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文档简介

1、枯草芽孑包杆菌常用培养基配方枯草芽孢杆菌常用培养基配方枯草芽抱杆菌常用培养基配方：11蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂枯草芽抱杆菌原生质体的制备1培养枯草芽抱杆菌取亲本菌株t4412、tt2新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基（cm）的试管 中，36 C振荡培养14 h，各取1 ml菌液转接入装有20 ml液体完全培养基的250 ml锥形瓶中，36 C振荡培养3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/ml青霉素，使其终浓度为0.3 u/ml，继续振荡培养2 h。2收集细胞各取菌液10 ml，4000 r/min离心10 min，弃上清液，将菌体

2、悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10 ml smm中，每ml约含108109活菌为宜。3. 总菌数测定各取菌液0.5 ml，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7各1ml（每稀释度作两个平板）、倾注完全培养基，36 C培养24 h后计数。此为未经酶处理的总菌 数。4. 脱壁二株亲本菌株各取5 ml菌悬液，加入5 ml溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/ml，混匀后于36 C水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质 体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用 4000 r/min离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 ml高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。5. 剩余菌数测定取0.5 ml上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4稀释液各0.1 ml，涂布于完全培养基平板上，36 C培养2448 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲

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