发酵豆粕常见指标检测方法

1、粗蛋白含量检测GB/T6432 一、原理：凯氏法测定样中的含氮量、即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加 入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25, 计算出粗蛋白含量。二、仪器设备：1. 高速粉碎机，粉碎时间1分钟。2. 分样筛；0.45mm、40目3. 分析天平；感量 0.0001g4. 消化炉5. 滴定管；酸式50mL6. 锥形瓶；250mL7. 定氮仪；以凯氏原理制造的半自动蛋白测定仪三、试剂1. 硫酸：含量98%2. 氢氧化钠：40%水溶液mN3. 硼酸：2%水溶液m/V4. 混合催化剂：0.4g硫酸铜5个结晶水，6

2、g硫酸钾或硫酸钠，磨碎混匀。5. 混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处 保存期为三个月。6. 0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3 mL盐酸注入1000 mL蒸馏水中。标定：减量法称取0.8g左右在270-300 C灼烧2h的无水NaCOs，加水50mL溶解，加10滴混合 指示剂，用配好的盐酸滴定成暗红色，煮沸2min，冷却水中后再滴至暗红色，同时作空白试验不加Na2C03。计算：m X 1000C=V1-V2M 式硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度mol/L )文案大全m无水碳酸钠的质量， gV1 盐酸溶液的用量， mLV2 空白试验盐酸溶液

3、的用量，mLM 无水碳酸钠的摩尔质量数值， 单位为克每摩尔 g/mol M1/2NaCO 3=52.994 7. 蔗糖8. 硫酸铵：分析纯，枯燥四、分析步骤：国标推荐法1. 试样的消煮2. 称取试0.5g 含氮量580mg 准确至0.0002g，放入消化管中，参加6.4g混合催化剂，与 试样混合均匀，再参加12mL硫酸，于420 C消化炉中消化3小时。冷却后，参加蒸馏水 20ml , 待用。3. 氨的蒸馏；采用半自动定氮仪，将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，参加 2-3 滴 混 合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中参加氢氧化钠 溶

4、 液，以溶液变黑为宜，即当生成黑色的氢氧化铜时，加碱量已够。假设加碱量缺乏或过量，分解 液呈 蓝色而不显黑色，假设加碱不够，需再增加氢氧化钠用量，直到分解液呈黑色为止。蒸馏，蒸 馏时间 以吸收液体积到达 150mL 以上时为宜，降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需 流入锥形 瓶内。4. 滴定：用 0.1mol/L 的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变淡紫色为终点。5. 空白测定：称取蔗糖 0.5g ，代替试样， 按以上分析步骤进行测定， 消耗 0.1mol/L 的标准盐酸溶液的体积 不 得超过 0.2mL ，消耗 0.02mol/L 的标准盐酸溶液的体积不得超过 0.3mL。五、计

5、算：粗蛋白% V1 - V0CHCl 6.25 0.014 1 00m式中：V1滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL V0滴定空白时所需标准酸溶液体积，mLChcl盐酸标准溶液浓度，mol/L m试样质量，g0.014 每毫克当量氮的克数6.25 氮换算成蛋白质的平均系数水分检测GB/T6435 2006一、适用范围： 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和各种单一饲料中水分的测定，但用作饲料 的奶制品、动物 和植物油脂、矿物质除外。二、原理：试样在105 C烘箱内，在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。三、试剂和仪器设备：1高速粉碎机，粉碎时间 1 分钟。2分析筛 孔径 0.25mm 60 目

6、。3分析天平感量 0.0001g4 电热恒温箱烘箱可控制温度在105 ± 2 C5称样皿玻璃或铝质 , 直径 40mm 以上 , 高 25mm 以下 6枯燥器以氯化钙或变色硅胶为枯燥剂四、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样，其原始样量应在1000g以上，用四分法缩减至500g，风干后粉碎 至全部通过 40 目筛，再用四分法缩减至 200g ，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。如试样为多汁的鲜样，或无法粉碎时，应预先枯燥处理，称取试样200300g，在105 °C烘箱中烘15min，立即降至65 C，烘干56h。取出后，在室内空气中冷却 4h，称重，即得风干试 样

7、。分析步骤：1. 洁净称样皿，在103 C烘箱内烘1h，取出，在枯燥器中冷却30min，称准至0.0002g，再烘干 30min ，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于 0.0005g 为恒重。2. 用已恒重称样皿称取两份平行试样，每份 22.5g 含水重 0.1g 以上，样品厚度 4mm 以下准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在105 C烘箱内烘3.5h，取出，盖好称样 皿盖，在枯燥器中冷 却30min ，称重。五、计算水分含量 %按下式计算：W1 W2100%水分%=XW1 W0式中：W1 105 c烘干前试样及称样皿重，gW2 105 C烘干后试样及称样皿重，gWo已恒重的称样皿重，g

8、粗灰分检测GB/T6438一、原理：饲料样品在550 C灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质， 也包括混入饲料中的砂石、土等，故称粗灰分。二、仪器设备：1. 高速粉碎机：粉碎时间 1 分钟。2. 分样筛：孔径 0.25mm 60 目3. 分析天平：感量 0.0001g4. 咼温炉：有咼温计且可控制炉温在 550 ± 20 C5. 坩埚：瓷质，容积 50mL6. 枯燥器：用氯化钙枯燥试剂或变色硅胶作枯燥剂三、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样用四分法缩减至 200g ，粉碎后全部通过 40 目筛，装于密封容器中， 防止试样成分的变化或变质。四、 分析步

9、骤：将干净坩埚放入高温炉，在550 ± 2 C下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min , 放入枯燥器冷却 30min ，称其质量。再重复灼烧、冷却、称量，直至两次质量之差小于0.0005g 为恒质。在恒质的坩埚中称取 22.5g试料灰分质量在0.05g以上，准确至0.0002g，在电炉中碳 化 至无烟状态夏季和冬季，可适当延长时间 20min ，于550 ± 20 C下灼烧3.5h至灰白色，冷 却到200 C。取出，在空气中冷却约 1min，放入枯燥器中冷却至室温，称取质量。五、计算：粗灰分含量 %按下式计算：m2 m0粗灰分% =X 100m1 m0式中：m2为灰

10、化后坩埚加灰分的的质量，gm1为坩埚加试料的质量，gmo为恒质空坩埚，g所得结果应表示至 0.01%酸溶蛋白肽含量的测定据 QB/T 2653-2004 制定一、原理大分子蛋白质和肽链较长的多肽用三氯醋酸溶液进行沉淀，并将其中的短链小肽用酸 溶解出 来，其中包括小肽和局部 a-氨基酸。然后经离心、过滤、消化、蒸馏，测定其蛋白质含 量即酸溶蛋白。、试剂及仪器100ml烧杯、10ml和25ml移液管、半微量粗蛋白质测定试剂和装置、40目标准筛、15 %三氯醋酸溶液TCA溶液、4500转/分钟的离心机、定性滤纸等。三、试验方法1 准确称取样品4.0000g样品，参加15%TCA溶液20ml，混合均匀

11、，静置5分钟。用定性 滤纸过滤，取滤液约5ml，4500转/分钟离心10分钟，取上清液4ml注入枯燥的消化管中，参加 硫酸铜0.2g，硫酸钠3g，再加浓硫酸10ml，消化方法及蒸馏方法与蛋白的测定方法相同。2 计算公式：肽绝对含量Xi V Vo C hcl 0.0140 6.25 5 N 100 % mX1样品中肽含量%Chcl 标准盐酸摩尔/当量浓度V1样品消耗盐酸体积V0试剂空白消耗盐酸体积m 样品重量精确到 0.0001 X1X 0样品中的粗相对含量%100 %X。N为微量法测定粗蛋白时的稀释倍数，假设全量法测定那么为1不良寡糖定性检测薄层层析法一、原理薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载

12、体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种 层析方法。一般层析操作包括薄板活化、点样、展层、显色和结果分析等步骤。二、试剂配制注意：须在通风橱中进行1、展层剂正丁醇：异丙醇：乙酸：蒸馏水 =14： 10： 48：8 如有拖尾现象，可适当加大乙酸的量展层剂混匀后倒入展层缸。2、显色剂苯胺1ml ,二苯胺1g ,浓磷酸5ml，丙酮50ml先将二苯胺溶于丙酮中，最后加浓磷酸。因为二苯 胺不溶于水。 显色剂避光保存，有毒，小心操作。三、操作步骤1、样品处理：称取5g试样溶于40mL蒸馏水，于70 C水浴1h。2、离心8000rpm， 20min 取上清，放入 4 C冰箱保存。3、 硅胶板的活化：将硅胶板

13、置于烘箱中，110 °C活化1h备用。4、 点样，用水苏糖、棉籽糖和蔗糖做标准5mg/mL 。 配制方法：称取 5mg 的水苏糖或棉籽糖、蔗糖，参加 1mL 蒸馏水。 在硅胶板底部留两厘米，用铅笔划一直线，隔开间距画上点样孔，用毛细管点样，干了再点第二次，干透后展层。 注意：点样时假设发现上清已变浑浊，那么必须重新离心。 6、展层：将点好样的薄层板放入预先饱和的展层装置内，让点样一端浸入展层剂中，其深度约 0.5cm 切记：样品点不能浸入展层剂中 。当展层剂上升到离硅胶板的顶端 0.5-1.0cm 时，停 止 展层，迅速吹干。7、 显色：将显色剂喷雾，95 C烘箱显色6min。8、拍

14、照：关闭闪光灯，微距拍摄。挥发性盐基氮检测GB/T 5009.45 2003一、原理： 由于酶和细菌的作用，样品腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性物 质。此类物 质具有挥发性，在碱性溶液蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。二、试剂和仪器设备：1盐酸溶液 0.01mol/L ：取测蛋白用的 0.1mol/L 盐酸溶液 100.0mL 于 1000mL 溶量瓶中，加水 定 容至刻度。2氧化镁混悬液 10g/L ：称取 1.0 克氧化镁，加 100mL 水，振摇成混悬液。 3指示剂：甲 基红乙醇指示剂 2g/L ，次甲基蓝指示剂 1g/L 。4 硼酸吸收液20g/L ,可用蛋白测定用的硼酸

15、吸收液5 半微量定氮仪三、分析步骤：称取10克试样准确至O.OOOIg 于碘量瓶中，加100.0mL水，放入振荡器中振荡 30分钟， 再倒入离心机中离心5-10分钟。取上清液倒入锥形瓶中。上清液置冰箱中备用。蒸馏滴定：将盛有20mL吸收液及5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸 收液的液面下，准确吸取 10.0mL上述离心清液于蒸馏器反响室内，加10mL氧化镁混悬液，迅进行蒸馏5分钟即停止， 吸收液用盐酸标液滴定， 至终点速盖 塞，并加水以防漏气， 通入蒸气，蓝紫色，同时做试剂空白试验。四、计算：X 100V Vq)X 14 X C X 10X (mg/100g )=式中：

16、X试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克mg/100g V测定用样液消耗盐酸溶液体积，单位为毫升mL ：V0试剂空白消耗盐酸溶液体积，单位为毫升 mL ：C 盐酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升 mol/L :14 与 1.00mL盐酸标准滴定溶液 C HCl =1.000mol/L 相当的氮的质量，单位为毫克 mg m 试样质量，单位为克g。计算结果保存三位有效数字蛋白溶解度检测GB/T19541 2004一、方法原理 氢氧化钾蛋白溶解度可以反映大豆粕加热过度的情况，不同加热程度的大豆 粕，氢氧化钾蛋白 溶解度不同。先测定大豆粕样品在规定的条件下，可溶于氢氧化钾溶液中 的粗蛋白质含量；再测定 同一大豆粕样品中总的粕蛋白质含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解 度。二、试剂 10.2% 氢氧化钾溶液，相当于 0.04N ，pH=12.5 2.44gKOH 配成 1L 2凯氏定氮 所需的标准试剂三、仪器1. 高速粉碎机，粉碎时间 1 分钟。2. 样品筛：孔径 0.25mm3. 磁力搅拌器4. 离心机 : 转速为 2700r/min 以上 四、试样的选取和制备取具有代表性的大豆粕样品，用四分法缩减至 200g ，粉碎后全部通过 0.25 mm 孔径的样品 筛，充分混匀，装于密封容器中备用。五、操作步骤称取大豆粕试样 1.0 克，精确到 0