实验一、氨基酸纸层析分离鉴定_第1页
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文档简介

1、实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法一预习思考题1.本实中滤纸的作用是什么？2实验屮作为固定相和流动相的物质分别是什么？3.rf值的含义。影响因素？4两rf值之差为多少范围内可以确定为同一物质？5层析滤纸和普通滤纸有什么区别？6为什么要平衡？平衡剂和扩展剂是同一物质吗？7用手直接接触滤纸会引起什么不良后果，为什么？&缝制的纸筒如果两边缘相靠会造成什么后果？9为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环 节？10.标记滤纸不能使用油性笔，为什么？11查阅资料，解释纸层析分离氨基酸原理。1纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的轻基 具有亲水性，吸附一层水作为固定相。2以水相

2、为固定相，展开的溶剂作流动相。3.溶质在滤纸上的移动速度用rf值表示：展开斑点中心与原点之间的距离/溶剂前某种沿与原点之间的距 离影响因素：在一定条件下某种物质的rf值是常数。rf值的大小 与物质的结构性质，溶剂系统，层析滤纸的质量，温度，样品溶 液中的杂质等因素有关。4样品分离各组分一般rf值在05-0.85之间，彼此间差值不应 0.05,样品与标准差值0.05基本确认为同一物质。5层析滤纸，组成该滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展 层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。 纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合 物，可做双向层析。普通滤纸，由棉质纤维组

3、成，按不同的用途 而使用不同的方法制作。由于其材质是纤维制成品，因此它的表 面有无数小孔可供液体粒子通过，而体积较大的固体粒子则不能 通过。这种性质容许混合在一起的液态及固态物质分离。6使分离物质在溶剂中的分配较恒定，得到的斑点较圆整。7.因为人的皮肤表面也有氨基酸，如果直接接触，会干扰实验。&两边缘相靠导致滤纸的厚度不均，溶剂在滤纸上的移动速度不 致，影响实验结來。9点样时点完一点应干燥后在滴，以保证每点在纸上扩散的直径 最大不超过3mm。10油性笔标记会溶与层析液，影响实验结果。11纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，纸层析所 用展层溶剂大多由有机溶剂和水组成。其屮滤纸纤维素上吸附的 水是固定相，展层用的有机溶剂是流动相。在层析吋，将样品在 距滤纸一端约23cm的某处，该点为原点；然后在密闭容器中层 析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不 断分配，由于分配系数不同，即不同氨基酸在相同的溶剂中溶解 度不同，所以利用在滤纸上迁移速度不同分离氨基酸不同，氨基 酸随流动相移动的速率就不同，结

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