小儿哮喘花剥苔产生免疫机制探究

1、小儿哮喘花剥苔产生免疫机制探究作者：李福凤，李果刚，吴友忠，李靖，章晓鹰，王 惠芳，王忆勤【关键词】花剥苔；摘要目的：从免疫学角度探讨哮喘患儿花剥苔形成 的机制。方法：采用免疫组化方法检测舌苔脱落上皮细胞中 角蛋白13及bcl2蛋白的含量。应用流式细胞术检测外周血 cd4+及细胞趋化因子受体 3 (cell chemokine receptor3, ccr3)的表达量。采用放射免疫法检测血清中皮质醇的含量。 结果：哮喘花剥苔组患儿外周血cd4+和ccr3水平明显高于 哮喘非花剥苔组及正常组(pv0.05)；哮喘花剥苔组、非哮 喘花剥苔组血清中皮质醇含量低于其余各组(p<0. 05) o哮

2、 喘花剥苔、非花剥苔组血清ige水平明显高于其余各组(p <0. 05) o哮喘花剥苔组、非哮喘花剥苔组舌苔上皮脱落细 胞中角蛋白13的含量明显低于哮喘非花剥苔组、非哮喘非 花剥苔组和正常对照组(p<0. 05) o哮喘花剥苔组患儿舌苔 上皮脱落细胞中bcl2蛋白含量与其余各组比较无统计学差 异。结论：花剥苔的形成与免疫反应密切相关，血清皮质醇 水平降低、cd4+及ccr3增多，可能促进了花剥苔的形成。 同时，舌上皮细胞角化障碍及舌上皮细胞凋亡亦可能促进花 剥苔的形成。关键词花剥苔；哮喘；免疫immunological mechanism of exfoliative tongue

3、 fur in children with asthmaabstract objective： to explore the immunological mechanism of exfoliative tongue fur in children with asthma. methods： thirtynine children with asthma, twentyeight children with repetitive respiratory tract infection (nonasthma) and eleven healthy children were divided in

4、to five groups, which were asthma with exfoliative fur or with nonexfoliative fur groups, nonasthma with exfoliative fur or with nonexfoliative fur groups and normal control group. the concentra/tions of keratin 13 and bcl2 in cells exfoliated from tongue fur were detected by immunohistochemical met

5、hod the expression levels of blood cell chemokine receptor3 (ccr3) and cd4+ were examined by flow cytometry, and the levels of serum cortisol and ige were detected by radioimmunoassay. results： the levels of blood cd4+ and ccr3 of children with asthma and exfoliative fur were higher than those in th

6、e asthma with nonexfoliative fur group and the normal control group (p<0. 05). the serum level of cortisol in the groups of asthma with exfoliative fur and non asthma with exfoliative fur were lower than that in the other groups (p&lt；0.05). the serum levels of ige in asthma with exfoliative

7、fur or with nonexfoliative fur groups were higher than that in the other groups (p&it；0.05). concentrations of keratin 13 in the cells exfoliated from tongue fur in the groups of asthma. or nonasthma with exfoliative fur were lower than that of the other groups (p&lt；0.05). there was no sign

8、ificant difference of expression level of bcl2 in the cells exfoliated from tongue fur among these five groups conclusion： there is a reasonably close relationship between the formation of exfoliative tongue fur and the immune system such as low level of serum cortisol and high levels of blood cd4+

9、and ccr3, which may all promote the formation of exfoliative fur. the disability of keratinization and apop to sis of epit helial cells of to nue may also be one cause for its formation.key words exfoliative fur； asthma； immunity花剥苔在中医辨证中具有十分重要的诊断意义。临床 发现小儿多见花剥苔，尤其在哮喘患儿中发生率更高，且不 易消除1。但是其发生原因尚不清楚，本文试

10、从免疫学角 度探讨哮喘患儿易出现花剥苔的机制。1资料与方法1. 1主要试剂ige试剂盒，灵敏度为10 u/ml （24 ng/ml）,批号20021002,购于深圳晶美生物工程公司（美国 bectondickinson公司产品）；异硫氟酸荧光素标记细胞趋化 因子受体 3 （cell chemokine receptor3, ccr3）试剂盒， 批号fab155p,购于rd公司；异硫氧酸荧光素cd4及相应同 型对照试剂盒，批号fab1325p,购自美国coalter公司（法 国immunotech公司产品）；皮质醇试剂盒，批号20021001, 由上海生物制品研究所提供；角蛋白13试剂盒，批号

11、rev03012f,购于美国neomarkers公司；bcl2蛋白试剂盒， 批号rev012402m,购于美国neomarkers公司。1.2主要仪器epicsxl流式细胞仪，美国coalter公 司产品；elx800酶标仪，购于上海科学精密仪器有限公司； sn682放射免疫v记数器，中国科学院上海原子核研究所日 环仪器厂产品。1.3诊断标准哮喘诊断标准根据全国儿科哮喘协作 组制订的儿童哮喘诊断标准和治疗常规2： （1）喘息 呈反复发作者（或可追溯与某种变应原或刺激因素有关）;（2）发作时肺部闻及喘鸣音；（3）平喘药有明显疗效。花 剥苔诊断标准：舌苔部分剥落，剥落处舌面光滑无苔者3。1. 4病

12、例选择与分组2003年7月2004年5月，上 海中医药大学龙华医院门诊诊断为哮喘的患儿39例以及反 复呼吸道易感儿童28例，其中男43例，女24例；年龄最 小20个月，最大11岁，平均（5. 0±2. 3）岁。39例哮喘患 儿分为哮喘花剥苔组（18例）和哮喘非花剥苔组（21例）； 28例反复呼吸道易感儿童分为非哮喘花剥苔组（14例）和 非哮喘非花剥苔组（14例）。所有患儿近2个月内均未予糖 皮质激素治疗。另选择上海市徐汇区田林第三小学二年级健 康无过敏史的小学生11名作为正常对照组。3组患儿年龄、 性别比较无统计学差异。1.5检测指标 各组患儿空腹，清晨7： 00至上海中医 药大学曙

13、光医院中心实验室免疫实验室，各采静脉血4 ml 备检。（1） ige检测：取血清，采用酶联免疫吸附测定法， 用elx800酶标仪检测光密度（optical density, 0d）值；（2）皮质醇测定：取血清，采用放射免疫分析法，以相对 结合率对浓度对数的标准曲线求得皮质醇浓度；（3） ccr3、 cd4检测：取全血1 ml,用依地酸100卩1抗凝，双色免疫 荧光标记，用流式细胞仪进行检测；（4）舌苔脱落细胞角蛋 白13、bcl2表达量检测：用无菌小匙刮取舌中部舌苔，花 剥苔者在剥处刮取，置入盛有1 ml生理盐水的eppendorf 管中，离心、涂片、固定，采用免疫组化3, 3'二氨基

14、联苯 胺染色，角蛋白13和bcl2在胞浆或胞膜上表达呈棕黄色， 应用motic数码医学图像分析系统进行半定量分析。1.6统计学方法计量资料均数用x±s表示，采用单 因素方差分析。2结果2.1各组小儿血清ige、皮质醇水平的比较哮喘花剥 苔、非花剥苔组患儿血清ige水平，较非哮喘花剥苔、非花 剥苔组和正常对照组均明显升高(pv0.05)；其中哮喘花剥 苔组与哮喘非花剥苔组之间血清ige水平的比较无统计学差 异；非哮喘花剥苔组血清ige水平明显低于非哮喘非花剥苔 组(p<0. 05) o哮喘花剥苔组、非哮喘花剥苔组血清皮质醇 水平明显低于其余各组(p<0. 05)；其中哮喘花

15、剥苔组与非 哮喘花剥苔组之间血清皮质醇水平的比较无统计学差异。见 表lo2.2各组小儿外周血ccr3、cd4 +水平的比较 哮喘花 剥苔、非花剥苔组外周血ccr3水平明显高于其余3组(p< 0. 05)；其中哮喘花剥苔组、哮喘非花剥苔组之间比较无统 计学差异；其余3组之间比较亦无统计学差异。哮喘花剥苔 组外周血cd4+水平明显高于其余各组(p<0. 05)；余3组 之间比较无统计学差异。见表2。2. 3各组小儿舌苔脱落细胞角蛋白13、bcl2蛋白表 达的比较哮喘花剥苔组、非哮喘花剥苔组角蛋白13表达明 显低于哮喘非花剥苔组、非哮喘非花剥苔组和正常对照组(p <0. 05）；其

16、中哮喘花剥苔组与非哮喘花剥苔组之间比较无 统计学差异；哮喘非花剥苔组角蛋白表达亦明显低于非哮喘 非花剥苔组和正常对照组（pv0. 05）。各组bcl2蛋白表达 比较无统计学差异，但数值有降低趋势。见表3。表1各组小儿血清ige、皮质醇水平（略）tab 1 serum levels of ige and cortisol in 5 groups of children*p&it； 0.05, vs normal control group； ap&lt；0.05, vs nonasthma with exfoliative fur group； p&lt；0.05, vs

17、 asthma with nonexfoliative fur group； 匚1卩&11;；005, vs nonasthma with nonexfoliative fur group表2各组小儿外周血ccr3、cd4 +水平（略）tab 2 blood levels of ccr3 and cd4 + in 5 groups of children*p& it； 0.05, vs normal co nt rol group； ap &lt；0.0 5, vs nonasthma with exfoliative fur group； p&lt；0.05,

18、 vs asthma with nonexfoliative fur group； 口卩&吐；005, vs nonasthma with nonexfoliative fur group表3各组小儿舌苔脱落细胞角蛋白13、bcl2蛋白表 达（略）tab 3 expressions of keratin 13 and bcl2 in cells exfoliated from tongue fur of children in 5 groups*p&it； 0.05, vs normal control group； ap&it； 0.05,vs nonasthma w

19、ith exfoliative fur group； p&it； 0.05,vs asthma with nonexfoliative fur group； ejp&it；0.05, vs nonasthma with nonexfoliative fur group3讨论哮喘的病理本质是气道慢性炎症，而免疫功能异常是导致炎症反复发作的重要原因。小儿花剥苔，多由于脾胃之 气不足或消化不良，或见于过敏体质3。临床上，花剥苔 与哮喘常同时出现。本实验结果显示，哮喘花剥苔患儿血清ige.全血ccr3、cd4+水平升高而血清皮质醇水平降低，与文献报道4一致。内源性糖皮质激素分泌不足可导

20、致骨髓嗜酸性粒细胞 释放增加，并向靶器官转移，并进一步活化产生炎性介质、 毒性蛋白而引发哮喘，亦可引起细胞炎性脱落。舌表皮细胞 炎性坏死脱落形成花剥苔。过敏性哮喘患者血清嗜酸性粒细 胞显著增高5,且与疾病严重程度密切相关。嗜酸性粒细 胞被认为是哮喘气道炎症的主要效应细胞，ccr3是一种受体 蛋白，主要介导细胞对某些趋化因子如eotaxin2.单核细胞 趋化蛋白3和单核细胞趋化蛋白4的反应，并产生细胞迁移、 活化等效应，主要表达于嗜酸性粒细胞和辅助性t淋巴细胞6,而这些细胞在哮喘的发生和发展中起主要作用。本实 验结果显示，ccr3水平与i魔有类似的变化趋势，提示ccr3 的表达与ige的合成与分泌有某种联系，与哮喘花剥苔的形 成有一定关系。血清ige及外周血ccr3、cd4+的髙水平及血 清皮质醇的低水平可能促进哮喘患