嗜碱细胞细胞幼稚幼稚细胞细胞粒细粒细胞胞白细胞参数白细胞参数 根据体积大小初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞区，根据体积大小初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞区，主要是淋巴细胞。第二群称为中间细胞（主要是淋巴细胞。第二群称为中间细胞（mid

7、），包括单核细胞、），包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，各阶段幼稚细胞。第三群是大细嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，各阶段幼稚细胞。第三群是大细胞区，主要是中性粒细胞（胞区，主要是中性粒细胞（gran）。仪器根据各亚群占总体的）。仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率，如果与该标本的白细胞总数相乘，比例计算出各亚群的百分率，如果与该标本的白细胞总数相乘，即得到各类细胞的绝对值。即得到各类细胞的绝对值。 可以看出，电阻法只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成可以看出，电阻法只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体。在一个群体中，可能以某种细胞为主（如小细胞区主几个群体。在一个群体中

8、，可能以某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还有其它细胞要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还有其它细胞的存在。显然习惯上所称的的存在。显然习惯上所称的“三分类、三分类、”“”“二分类二分类”血细胞分析血细胞分析仪这个名称是不够确切的。国外多采用仪这个名称是不够确切的。国外多采用“三部法三部法”（3-part）或）或“二部法二部法”(2-part)称之。国内专家普便建议使用称之。国内专家普便建议使用“三分群三分群 形态学中的分类与仪测分群的关系形态学中的分类与仪测分群的关系红细胞参数分析红细胞参数分析 贫血是指单位容积的血液中贫血是指单位容积的血液中h

9、gb、rbc或或hct低于同年龄、低于同年龄、同性别的最低值即为贫血。同性别的最低值即为贫血。贫血的定义贫血的定义红细胞参数分析红细胞参数分析红细胞参数分析红细胞参数分析rdw的临床意义的临床意义1.鉴别缺铁性贫血和鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血：珠蛋白生成障碍性贫血： 分析两类贫血患者的分析两类贫血患者的rdw变化，其中变化，其中53例缺铁性贫血例缺铁性贫血rdw全部增全部增高（异常率为高（异常率为100%），而），而44例轻型例轻型-珠蛋白生成障碍性贫血中珠蛋白生成障碍性贫血中38例中例中rdw正常（正常率为正常（正常率为88%）因此认为）因此认为rdw可作为此两类贫血筛选及鉴可作

10、为此两类贫血筛选及鉴别指标。别指标。2.诊断缺铁性贫血：诊断缺铁性贫血： 95%以上的缺铁性贫血的以上的缺铁性贫血的rdw均异常。均异常。3.用于缺铁性贫血的临床治疗效果观察：用于缺铁性贫血的临床治疗效果观察： 铁剂治疗早期铁剂治疗早期rdw增大，后趋于正常。增大，后趋于正常。4.进行贫血的新形态学分类（进行贫血的新形态学分类（mcv/rdw分类）分类） 根据根据rdw所反应红细胞体积的异质性结合所反应红细胞体积的异质性结合mcv分为六类贫血。分为六类贫血。红细胞参数分析红细胞参数分析mcv mchmchc正常人正常人大细胞大细胞性贫血性贫血正细胞正细胞贫血贫血单纯小单纯小细胞贫细胞贫血血小细

11、胞小细胞低色素低色素贫血贫血mcvrdw正常人正常人小细胞均一性小细胞均一性小细胞不均一小细胞不均一正细胞均一性正细胞均一性正细胞不均一正细胞不均一大细胞均一性大细胞均一性大细胞不均一大细胞不均一红细胞参数分析红细胞参数分析mcvrdw贫血类型敏感性特异性缺铁性贫血96.5%98.1%巨幼红贫血100%100%溶血性贫血94.3%100%铁粒幼贫血94.7%95.4%再生障碍性贫血90.4%96.0%单纯小细胞贫血87.6%91.4%恶性贫血96.9%83.4%利用mcv、rdw鉴别贫血的敏感性及特异性血小板相关参数血小板相关参数nplt（血小板数）nmpv（血小板平均体积）npdw（血小板体

12、积分布宽度）np-lcr（大血小板比率）血小板相关参数血小板相关参数n鉴别血小板减少的原因鉴别血小板减少的原因 血小板破坏增多引起血小板减少血小板破坏增多引起血小板减少mpv增高；增高；骨髓病变血小板生成减少骨髓病变血小板生成减少mpv降低。降低。n提示骨髓功能恢复的预后价值提示骨髓功能恢复的预后价值 mpv增加是骨髓功能恢复的表现。增加是骨髓功能恢复的表现。n判断止血能力的强弱判断止血能力的强弱 血小板减少时，血小板减少时，mpv增加者其止血能力相增加者其止血能力相对较强对较强。mpv的临床意义的临床意义血小板相关参数血小板相关参数pdw 血小板相关参数血小板相关参数血小板三项参数分析血小板

13、三项参数分析nplt(x + s)mpv(x + s)pdw(x + s)正常对照组100196.36 + 47.538.39 + 0.788.64 + 1.25骨髓增生异常综合症75131.36 + 76.32 9.23 + 1.219.26 + 1.72原发plt减少性紫癜2454.88 + 21.3410.49 + 2.0612.94 + 2.77再生障碍性贫血增多症9962.36 + 52.779.35 + 0.919.44 + 1.76原发性plt增多症18537.5 +30.417.70 + 0.507.80 + 0.62慢性粒细胞白血病51266.53 + 129.39.19 +

14、 1.4710.42 + 2.39慢性急变24122.00 + 53.029.05 + 1.029.93 + 1.82急性淋巴细胞白血病8184.55 + 47.898.67 + 1.008.63 + 1.69急性非淋巴细胞白血病6686.77 + 50.488.47 + 1.088.39 + 1.62血液细胞体积直方图血液细胞体积直方图l 直方图是由测量通过感应区直方图是由测量通过感应区的每个细胞脉冲累积得到的，的每个细胞脉冲累积得到的，是在计数的同时进行分析测量是在计数的同时进行分析测量的。的。 l 横坐标为体积，纵坐标是血横坐标为体积，纵坐标是血细胞的相对数量，血细胞分析细胞的相对数量，

15、血细胞分析仪在进行细胞分析时将每个细仪在进行细胞分析时将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配胞的脉冲根据其体积大小分配并存在相应的体积通道中，每并存在相应的体积通道中，每个通收集的数据被统计出相对个通收集的数据被统计出相对数并表示在数并表示在“y”轴上。体积数轴上。体积数据以飞升（据以飞升（fl）为单位，表示在）为单位，表示在x轴上轴上 白细胞体积直方图白细胞体积直方图 经过溶血剂处理后的白细胞可经过溶血剂处理后的白细胞可以根据体积大小初步确认其相应的以根据体积大小初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞群，主要细胞群：第一群是小细胞群，主要是淋巴细胞。第二群是中间细胞群，是淋巴细胞。第二群是中间细

16、胞群，包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，核象左移或白血病可碱性粒细胞，核象左移或白血病可有各阶段幼稚细胞及白血病细胞。有各阶段幼稚细胞及白血病细胞。第三群是大细胞群，主要是中性粒第三群是大细胞群，主要是中性粒细胞。细胞。 仪器根据各亚群占总体的比例仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率，如果与该计算出各亚群的百分率，如果与该标本的白细胞总数相乘，即得到各标本的白细胞总数相乘，即得到各类细胞的绝对值。类细胞的绝对值。白细胞直方图变化的临床意义白细胞直方图变化的临床意义 大淋巴细胞增多症大淋巴细胞增多症急非淋白血病急非淋白血病急性淋巴细胞白血病急性淋巴

17、细胞白血病 在进行白细胞计数时，细胞根据体积大在进行白细胞计数时，细胞根据体积大小分配在不同计算机通道中，从而得到白细小分配在不同计算机通道中，从而得到白细胞体积分布直方图。反之从图形的变化可以胞体积分布直方图。反之从图形的变化可以会反应出血液中细胞群体的变化。这种变化会反应出血液中细胞群体的变化。这种变化细胞图形并无特异性细胞图形并无特异性 中间细胞群可包括大淋巴细胞、原始中间细胞群可包括大淋巴细胞、原始细胞、幼稚细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱细胞、幼稚细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，其中任何一类细胞的增多，性粒细胞，其中任何一类细胞的增多，均可使直方图产生相似变化，只是提示均可使直方图产生相似

18、变化，只是提示检查者粗略判断细胞比例变化或有无明检查者粗略判断细胞比例变化或有无明显的异常细胞出现显的异常细胞出现 ，进而在显微镜下检，进而在显微镜下检查中注意这些变化或在正常人体检查中，查中注意这些变化或在正常人体检查中，筛选是否需要进一步作血涂片检查。筛选是否需要进一步作血涂片检查。 白细胞直方图变化的临床意义白细胞直方图变化的临床意义 白细胞直方图的变化可反映白细胞直方图的变化可反映某些人为的或一些干扰白细胞计某些人为的或一些干扰白细胞计数和分类计数的情况，比如外周数和分类计数的情况，比如外周血出现有核红细胞或巨大血小板，血出现有核红细胞或巨大血小板，采血时由于技术原因造成血小板采血时由

19、于技术原因造成血小板聚集或某些病理因素使红细胞膜聚集或某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有抵抗作用，使红细胞对溶血剂有抵抗作用，使红细胞溶血不完全，以至测检标本中有溶血不完全，以至测检标本中有大量红细胞膜碎片等情况，均可大量红细胞膜碎片等情况，均可使白细胞直方图在使白细胞直方图在50fl以下区域出以下区域出现一个或大或小的小峰。因此当现一个或大或小的小峰。因此当实验结果出现这种图形时，提示实验结果出现这种图形时，提示白细胞计数和分类计数均不准确，白细胞计数和分类计数均不准确，需在采取相应的手段进一步检测。需在采取相应的手段进一步检测。红细胞体积直方图的临床意义红细胞体积直方图的临床意义 与白细胞直

20、方图不同，某些贫血标本其红细胞体积直方图各有其特点，与白细胞直方图不同，某些贫血标本其红细胞体积直方图各有其特点，此种图形变化再结合其它参数进行分析，对鉴别诊断颇有价值。分析时，此种图形变化再结合其它参数进行分析，对鉴别诊断颇有价值。分析时，要注意观察图形的位置，峰底的宽度、峰顶的形态及有无双峰出现。要注意观察图形的位置，峰底的宽度、峰顶的形态及有无双峰出现。（1）缺铁性贫血的直方图： 其特点为曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞不均一性 。几种贫血时图形变化几种贫血时图形变化（2）轻型）轻型-血红蛋白合成障碍的直方血红蛋白合成障碍的直方图图 ： 表现为小峰左移，峰底变窄，典表现为小峰左移，峰底

21、变窄，典型的小细胞均一性贫血。型的小细胞均一性贫血。（1）缺铁性贫血的直方图：）缺铁性贫血的直方图： 其特点为曲线波峰左移，峰底其特点为曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞不均一性变宽，显示小细胞不均一性 。红细胞体积直方图的临床意义红细胞体积直方图的临床意义几种贫血时图形变化几种贫血时图形变化（3）铁粒幼细胞性贫血的直方图显示红细胞呈典型的“双形”性改变（即同时存在着两类型的红细胞，一种是低色素红细胞，另一种是正常形态的红细胞）多见于铁粒幼细胞性贫血。在缺铁性贫血经治疗有效时，也可出现类似的图形，但峰底要更宽些。红细胞体积直方图的临床意义红细胞体积直方图的临床意义（4 4）叶酸缺乏引起的巨幼红

22、细）叶酸缺乏引起的巨幼红细胞性贫血，治疗前与治疗后的胞性贫血，治疗前与治疗后的直方图：治疗前直方图波峰右直方图：治疗前直方图波峰右移，峰底增宽，显示明显的大移，峰底增宽，显示明显的大细胞不均一性，是叶酸或维生细胞不均一性，是叶酸或维生素素b12b12缺乏引起巨幼红细胞性贫缺乏引起巨幼红细胞性贫血的重要直方图特征。给予叶血的重要直方图特征。给予叶酸或维生素酸或维生素b12b12后，幼稚细胞分后，幼稚细胞分化成熟正常，正常红细胞逐步化成熟正常，正常红细胞逐步释放入血液，而病理细胞并未释放入血液，而病理细胞并未全消亡，检测时即可再出现双全消亡，检测时即可再出现双峰，说明治疗有效。峰，说明治疗有效。几

23、种贫血时图形变化几种贫血时图形变化血小板体积直方图的临床意义血小板体积直方图的临床意义l 当检测标本中小细胞增多或出现细胞碎片或血小板凝聚时，都会影响实验结果，血小板体积直方图也均能反映出这些变化。l 因此在发出血小板报告之前，首先要观察其图形是否正常，如为异常的图形，应考虑有血小板凝聚，必要时作血涂片检查是否有小红细胞或大血小板增多现象。血小板体积直方图的临床意义血小板体积直方图的临床意义常见血小析异常直方图常见血小析异常直方图仪测血液细胞的影响因素仪测血液细胞的影响因素n 测试时试剂的温度对结果的影响测试时试剂的温度对结果的影响n 测试的时间对结果的影响测试的时间对结果的影响n 抗凝剂对结

24、果的影响抗凝剂对结果的影响n 溶血剂的用量及溶血时间，对血小板、白细胞计数影响溶血剂的用量及溶血时间，对血小板、白细胞计数影响 n 仪器的半堵孔现象及试剂的污染仪器的半堵孔现象及试剂的污染 n 病理因素对血液分析仪使用的影响病理因素对血液分析仪使用的影响 机测血液细胞的影响因素机测血液细胞的影响因素由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转移由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病病人血中存在或骨髓瘤、

25、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病病人血中存在有冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集，致使血细胞计数有冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集，致使血细胞计数增高；增高；血液中白细胞显著增高而影响红细胞计数；有核红细胞出血液中白细胞显著增高而影响红细胞计数；有核红细胞出现而影响白细胞计数；现而影响白细胞计数；红细胞内含大量红细胞内含大量shb，能抵抗溶血剂作用，能抵抗溶血剂作用，造成红细胞溶解不完全；造成红细胞溶解不完全；某些新生儿或某些肝病病人红细胞膜质某些新生儿或某些肝病病人红细胞膜质类异常，具抗溶血剂作用，导致红细胞溶血剂不完全；类异常，具抗溶血剂作用，导致红细胞溶血剂不完全；多发性骨多发性骨髓瘤的髓瘤的m蛋白增多时，其蛋白增多时，其m蛋白可与溶血剂发生反应而使结果偏高；蛋白可与溶血剂发生反应而使结果偏高；各种病病引起的血栓前状态使血小板易于聚集，机测时影响结果各种病病引起的血栓前状态使血小板易于聚集，机测时影响结果 病理因素对血液分析仪使用的影响病理因素对血液分析仪使用的影响测定后的分析测定后的分析u根据直方图变化判断计数结果是否准确，根据直方图变化判断计数结果是