第01章蛋白质化学

1、第一篇第一篇 生物大分子的结构与功能生物大分子的结构与功能蛋白质蛋白质：生命的物质基础：生命的物质基础核酸核酸 ：遗传的物质基础：遗传的物质基础酶酶：生物催化剂：生物催化剂生物大分子生物大分子是由某些基本结构单位按一定顺序是由某些基本结构单位按一定顺序和方式连接所形成的多聚体。和方式连接所形成的多聚体。mw104第一章第一章 蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能chapter 1 structure and function of protein本章主要介绍：本章主要介绍：1.1.蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成2.2.蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构3.3.蛋白质分子结构与功能的关系蛋白质分

2、子结构与功能的关系4.4.蛋白质的主要理化性质蛋白质的主要理化性质什么是蛋白质呢？n蛋白质蛋白质(protein) ： 是由许多是由许多氨基酸氨基酸通过通过肽键肽键相连形成的高分子含氮化合物。相连形成的高分子含氮化合物。n种类繁多种类繁多n功能多样功能多样n生命的物质基础生命的物质基础什么是蛋白质什么是蛋白质?fireflies emit light catalyzed by luciferase with atperythrocytes contain a large amount of hemoglobins, the oxygen-transporting protein.the pro

3、tein keratin is the chief structural components of hair, horn, wool, nails and feathers.第一节第一节 蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成section 1 the molecular components of protein1 1碳碳(c)(c)、氢、氢(h)(h)、氧、氧(o)(o)、氮氮(n)(n)、硫硫(s)(s) 2n, 16%；pr标志性元素标志性元素故每克故每克氮氮相当与相当与6.25克克蛋白质蛋白质100克克样品中蛋白质的含量样品中蛋白质的含量 ( g % ) = 每克样品含氮克数每克样品含氮

4、克数 6.251003 3少量的：磷、铁、铜、锌和碘等少量的：磷、铁、铜、锌和碘等 pr的元素组成特点：的元素组成特点：crh2nhcooh或crh3n+hcoo-l- -氨基氨基酸的结构通式酸的结构通式一、氨基酸一、氨基酸(amino acid，aa) 蛋白质的基本组成单位蛋白质的基本组成单位h甘氨酸甘氨酸ch3丙氨酸丙氨酸l-l-氨基酸的通式氨基酸的通式rc+nh3coo-h1.1. -碳原子为碳原子为手性手性碳原子，因此具有旋光性碳原子，因此具有旋光性 ( (甘氨酸甘氨酸除外）除外）2.2.生物界有生物界有d-aad-aa，l-aal-aa, ,但构成但构成人体蛋白质人体蛋白质的均的均

5、为为l-l-氨基酸氨基酸。3.-3.-碳原子上均连有一个氨基碳原子上均连有一个氨基( (脯氨酸脯氨酸除外除外) )。4.4.在水溶液中以在水溶液中以两性两性离子存在。离子存在。5.5.各种各种aaaa侧链的大小、性状和带电情况不同。侧链的大小、性状和带电情况不同。构成人体构成人体prpr的的2020种种aasaas的结构特点的结构特点: : gly alapheglu（一）氨基酸的分类（一）氨基酸的分类根据氨基酸根据氨基酸侧链基团侧链基团的结构和理化性质，的结构和理化性质，将其分为将其分为4类：类：1.非极性疏水性非极性疏水性侧链侧链氨基酸：氨基酸：甘、丙、缬、甘、丙、缬、 亮、亮、 异亮、苯

6、丙、脯异亮、苯丙、脯 2.极性中性极性中性侧链侧链氨基酸：氨基酸：丝、苏、酪丝、苏、酪、半胱、半胱、 蛋蛋、色、色、 天冬酰胺、谷氨酰胺天冬酰胺、谷氨酰胺3.酸性氨基酸：酸性氨基酸：谷（谷（glu)、天冬、天冬(asp)4.碱性氨基酸：碱性氨基酸：赖赖 (lys)、精、精 (arg)、组、组 (his)酸性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸碱性氨基酸两种特殊的氨基酸两种特殊的氨基酸n脯氨酸脯氨酸 羟脯氨酸羟脯氨酸ho羟脯氨酸羟脯氨酸n2分子半胱氨酸分子半胱氨酸 胱氨酸胱氨酸（一）肽键与肽（一）肽键与肽一个氨基酸的一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的-氨基氨基 脱去一分子水缩合形成的键

7、称脱去一分子水缩合形成的键称肽键肽键( (peptide bond) )氨基酸借肽键相连而形成的化合物称氨基酸借肽键相连而形成的化合物称肽肽(peptide)metphe二肽二肽lysmetphe三肽三肽cysthrlysmetphe五肽五肽二、氨基酸与多肽二、氨基酸与多肽苯丙氨酸苯丙氨酸二肽二肽丙氨酰苯丙氨酸丙氨酰苯丙氨酸cch2coohhnhhoh丙氨酸丙氨酸cocnh2hch3ccocnh2hch3ch2coohhnh肽键肽键h2o氨基末端氨基末端(端端)羧基末端羧基末端(c 端端)cysmet phe lysser thrvalnh2cooh寡肽寡肽(oligopeptide)： 10

8、aa多肽多肽(polypeptide):许多许多aa。其形状为一条没。其形状为一条没有分支的长链，又称有分支的长链，又称多肽链多肽链或或肽链，即肽链，即蛋白质蛋白质。多肽链具有方向性多肽链具有方向性，n c 生物活性肽生物活性肽n具有一定具有一定生物活性生物活性的的小分子小分子肽类物质，肽类物质，称称生物活性肽生物活性肽。n重要的生物活性肽有谷胱甘肽、神经肽、重要的生物活性肽有谷胱甘肽、神经肽、肽类激素等。肽类激素等。1. 谷胱甘肽（谷胱甘肽（glutathione, gsh）：）：n是一种是一种三肽三肽化合物。化合物。n种类较多，生理功能各异。种类较多，生理功能各异。n如催产素（如催产素（9

9、 9肽）、加压素（肽）、加压素（9 9肽）、促肾上腺皮肽）、促肾上腺皮质激素（质激素（3939肽）、促甲状腺素释放激素（肽）、促甲状腺素释放激素（3 3肽）。肽）。 2.2.多肽类激素：多肽类激素：n神经肽主要与神经信号转导作用相关神经肽主要与神经信号转导作用相关n如脑啡肽（如脑啡肽（5 5肽）、肽）、 - -内啡肽（内啡肽（3131肽）、强啡肽肽）、强啡肽（1717肽）等。肽）等。3. 3. 神经肽：神经肽：第二节第二节 蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构section 2 molecular structure and function of proteinn蛋白质的分子结构划分为蛋白质的分

10、子结构划分为一、二、三、四级结构一、二、三、四级结构四个结构层次。四个结构层次。n除一级结构外，蛋白质的二、三、四级结构均属于空间结构，除一级结构外，蛋白质的二、三、四级结构均属于空间结构，即即构象构象（conformation）。n构象是由于有机分子中单键的旋转所形成的。蛋白质的构象构象是由于有机分子中单键的旋转所形成的。蛋白质的构象通常由通常由非共价键（次级键）非共价键（次级键）来维系。来维系。一、蛋白质的一级结构一、蛋白质的一级结构n蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构(primary structure)(primary structure)是指是指蛋白质分子中蛋白质分子中氨基酸氨基酸的排

11、列顺序。的排列顺序。n维系蛋白质一级结构的主要化学键为维系蛋白质一级结构的主要化学键为肽键肽键。牛胰岛素的一级结构牛胰岛素的一级结构胰岛素的一级结构胰岛素的一级结构各种蛋白质的根本差异在于一级结构的不同各种蛋白质的根本差异在于一级结构的不同维系蛋白质空间构象的非共价键维系蛋白质空间构象的非共价键1. 氢键：氢键：n氢键氢键(hydrogen bond)的形成常见于连接在一电负性的形成常见于连接在一电负性很强的原子上的很强的原子上的氢原子氢原子，与另一电负性很强的原子，与另一电负性很强的原子之间，如之间，如 c=o h- -n。n氢键在稳定氢键在稳定蛋白质蛋白质的空间结构上起着重要的作用。的空间

12、结构上起着重要的作用。n但氢键的键能较低但氢键的键能较低(12kj/mol)，易被破坏。，易被破坏。 蛋白质分子中氢键的形成蛋白质分子中氢键的形成2. 2. 疏水键：疏水键：n非极性物质在含水的极性环境中存在时，受到水分非极性物质在含水的极性环境中存在时，受到水分子是的排斥而相互聚集在一起的作用力，称为子是的排斥而相互聚集在一起的作用力，称为疏水疏水键或疏水作用力键或疏水作用力(hydrophobic interaction)(hydrophobic interaction)。n蛋白质分子中的许多蛋白质分子中的许多aaaa残基侧链是非极性的，这些残基侧链是非极性的，这些非极性的基团在水中也可相

13、互聚集，形成疏水键，非极性的基团在水中也可相互聚集，形成疏水键，如如leuleu，ileile，valval，phephe，alaala等的侧链基团。等的侧链基团。疏水作用示意图疏水作用示意图3. 3. 离子键：离子键：n离子键离子键(salt bond)(salt bond)是由带正电荷基团与带负是由带正电荷基团与带负电荷基团之间相互吸引而形成的化学键。电荷基团之间相互吸引而形成的化学键。n在近中性环境中，蛋白质分子中的酸性氨基酸在近中性环境中，蛋白质分子中的酸性氨基酸残基侧链电离后带残基侧链电离后带负负电荷，而碱性氨基酸残基电荷，而碱性氨基酸残基侧链电离后带侧链电离后带正正电荷，二者之间可

14、形成离子键。电荷，二者之间可形成离子键。 蛋白质分子中离子键的形成蛋白质分子中离子键的形成维系蛋白质分子构象的非共价键维系蛋白质分子构象的非共价键（一）蛋白质的二级结构（一）蛋白质的二级结构n蛋白质的二级结构蛋白质的二级结构(secondary structure)(secondary structure)是指是指 蛋白质多肽链蛋白质多肽链主链主链原子原子局部局部的空间结构，但不包的空间结构，但不包括与其他肽段的相互关系及括与其他肽段的相互关系及侧链侧链构象的内容。构象的内容。n维系蛋白质二级结构的主要化学键是维系蛋白质二级结构的主要化学键是氢键氢键。二、蛋白质分子的空间结构二、蛋白质分子的空

15、间结构蛋白质立体结构原则：蛋白质立体结构原则：1. 由于由于c=o双键中的双键中的电子云与电子云与n原子上的未共用原子上的未共用电子对发生电子对发生“电子共振电子共振”，使，使肽键具有部分双键肽键具有部分双键的性质的性质，不能自由旋转，不能自由旋转（图）（图）。2. 与肽键相连的六个原子构成与肽键相连的六个原子构成刚性平面结构刚性平面结构。但由。但由于于 -碳原子与其他原子之间均形成单键，因此两碳原子与其他原子之间均形成单键，因此两相邻的平面结构可以作相对旋转。相邻的平面结构可以作相对旋转。肽单元肽单元的形成的形成n肽单元肽单元由于肽由于肽键具有部分双键的键具有部分双键的性质，使参与肽键性质，

16、使参与肽键构成的六个原子被构成的六个原子被束缚在同一平面上，束缚在同一平面上，这一平面称为这一平面称为肽单肽单元（酰胺平面，肽元（酰胺平面，肽键平面）。键平面）。肽单元示意图肽单元示意图蛋白质的二级结构类型蛋白质的二级结构类型 - -螺旋螺旋 - -折叠折叠 - -转角转角 无规卷曲无规卷曲（1 1）-螺旋螺旋 ( (-helix) )最常见的二级结构最常见的二级结构概念概念:由由肽键平面肽键平面沿一中心轴沿一中心轴旋转旋转所形成的有规律的螺旋所形成的有规律的螺旋构象。构象。螺旋的结构特征螺旋的结构特征:(1)(1)以肽键平面为单位以肽键平面为单位, ,以以碳原子为转折盘碳原子为转折盘旋形成旋

17、形成右手螺旋。右手螺旋。(2) (2) 每每3.63.6个氨基酸残基个氨基酸残基绕成一个螺圈绕成一个螺圈(360(3600 0),),螺螺距为距为0.54nm,0.54nm,每个氨基酸每个氨基酸上升上升0.15nm,0.15nm,肽键平面与肽键平面与中心轴平行。中心轴平行。(3)(3)主链原子构成螺主链原子构成螺旋的主体旋的主体, ,侧链在侧链在 其外部。其外部。（4 4）螺旋以）螺旋以氢键氢键维系。维系。（2） -折叠（折叠（ -pleated sheet）：）：n - -折叠：折叠：肽键平面呈伸展的锯齿状排列形成的结构。肽键平面呈伸展的锯齿状排列形成的结构。n其特征为：其特征为： 由若干条

18、肽段或肽链平行或反平行排列组成由若干条肽段或肽链平行或反平行排列组成片状片状结构结构； 主链骨架伸展呈主链骨架伸展呈锯齿状锯齿状； 借相邻主链之间的借相邻主链之间的氢键氢键维系。维系。（3） -转角（转角（ -turn）：）：n -转角转角( -turn)是多是多肽链出现肽链出现180回折回折的转角的转角处结构。其处结构。其结构特征为：结构特征为： 主链骨架本身以大约主链骨架本身以大约180回折回折; 回折部分通常由回折部分通常由四个氨基酸残基四个氨基酸残基构成构成; 构象依靠第一残基的构象依靠第一残基的-co基与第四残基的基与第四残基的-nh基之间形成基之间形成氢键氢键来维系。来维系。 （4

19、）无规卷曲（无规卷曲（random coil）：）：n无规卷曲是指多肽链主链部分形成的无规卷曲是指多肽链主链部分形成的没有确没有确定规律定规律的卷曲构象。的卷曲构象。n常见于球状蛋白质分子中，在其它类型二级常见于球状蛋白质分子中，在其它类型二级结构肽段之间起结构肽段之间起活节作用活节作用，有利于整条肽链，有利于整条肽链盘曲折叠。盘曲折叠。h2ncoohn模体：模体：在许多蛋白质分子中，可发现二个或三在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有个具有二级结构二级结构的肽段，在的肽段，在空间空间上相互接近，上相互接近，形成一个特殊的空间构象，被称为模体。形成一个特殊的空间构象，被称为模体。n是具有特殊

20、功能的是具有特殊功能的超二级结构超二级结构。n已知的模体有：已知的模体有：，环环，钙结合蛋白中结钙结合蛋白中结合钙离子的合钙离子的模体模体 锌指结构锌指结构 核糖核酸酶分子中的二级结构核糖核酸酶分子中的二级结构-螺旋螺旋-折叠折叠-转角转角无规卷曲无规卷曲（二）、蛋白质的三级结构（二）、蛋白质的三级结构n蛋白质的三级结构蛋白质的三级结构(tertiary structure)(tertiary structure)是指是指整条多肽链中整条多肽链中所有原子所有原子的空间排布，包含的空间排布，包含主链主链构象和构象和侧链侧链构象。构象。n维系三级结构的化学键主要是非共价键（次级维系三级结构的化学键

21、主要是非共价键（次级键），如键），如疏水键、氢键、盐键疏水键、氢键、盐键等。等。 胰岛素分子的三级结构胰岛素分子的三级结构n 端端 c端端 肌红蛋白肌红蛋白 (mb) 为单肽蛋白质，为单肽蛋白质，含有含有153个氨基酸，个氨基酸，有有8个螺旋区个螺旋区n大分子蛋白质的大分子蛋白质的三级结构三级结构，常可，常可分割分割成多个球状成多个球状或纤维状的区域，折叠的较为紧密，或纤维状的区域，折叠的较为紧密，各行其功能各行其功能，称为称为结构域结构域。n这些结构域再缔合成具有三级结构的蛋白质分子这些结构域再缔合成具有三级结构的蛋白质分子或亚基。或亚基。 对那些较小的蛋白质分对那些较小的蛋白质分子来说，子

22、来说，结构域结构域和和三级结构三级结构往往是一个意思，也就是说往往是一个意思，也就是说是单结构域的。一般来说，是单结构域的。一般来说，大的蛋白质分子可以由大的蛋白质分子可以由2 2个个或更多个结构域组成。或更多个结构域组成。 纤连蛋白纤连蛋白(fibronectin)(fibronectin)分子的结构域分子的结构域( (部分序列部分序列) )型胶原酶的结构域型胶原酶的结构域n分子伴侣分子伴侣(chaperon)：帮助：帮助新生新生的肽链的肽链形成形成正确的正确的空间构象的蛋白质。空间构象的蛋白质。（三）、蛋白质的四级结构（三）、蛋白质的四级结构n亚基亚基(subunit)(subunit)就

23、是指参与构成蛋白质四级结构的、就是指参与构成蛋白质四级结构的、每条具有的每条具有的独立三级结构独立三级结构的多肽链。的多肽链。n蛋白质的四级结构（蛋白质的四级结构（quaternary structure)quaternary structure)就是指就是指蛋白质分子中蛋白质分子中亚基亚基的的空间空间排布，排布，亚基间接触部位的亚基间接触部位的布局和布局和相互作用相互作用。不包括亚基本身的空间结构。不包括亚基本身的空间结构。n维系蛋白质四级结构的是维系蛋白质四级结构的是次级键次级键，绝无共价键。，绝无共价键。亚基的立体排布方式亚基的立体排布方式蛋白质分子的结构层次蛋白质分子的结构层次第三节第

24、三节 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系section 3 relation between structure and function of protein一、一级结构是高级结构与功能的基础一、一级结构是高级结构与功能的基础1. 1. 一级结构决定蛋白质的空间结构一级结构决定蛋白质的空间结构2.2.一级结构相似的蛋白质有相似的高级结构与一级结构相似的蛋白质有相似的高级结构与功能功能3.3.氨基酸序列提供重要的生物进化信息氨基酸序列提供重要的生物进化信息4.4.重要蛋白质的重要蛋白质的氨基酸序列改变氨基酸序列改变可引起疾病可引起疾病镰刀状红细胞贫血镰刀状红细胞贫血hbhb 亚基亚基

25、一级结构的改变一级结构的改变n-val his leu thr pro glu glu c(146) hbs 亚基亚基hba 亚基亚基n-val his leu thr pro val glu c(146)6n在镰刀状红细胞贫血患者中，由于基因突变导在镰刀状红细胞贫血患者中，由于基因突变导致致hbhb 亚基亚基第六位第六位氨基酸残基由氨基酸残基由谷氨酸谷氨酸改变为改变为缬氨酸缬氨酸，血红蛋白的亲水性明显下降，从而发，血红蛋白的亲水性明显下降，从而发生聚集，使红细胞变为镰刀状。生聚集，使红细胞变为镰刀状。n这种由这种由遗传物质突变遗传物质突变导致某一蛋白质导致某一蛋白质一级结构一级结构变化而引起

26、的疾病，称为变化而引起的疾病，称为“分子病分子病”。 二、蛋白质的功能依赖特定的空间结构二、蛋白质的功能依赖特定的空间结构n蛋白质构象疾病蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。n这类疾病包括这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病疯牛病等。等。蛋白质构象改变与疾病蛋白质构象改变与疾病 构构 象象 病病prpc-螺旋螺旋prpsc-折

27、叠折叠正常正常疯牛病疯牛病prpcprpc：33-35kd33-35kd，对蛋，对蛋白酶敏感，溶于水。白酶敏感，溶于水。prpscprpsc抗蛋白水解酶，抗蛋白水解酶，水溶性差，热稳定，无水溶性差，热稳定，无论紫外线及离于辐射、论紫外线及离于辐射、羟胺或羟胺或znzn2+2+均不能使其均不能使其丧失侵染能力。丧失侵染能力。 第四节第四节 蛋白质的理化性质蛋白质的理化性质section 3 the physical and chemical characters of proteinn蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于要取决于溶液的溶液的ph

28、值值。n等电点（等电点（pi）：）：在某一在某一ph值溶液中，蛋白质值溶液中，蛋白质解离成解离成正、负正、负离子的趋势相等，即成为兼性离离子的趋势相等，即成为兼性离子，子，净电荷为零净电荷为零，此时溶液的，此时溶液的ph称为称为蛋白质蛋白质的等电点。的等电点。一、蛋白质的两性解离：一、蛋白质的两性解离：（一）等电点（一）等电点+带带正正电荷的蛋白质电荷的蛋白质带带负负电荷的蛋白质电荷的蛋白质-+-+净电净电荷荷为为零零的的蛋白质蛋白质coo-nh3+prcoo-nh2prcoohnh3+proh-h+phpicoohnh2prnphpi， pr-二、蛋白质的胶体性质及应用：二、蛋白质的胶体性质

29、及应用：n蛋白质分子的颗粒直径已达蛋白质分子的颗粒直径已达1100nm，处于胶，处于胶体颗粒的范围。因此，蛋白质具有亲水溶胶的体颗粒的范围。因此，蛋白质具有亲水溶胶的性质。性质。n蛋白质分子表面的蛋白质分子表面的水化膜水化膜和和表面电荷表面电荷是稳定蛋是稳定蛋白质亲水溶胶的两个重要因素。白质亲水溶胶的两个重要因素。 （一）（一） 蛋白质亲水胶体的稳定因素蛋白质亲水胶体的稳定因素蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质

30、不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用水化膜水化膜n 在某些理化因素的作用下，蛋白质特定的在某些理化因素的作用下，蛋白质特定的空空间构象被破坏，间构象被破坏，从而导致其从而导致其理化性质理化性质的改变和的改变和生物学活性生物学活性的丧失，称为的丧失，称为蛋白质的变性蛋白质的变性。n引起蛋白质变性的因素有：引起蛋白质变性的因素有： 物理因素物理因素：高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等；：高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等； 化化学因素学因素：强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐等。：强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐等。三、蛋白质的变性

31、、沉淀和凝固三、蛋白质的变性、沉淀和凝固n二硫键二硫键和和非共价键非共价键的破坏，的破坏，肽键肽键不被破坏。不被破坏。n变性蛋白质的性质改变：变性蛋白质的性质改变： 物理性物理性质质：溶解度下降，结晶能力消失，粘度升：溶解度下降，结晶能力消失，粘度升高，光吸收度增加等；高，光吸收度增加等； 化学性质化学性质：官能团反应性增加，易被蛋白酶水解。：官能团反应性增加，易被蛋白酶水解。 生物学性质生物学性质：原有生物学活性丧失，抗原性改变。：原有生物学活性丧失，抗原性改变。 蛋白质变性的实际意义：蛋白质变性的实际意义：消毒、杀菌消毒、杀菌低温保存疫苗低温保存疫苗变性蛋白质易消化变性蛋白质易消化蛋白质沉

32、淀：蛋白质沉淀：蛋白质从溶液中析出的现象。蛋白质从溶液中析出的现象。方法：方法：n盐析：盐析：中性盐，中和蛋白质表面电荷中性盐，中和蛋白质表面电荷+ +破坏水破坏水化膜被。化膜被。n重金属盐重金属盐：与负离子结合形成不溶物。如：与负离子结合形成不溶物。如mgmg+ +、hg hg 2+2+等。等。n生物碱试剂或某些酸生物碱试剂或某些酸：与正离子结合形成不溶：与正离子结合形成不溶物。物。n有机溶剂有机溶剂：如乙醇、丙酮等。：如乙醇、丙酮等。n蛋白质变性的蛋白质变性的可逆性可逆性：a)蛋白质在体外变性后，绝大多数情况下是不能蛋白质在体外变性后，绝大多数情况下是不能复性的；复性的；b)如如变性程度浅

33、，蛋白质分子的构象未被严重破变性程度浅，蛋白质分子的构象未被严重破坏；或者蛋白质具有特殊的分子结构，并经特坏；或者蛋白质具有特殊的分子结构，并经特殊处理则殊处理则可以复性。可以复性。核糖核酸酶的变性与复性核糖核酸酶的变性与复性去除变性剂去除变性剂并缓慢氧化并缓慢氧化天然构象天然构象尿素，尿素， - -巯基乙醇巯基乙醇变性状态变性状态n加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝凝固固。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。性。 （四）蛋白质的紫外吸收：（四）蛋白质的紫外吸收：280nm280nm （酪氨酸、色氨酸）（酪氨酸、色氨酸）（五）蛋白质的成色反应（五）蛋白质的成色反应 双缩脲反应双缩脲反应n透析透析(dialysis)n利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。分开的方法。n超滤法超滤法 （二）透析及超滤法分离纯化蛋白质（二）透析及超滤法分离纯化蛋白质透析工作图透析工作图半透膜原理半透膜原理分类分类单纯蛋白质