学习手册-大肠菌群数测定(精)

1、学习手册子情境：大肠菌群数测定引导文-单元设诈实训指导书引导文微生物学检测-大肠菌群数测定材料一、大肠菌群数简介大肠菌群主要包括肠杆菌科中的埃希氏菌属、 柠檬酸细菌属、克雷伯氏菌属 和肠杆菌属。这些属的细菌均来自于人和温血动物的肠道， 需氧与兼性厌氧，不 形成芽抱，在3537°C条件下，48h内能发酵乳糖产酸产气，革兰氏阴性。大肠 菌群中以埃希氏菌属为主，埃希氏菌属被俗称为典型大肠杆菌。 大肠菌群都是直 接或间接地来自人和温血动物的粪便。 本群中典型大肠杆菌以外的菌属， 除直接 来自粪便外，也可能来自典型大肠杆菌排出体外 730d后在环境中的变异。所以 食品中检出大肠菌群，表示食品受

2、到人和温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆 菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。材料二：抑菌剂大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂的主要作用是抑制其它杂菌， 特别是革兰氏阳性菌的 生长。国家标准中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂， 行业标准中LST肉汤利用十二 烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌， 而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选， 但对 大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。 有些抑菌剂用量甚微，称量时 稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，因此抑菌剂的添加应严格按照标准

3、方法进 行回答下面问题?大肠菌群数？ 相关资料材料一、测定方法由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌, 及兼性厌氧、在37C能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠 菌群的检测一般都是按照它的定义进行目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±C培养 48 ±h,观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板

4、上，36 ±1 T培养18-24h,观察菌落形态。证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖 发酵管36±C培养24i2h，观察产气情况。报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查 MPN表，报告每100ml (g) 大肠菌群的MPN值。具体操作参见GB4789.3-94中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学 检验大肠菌群测定设想一下，不同标准规定实验方法是否相同？ ' ?材料二、微生物学检验大肠菌群数的测定一、原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无 芽抱杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食

5、品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指 出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。食品中大肠菌群数系以每100g （或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number 简称 MPN ）表示。二、培养基及试剂单料乳糖胆盐发酵管、双料乳糖胆盐发酵管、乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼 脂（EMB）、革兰氏染色液、蛋白陈水、靛基质试剂、麦康凯 （MA）其它设备和材料 温箱（36 土 1）C、水浴锅（44 土 0.5）0、天平、显微镜、均 质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针。三、实验步骤（一' ）检验程序大肠菌群

6、检验程序见图52（二）操作步骤1 采样及稀释 以无菌操作将校样25g（或 25mL）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀 释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或 研磨做成1：0的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器，以800r/mjn 1000r /min的速度处理1min，做成1: 10的稀释液。 用1mL灭菌吸管吸取1: 10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或 其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成 1: 100的稀释液，换用1支lmL灭菌吸 管，按上述操作依次作10倍递增稀释液。 根据食品卫生要求或对检验样品污染情况的估计按种3管。也可直接用样品接

7、种。2 乳糖初发酵试验即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细 菌。将待校样品接种子乳糖服盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管1mL及1mL以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置（36土 1）C培养箱内，培养（24 土 2）h,的所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可 报告为大肠菌群阴性，勿有产生者，则按下列程序进行。如有产生者，则按下列 程序进行。3. 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（36 土1）C温箱内，培养18h 一 24h,:然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和 复发酵试验。4. 乳糖复发酵试

8、验即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酪管试验呈阳性反应的试 管内分离到的革兰氏阴性无芽抱杆菌，确能发酵乳糖产生气体。在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1 2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36 士 I） C的温箱内培养（24 土 2）h，观察产气情况。检样稀释乳糖胆盐发酵管36 ± 1C，24 ± 2h不产气大肠杆菌阴性伊红美蓝琼脂平板36 ± 1C, 18-24h革兰氏阳性大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阴性报告报告报告完成以下信息!凡乳糖发酵管产气革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性 糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报

9、告为大肠杆菌为阴性。大肠菌群数测定的检验程序主要包括哪几步?大肠菌群数的测定学习情境设计方案学习领域课程名称食品应用微生物基础总学时72学习情境名称微生物学检测-大肠菌群数测定使用学时4学习目标：1. 知识目标掌握大肠菌群数的疋义掌握大肠菌群数的作用掌握大肠菌群数测定的标准掌握大肠菌群数测定的过程2. 能力目标 专业能力能够熟练利用一般实验室的仪器 能够熟练配制培养基能够熟进行革兰氏染色的操作能够熟练测定大肠菌群数 方法能力阅读操作标准的能力动手实施能力创新能力自主学习新技术、新知识的能力分析问题、解决问题的能力 社会能力沟通能力团队合作能力组织能力3.素质目标培养规范意识培养吃苦耐劳、爱岗敬

10、业的精神教学内容教学方法1. 大肠困群数的疋义2. 大肠困群数的作用3. 培养基的配制4. 大肠困群数的标准5. 大肠困群数测疋的方法6. 革兰氏染色引导文教学法任务组织（30分钟）分配任务（发放生产指令），发放 引导文；组织几个学习小组；每组各选出一 名组长。讲述法、头脑风暴，参观法、 引导问题法、文字处理标识任务策划（30分钟）根据各自学习，通过讨论等方式， 确定大肠菌群数测定的方法。讨论法、可视化报告法、互动交流教学法操作过程（100分钟）根据制疋方案，教师参与培养基的 配制以及其他方面的操作过程； 在测量方案中要理论与实践相结 合。这个过程中师生共同分析、解决测 量过程中常见的问题。角

11、色扮演法、小组合作、取 长补短法、仿真训练法任务评审（20分钟）各组成员操作过程以及革兰氏染 色的过程进行评价；各班组成员对任务的组织、策划、 操作的观测等过程进行自评和互交互评价法、旋转交换讨论法、教师归纳法评；教师就各组成员在不同阶段的个 方面的表现情况进行评价； 教师根据其操作过程中情况提出 问题，学生通过讨论方式尝试给出 解释方法，教师总结归纳解决方 法。教学环境与资源教师知识与能力要求学生知识与能力准备1. 微生物基础实训室2. 模拟仿真实训 室3. 市级精品课网 站资源1. 能熟练配制培养基2. 能熟练大肠菌群数在食品方面 的标准3. 能熟练利用革兰氏染色的知识4. 能熟练分析操作

12、结果5. 具备处理测量过程中的常见问题的能力6. 具备观察力和课堂的控制能力具备一定的微生物知识基 础化学实验的基础知识 具有一定的自学能力考核评价：评价方式：过程性评价，作业和记 录考核评价内容：过程评价考核指标基础知识冋题教师在整个教学工作中主 要起引导作用。引导学生自 主学习，培养学生自主学习 能力；引导学生主动讨论， 培养学生的团队合作能力。 在实施过程中，引导学生主 动思考，培养学生发现冋 题，分析问题和解决问题的 能力；另外，教师应加强实 训室安全教育，同时对同学 灌输仪器使用过程中要注 意规范操作对设备进行维 护天津现代职业技术学院实训计划课程名称食品应用微生物基础实训学时4子情

13、境大肠菌群数的测定实训地点微生物实训 室实训目的1. 掌握测定大肠菌群数的原理和方法2. 熟练掌握测定大肠菌群数的操作过程3. 掌握革兰氏染色技术4. 培养学生的发现问题、分析问题和解决问题的能力。5. 培养学生的职业素养、团队合作精神。实训内容子情境： 微生物学检测- 大肠困群数的 测定测定大肠菌群数测定的方法和步骤 革兰氏染色的操作技术实训组织任务组织分配任务，发放引导文；分组，并选出组长；分组学习。任务计划各小组通过讨论方式，初步制定测量方案。在教师的引导下，完善和细化方案，在方案中要标明各项 操作时步骤以及操作过程的注意事项。任务实施检查仪器是否正常使用。教师示范操作要点。每个学习小组依次完成测定大肠菌群数的操作技术和步骤 每个