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文档简介
1、工业生产中噬菌体的检测及防治 2010.1.28噬菌体简介噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称,因部分能引起宿主菌的裂解,故称为噬菌体。噬菌体分布极广,凡是有细菌的场所,就可能有相应噬菌体的存在。在人和动物的排泄物或污染的井水、河水中,常含有肠道菌的噬菌体。在土壤中,可找到土壤细菌的噬菌体。噬菌体有严格的宿主特异性,一旦离开了宿主细胞,噬菌体既不能生长,也不能复制。实验室空气中噬菌体检测检测方法1 双层琼脂平板法 首先倒入下层琼脂培养基(2%,约10ml/皿)待用。融化上层培养基(1%),冷却至50左右时,每管中加入敏感指示菌 (枯草芽孢杆菌) 菌液0.2ml混合后立即倒
2、入上述平板铺平。在待检测角落空气中暴露几分钟,转入恒温培养箱, 30恒温培养612h观察结果。如有噬菌体,则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑噬菌斑。 2 单层琼脂平板法 省略下层培养基,将上层培养基的琼脂量增加至2%,融化后冷却至45左右,如同上法加入指示菌,混合后迅速倒平板。在空气中暴漏几分钟,30恒温培养616h后观察结果。方法1优点是能确切定量,方法2简便省料。噬菌体侵染形成的噬菌斑噬菌斑水中噬菌体的检测水中噬菌体的检测 取0.5ml生产指示菌液及待测水样0.2ml混匀,然后立即倒入已凝固的双层平板上层。放在2830培养24小时,观察有无噬菌斑。 (双层培养基方法同空气检测)生产中
3、噬菌体快速检测1离心分离加热法(快速检查) 取生产中正常培养液和怀疑侵染有噬菌体的异常菌培养液,4000rpm离心20min,分别取两组发酵液的上清液(a1),一部分于分光光度计上测定od650光密度值,另外各取5ml上清液于试管中,置水浴中煮沸2min(a2),检测a2溶液od650光密度值,记录结果,比较光密度的差异。2 载玻片法快速检测 将怀疑噬菌体污染的菌悬液与0.5-0.8%琼脂培养基混合,在无菌载玻片上凝固,经过培养2.5-4个小时,在显微镜下计数噬菌斑。噬菌体的防治1 生产车间的消毒(1)发酵罐排气和泡沫要通过药剂容器后外放(2)管道阀门死角要彻底灭菌(3)定期冲刷地面(4)菌种室减少与外界接触,操作人员严格执行无菌操作噬菌体的防治2 选育抗噬菌体菌株 使用抗噬菌体菌株,替代敏感菌株,这是发酵工业克服噬菌体危害的最有效措施。 3 发酵过程中检测 种子罐发酵后期立即采用载玻片快速检测法进行噬菌体检测4 发生污染后的挽救措施 早
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