试验室常规试剂配制

1、实验室常规试剂配制实验室常用试剂、缓冲液的配制1 M Tris-HCI(pH7.4, 7.6, 8.0)1 M Tris-HCI组份浓度配制量配制方法1.称量121.1 g Tris 置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。424. 将溶液定容至1 L。5. 冋温冋压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。1.5 M Tris-HCl(pH8.8)1.5 M Tris-HCI组份浓度配制方法配制量1.称量18

2、1.7 g Tris 置于1 L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节 pH值至8.8。4. 将溶液定容至 1 L。5. 冋温冋压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。10 XTE Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0)100 mM Tris-HCI, 10 mM EDTA组份浓度配制量配制方法1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1 M Tris HCI Buffer (pH 7.4, 76r 80)100 ml500 mM EDTA

3、 CpHS.O)20 ml2. 向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，均匀混合3. 将溶液定容至1 L后，咼温咼压火菌。4. 室温保存。3 M醋酸钠(pH5.2)1QO ml1 OHOHTIOO-200叶域杯中，加人绅40 m啲去禹子水世轉活解2加入康I昔醱讷节pH值至口3加去离子丛棉聘液定窖至100ml.137 mM NaCI, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4组份浓度配制量 配制方法PBS Buffer组份浓度配制量1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中MaCI89KCI02gM 諛 HFd1 42gKHaPOi0 27 g2. 向烧杯中加入约

4、800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将 pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。4. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mMCaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。10 M醋酸铵组份浓度10 M醋酸铵配制量100 ml配制方法1.称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约 30 ml的去离子水搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至 100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCI平衡苯

5、酚配制方法1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在 160 °C对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作 均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙 醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下

6、DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡 使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20 C,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取岀的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68 C水浴中使苯酚充分融解。 加入羟基喹啉(8-Quinolinol )至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。 加入等体积的1 M Tris-HCl ( pH8.0 )，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1 M Tris-HCl ( pH8.0

7、 )，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的 pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1 )。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中岀现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇(24 : 1 )混合均匀后，移入棕色玻 璃瓶中4C保存。10% (W/V) SDS.朋份浓度10%W7VJSDS配制量

8、 100 ml配制方法t feSIOggr纯厲的SDS过于100700m疑杯扒 加入约BD血的去锲子也68七加热常歟2滴加浓盐禮谓节pH値至了23将溶液定容至20旳后.奎混棵权2 N NaOH组份浓度2 N NaOH配制量100 ml配制方法1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOF溶解过程中大量放热，有可能 使玻璃烧杯炸裂）。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。2.5 N HCI组份浓度2.5 N HCI配制量100 ml配制方法混合

9、。1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N ），均匀2.室温保存。5 M NaCI组份浓度5 M NaCI配制方法后搅拌溶解。20% (W/V) Glucose组份浓度20% (W/V) Glucose配制量100 ml配制量1.称取292.2 g NaCl 置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 咼温咼压火菌后，4°C保存。1. 称取 20 g Glucose2. 加去离子水将溶液定容至3. 咼温咼压火菌后，组份浓度配制方法置于100200 ml烧杯中，加入约 80 ml的去离子水后，搅

10、拌溶解。100 ml。4 C保存。Solution 1（质粒提取用）25 mM Tris-HCl ( pH8.0 ) , 10 mM EDTA, 50 mM GlucoseI 中加入 2 ml 的 RNase A (20 mg/ml )配制量 1 L1 M TriS-HCI (pH80)25 ml0 5 M EDTA <pH6O)20 ml20% Glucose (1.11 M)45 ml910 ml配制方法1.量取下列溶液，置于 1 L烧杯中2. 咼温咼压火菌后，4C保存。3. 使用前每50 ml的SolutionSolution II （质粒提取用）组份 配制 配制5M ml仁呈取下

11、列諺披.STSOOml烧杯中.1O%SDS50 mF2 N NaOH50 ml200 mM NaOHT 1% WW) SDS£加灭蔺水定容至500ml.充分混匀.3富31保存“此溶液保存时间晟奸不婆超过一个月注蕙；SDS易产生不裏朗烈拨拌4浓度量方法Solution III （质粒提取用）组份浓度3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量500 ml配制方法1.称量下列试剂，置于 500 ml烧杯中。KOAcCHaCOOH147g57 5 ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至 500 ml。4. 咼温咼压火菌后, 4C保存。0.5 M ED

12、TA (pH8.0)组份浓度 0.5 M EDTA配制量 1 L配制方法 1.称取 186.1 g Na2EDTA - 2H2O，置于 1 L 烧杯中2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 (约 20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至 1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。1 M DTT组份浓度 1 M DTT配制量 20 ml配制方法 1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml 塑料离心管内。2. 加 20 ml 的 0.01 MNaOACpH5.2)，溶解

13、后使用0.22 mm滤膜过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20C保存。10 mM ATP组份浓度10 mM ATP配制量 20 ml配制方法 1.称取121 mgNa2ATP 3H2O加入 到50 ml塑料离心管内。2. 力口 20 ml 的 25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20C保存。组份浓度10 mM ATP配制量 20 ml配制方法1.称取121 mg Na2ATP3H2Q加入 到50 ml塑料离心管内。2.力口 20 ml 的 25 mM Tris-HCI(pH8.0),搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20°C保存。蛋白质电泳相关

14、试剂、缓冲液的配制方法30% (W/V) Acrylamide组份浓度30% ( W/V ) Acrylamide配制量配制方法Acrylamide290 gBIS1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。向烧杯中加入约 600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 加去离子水将溶液定容至1 L ,用0.45mm滤膜滤去杂质。于棕色瓶中4C保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累 性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有 可能含有少量的未聚合成份。40% (W/V) Acrylamide2.3.4.组份浓度40% ( W/V ) Acrylamide配

15、制量配制方法1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。AcrylamideBIS2. 向烧杯中加入约 600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至1 L ,用0.45 mm滤膜滤去杂质。4. 于棕色瓶中4 C保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒， 但也应谨慎操作， 因为有可能含有少量的未聚合成份。10% (W/V)过硫酸铵10% (W/V)过獗噩稷10 ml仁称取f g过硫酸彊.2.加入2 ml的去离子水话搅样溶霹亠3-贮存于4上4注冠10%过瞻較锤溶覩在4匚保存时可便用2周左右.超过期限会失去借化作用,

16、组份 浓度 配制量配制方法组份浓度0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS5 XTris-Glycine Buffer (SDS-PAGE 电泳缓冲液)15.1 g94 g5.0 g250 IT1MTrisHCI (pH6 8>10% (W. V)SDS0,5% (W- V)BPB50% (W)甘油5館(W.V)P-號基乙醉(2-ME)2. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。5 >SDS-PAGE Loadi ng Buffer浓度配制量5 ml配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂

17、，置于 1 L烧杯中TrisGlycineSDS配制方法 1.量取下列试剂，置于 10 ml塑料离心管中1 M TriS-HCl (pK6.8)1.25 mlSDS05 gBPB25 mg甘油2 5 rm2. 加去离子水溶解后定容至5 ml。3. 小份（500 m/份）分装后，于室温保存。4. 使用前将25 m的2-ME加到每小份中。5. 加入2-ME的Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右。考马斯亮蓝R-250染液（V/V）冰组份浓度0.1% （ W/V ）考马斯亮蓝 R-250, 25% （ V/V） 异丙醇，10%醋酸配制量 1 L配制方法 1.称取1 g考马斯亮蓝 R-

18、250，置于1 L烧杯中。2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度 10%（V/V）醋酸,5%（ V/V）乙醇 配制量 1 L配制方法1.量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。100 ml乙滋50 mldHaO850 ml2. 充分混合后使用。凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用）组份浓度 配制量 配制方法50%（ V/V）甲醇,10%（ V/V）醋酸1 L1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。500 ml100 ml400 ml

19、2均匀混合后室温保存。凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用）组份 配制 配制50% （WV） 10% （WV）戊二醋100 ml1 懂取下列试剂，加入W0-2Q0E啲试剂韜中。甲醉50mt戊二醴10mldHaOOml浓度方法2-均匀混合后塞温棵存，凝胶染色液（SDS-PAGE银氨染色用）组份浓度 0.4%（WN AgNO 1%（V/V）浓 NHH0,0.04%（W/V NaOH配制量 100 ml配制方法1. 量取下列试剂，加入 100200 ml 的试剂瓶中。20% Agg2 ml浓叭* HaO1 ml很 NaOH1 mldkkOsemi2. 均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低

20、时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。3. 本染色液应现用现配，不宜保存。显影液（SDS-PAGE银氨染色用）组份浓度 0.005%（W/V柠檬酸，0.02%（V/V）甲醛配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂，置于 1 L 试剂瓶中。拧揺酸50 mg甲醛0 2 ml2.加入1 L去离子水后，摇动混合溶解3.室温保存。核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50 XTAE Buffer (pH8.5)组份浓度2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 LTris242 fiNaEDTA 5H=037.2 5配制方法1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中2.向烧杯中加入约 800

21、ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌。4. 加去离子水将溶液定容至 1 L后，室温保存。10 XTBE Buffer (pH8.3)组份捌 Ti密爛腹 20 mM EDTA1 L配制置于1 L嵯杯中"配制Tris108 §Na=EDTA * 2H2O7.44确酸55 g2- 佝烧那中加AS800別的去密于水”充分攪拌溶解.3- 加去离子水将落液定容至1匚后，車温保存"浓度量方法10 WOPS Buffer组份浓度 200 mM MOPS, 20 mM NaOAc, 10 mM EDTA 配制量 1 L配制方法1. 称量41.8 g

22、 MOPS，置于1 L烧杯中。2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。4. 再向溶液中加入下列试剂。1 胡 NaOAc (DEFCJtH)20 ml0.5 M EDTA CpHS.O) (DEPC处理) 20 ml5. 用DEP（处理水将溶液定容至 1 L。6. 用0.45 um滤膜过滤除去杂质。7. 室温避光保存。注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用溴乙锭（10mg/ml）组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法1. 称量1 g溴乙锭，加入到 100 ml容器中。2. 加入去离子水100 ml

23、，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。4. 溴乙锭的工作浓度为 0.5ng/ml。注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。Agarose 凝胶1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5 X TBE或1 X TAE）。2. 根据制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。3. 加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。4. 在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过 程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分均匀

24、熔化。此操作重复 数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾 时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼 脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。5. 使溶液冷却至 60C左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液（终浓度0.5 mg/ml），并充分混匀。注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3 5 mm之间'7. 在室温下使胶凝固（大约 30分钟1小时），然后放置于电泳槽中进行电泳。注：凝胶不

25、立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4C下保存，一般可保存25天。琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA的最佳分辨范围琼脂糖汰康最佳践形DN閱分歯范圈（bp）0.5flo1 *000 竝 0000 7%800 - 12,0CK）500 “ 10.0001400 十 7,0001壬。口200 3,0002C°q50 - 2000组份浓6X_oading Buffer （DNA 电泳用）30 mM EDTA36% WM） Glycerol0 05% （曲巧 Xylene Cyanol FF0.05%Bt-omophenol Blue500 ml配制1 试剂，ST50C ml烧杯中.量EDTA4 4

26、gBromophrtol Blue260mgXylene C/anol FF250mg配制方法2-囱壤杯中SBA200 ml的去离予水后,加热揑拌充分落解.3加入180IY1啲甘油(Glycerol)后.便用2 W NaOHifl节pH值至7Q 4用去譽子朮定容至50。ml石*室弭保存.组份浓10 XLoading Buffer (RNA 电泳用)10 mMEDTA50% WAX)Glyoerol0 25% (WV)Xylene CyanolFF0.25% (W/V)Srcrnophenol Blue配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂，置于10 ml离心管中。0.5MEDTA (pH8

27、.0)200皿Brom ophenol Blue25 mgXyiene Cy-anoi FF25 mg2. 向离心管中加入约4 ml的DEP(处理 水后，充分搅拌溶解。3. 加入5 ml的甘油(Glycerol )后,充分混匀4. 用DEP（处理水定容至10 ml后，室温保存。核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20 X SSC组份浓度 3.0 M NaCI, 0.3 M 柠檬酸钠配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。NaCI175-3 9拧掾酸讷-如心2.向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加14 N HCI,调节pH值至7.0后，加

28、去离子水将溶液定容至1 L。4. 咼温咼压火菌后，室温保存。20 X SSPE Buffer组份浓度3.0 M NaCI, 0.2 M NaH 2POI, 0.02 M EDTA配制量 1 L配制方法1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。NaCI175,NaH沪04 - HsO27.6 gNaEDTA 7 4g2. 向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加 NaOH调节 pH 值至 7.4 （约 6.5 ml 的 10 N NaOH4. 加去离子水将溶液定容至 1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。50 X Denhardt's 溶液组份浓度1°a (

29、W/V) Ficoll 4001% (W/V) PcdyvinylpyrTolidoM 化(WV) BSA配制量 500ml配制方法1.称量下列试剂，置于 500 ml烧杯中Ficoll 400Polyvinylpyrrolidone&SA2. 加去离子水约 400 ml，充分搅拌溶解3. 加去离子水将溶液定容至 500 ml。4. 用0.45 mm滤膜过滤后，分装成每份 25 ml。5. -20 C保存。0. 5M 磷酸盐 Buffer组份浓度0.5 M Na 2HPO配制量 1 L配制方法1. 称量134 g Na2HP（4 7H2O置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离

30、子水充分搅拌溶解。3. 加入85%勺H3PC4 （浓磷酸）调节溶液 pH值至7.2。4. 加去离子水定容至 1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。Salmon DNA（鮭鱼精DNA）组份浓度 10 mg/ml Salm on DNA配制量 约100 ml配制方法1. 称取鮭鱼精 DNA 2 g 置于 500 ml 烧杯中，加入约 200 ml 的TEBuffer o2. 用磁力搅拌器室温搅拌 24小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCI,使其 终浓度为 0.1 M。3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后，使用 17号皮下注射针头快速吸打溶液约 20 次，以切断 DNA5.

31、 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。6. 离心回收DNA后,溶解于 100 ml 的去离子水中，测定溶液的 OD6o值。7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。8. 煮沸10分钟后，分装成小份（1 ml/ 份）。 -20 C保存。9. 使用前在沸水浴中加热 5分钟后，迅速冰浴冷却。k5M NaCi, O.SMNaOH下列试剂.3T1 L烧摇中.DNA变性缓冲液 组份浓度1 " 配制量 1 - 配制方法 ：NaQI2问规杯中加入约800利的去离子水：充分攪捋落亂乞加去豁子水将落懣定容全i L后.宣富保权预杂交液/杂交液（DNA杂交用）组份浓度6xSSC Cfl

32、SSPE)Denharctths0 5°&SDS100Salmon DMA配制方法1. 称量下列试剂，置于 200 ml烧杯中2OXSSC CSSSPE)30 mlSOxDenhardt10 ml1OSDS5 rni10 mg/ml Salmon DNA1 mldHaO54 ml2充分混匀后，便用0 45杂质后配用。预杂交液/杂交液（RNA杂交用）组份浓度GxSSC (SSPE)5XDenhard1*s0 5°flSDS100勺询Salmon DNA60% (V/VJFormarnide配制量 100 ml配制方法1. 称量下列试剂，置于 200 ml烧杯中配制量

33、约100 ml2OXSSC C®SSPE)30 mlSOxOenhardts10 mlWc SDS5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 rnlFormamrdo50 ml加sO4 ml2.充分混匀后，使用 0.45 um 滤膜滤去杂质后使用膜转移缓冲液（Western杂交用）组份浓度 39 mMGlycine, 48 mMTris, 0.037%配制方法1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中GlycineTris58 gSDS0-3? g甲醇2.(W/V) SDS, 20% (V/V)配制量 1 L向烧杯中加入约 600 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至

34、800 ml 后，加入 200 ml 的甲醇。3.4.TBST Bu什er(Wes拍m杂交膜清洗液)组份浓度 20 mMTris-HCI, 150 mMNaCl, 0.05%室温保存。(V/V)Tween 20配制量 1 L 配制方法1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaCI1 M Tris-HC! (pHfl.O)S3g20 ml2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.加入0.5 ml Tween 20后充分混匀。加去离子水将溶液定容至1 L后，4 c保存。4.封闭缓冲液 （Western杂交用）组份浓度5%（ W/V脱脂奶粉/TBST Buffer配制量 100

35、ml配制方法，充分搅拌1.称量 5 g 脱脂奶粉加入到 100 ml 的 TBST Buffer溶解。1. 4 c保存待用（本封闭液应该现配现用）。实验室常用培养基的配制方法Ampicilli n (100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法1. 称量5 g Ampicillin 置于50 ml离心管中。2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml3. 用0.22 mm过滤膜过滤除菌。4. 小份分装（1 ml/份）后，-20 C保存。IPTG (24 mg/ml)组份浓度24 mg/ml IPTG配制量50 ml配制方法1.

36、称量1.2 g IPTG 置于50 ml离心管中。2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml3. 用0.22 mm过滤膜过滤除菌。4. 小份分装（1 ml/份）后，-20 C保存。X-Gal (20 mg/ml)组份 度 配制20 mg/rnl X-Gal50 mtt于50 ml剧心管中“氏加入40 ml DMF (二甲基甲充分湿合落解后，定窖巻50讯配制方法H潑劳软铝仙湖 站 -20 C避光保存。LB培养基组份 度 配制 配制 法1% CW/V) Tiypiane, Q.5 (W/V) Yeast Extract (W/V) NaC1 L1. Tryptone10gYea

37、st Extract5gNaCIWg匕加入约300mi的去离子水.充分搅拌溶解3- ffijtI15NrJaOH (0 2 ml),调节pH值至70“4 .抑去禽子水将培养基定客至1 L.高温高压灭菌后i理匚保存"LB/Amp培养基组份浓度代(W/V)0.5% (W/V)1% (W/V)0.1 ingAnlTryptoneYeast ExlractNaAmpicillin配制量 1L配制方法1.称取下列试剂，置于 1 L烧杯中T ryploneY&aet ExtractNaCI2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加5 N NaOH (约0.2 ml )，

38、调节pH值至7.04. 加去离子水将培养基定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml )后均匀混合。7. 4 C保存。TB培养基 组份浓度1.2% (W V)Tryptone2W V)Yeasi Extraci0 4% (V V)G lycerof17 m|MKHlPO72 mWKaHPOi配制量 1L配制方法1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4 ) 100 ml。溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100

39、ml，高温高压灭菌。2. 称取下列试剂，置于 1 L烧杯中。Tryptone12 gYeast Extraci24 gClycerot4ml3. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，高温高压灭菌。5. 待溶液冷却至 60 C以下时，加入 100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6. 4 C保存。TB/Amp培养基组份浓度1.2% (W V)Tryptone(W V)Yeasr Extraci0.4% (VV)Glycerol17 mMKH2PQx72 mNKaHPQ*01 mg，mlAmpicillin配制量1L配制方法t盐缓冲诞 RE17 MKHi

40、PO*, O.72MK2HPO4) TOO rfilj®jR2-31 g KHPO 12.54s KH90 ml的去离子水中，揽样溶解后、加去詔千水定客至100 E们高逞离压灭菌u2称取下列试刑，豈于11杯中Tryptone12gYeast Extraci24 gGlycerol4 ml3加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶聽*加去离子水将培养是定容至？ L后，高温奇压灭菌5待副J冷豹至601以下时，加入的上迷灭面施盐缓冲議和ml的如哄I駅C100rrgW)J&均匀混含后4上保存JSOB培养基组份浓度2% (WV)Tryptone0 5% (WV)Veast Extrac

41、t0 05% WV)NaCI2 5mMKCI10 mMMgCh配制量1L配制方法1. 配制 250 mM KCI 溶液。在90 ml的去离子水中溶解1.86 g KCI后，定容至100 ml。2. 配制 2 M MgCI 2溶液。在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl 2后，定容至100 ml，高温高压灭菌。3.称取下列试剂，置于 1 L烧杯中。Tryptone20 gYeasi Extrad59NaCl05 g4. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。5. 量取10 ml 250 mM KCI溶液，加入到烧杯中。6. 滴加5 N NaOH溶液（约0.2 ml），调节 pH 值至

42、 7.07. 加入去离子水将培养基定容至 1 L。8. 高温高压火菌后，4°c保存。9. 使用前加入5 ml 灭菌的 2 M MgCL 溶液。SOC培养基组份浓度2% WV)T rypione0 5% EWV)Veast Extract0 05?& (W/V)NaCl2 5 mMKCI10 mMMgCls20 mM葡匐爛配制量 100ml配制方法1. 配制1 M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90 ml去离子水中，充分溶解 后定容至100ml，用0.22 mm滤膜过滤除菌。2. 向100 ml SOB培养基中加入除菌的1 M葡萄 糖溶液2 ml，均匀混合。3. 4 °

43、C保存。2XYT培养基组份浓 度配制量 配制方 法1.6% (W/V) Tiypiore, 1% (W/V) Yeast Exiract 0.5% (W/V) NaCI1 Lt.Tryptone13 gYeast Extract10 gNaCI5 glWAGOOmi的去离子水、充分搅拌濬亂3.滴"5 NhlaOH,调节pH值至了一也丄加去韶子水将培界基定容至1 -b向温高压灭菌后，4C存。<hbx broth组份浓 度配制量 配制方 法1.6% (W/V) Trypione, 1°o (W/V) Veast Exiracf, 0.5% (W/V) Nadl L1 称取

44、下列试剂.ST1 L烧杯利TiyploneYeast ExtractMaCIisgWg?加入约8WE的去高子就.充分搅拌溶解, 3. 5 N NaOH.调节t>±d抑去韶子水将培养基定客至1 L.5一离逼高压灭菌后| 4匚探存。NZCYM培养基组份浓度0.5%(W V)Yeasi Elraci01%(W V)Casamino Acid1%(WV)吨(WV)NCI0 2%(W V)MgSOj “ 7FhO配制量1 L配制方法1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中Yeast ExtractsgCasamino Acid$ gNZ®109NaCi59MgSOj 7HaO292. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 ml )，调节 pH 值至 7.04. 加去离子水将培养基定容至 1 L。5. 高温高压火菌后，4°