粗蛋白的测定 凯氏定氮法_第1页
粗蛋白的测定 凯氏定氮法_第2页
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文档简介

1、粗蛋白的测定 凯氏定氮法 粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定) 蛋白质含量测定（凯氏定氮法） 1 原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸汲取后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，依据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2 试剂及其配制 硫酸钾（分析纯）、五水硫酸铜（分析纯）、浓硫酸（分析纯）、40%naoh溶液（400g/l）、蒸馏水 0.1n盐酸标准溶液：量取9ml盐酸加适量水稀释至1000ml。 4%硼酸：取40g硼酸加水适量溶解后，定容至1000ml容量瓶中。 指示剂:甲基红0.1g，溴甲酚绿0

2、.1g，混合定容至100ml 95%乙醇中，在滴定中加23滴于硼酸中。 3 仪器 消化炉、半自动凯氏定氮仪、天平（0.1mg、0.1g） 4 分析步骤 4.1 称1g(精确至0.1mmg)左右样品于消化管中； 4.2 加7g硫酸钾和0.8g五水硫酸铜； 4.3 加12ml浓硫酸，渐渐地摇动，将样品用酸浸湿； 4.4 将涤气装置接在支架中的消化管上，将水抽气泵水龙头全开； 4.5 将装有涤气装置的消化管连支架放入消化器中； 4.6 5min后调小抽气泵水流，使酸恰好吸入涤气罩头； 4.7 连续消化直至全部样品变为透亮的蓝绿色澄清液体，依据样品种类，消化时间大约在3060min之间（将温度升到42

3、0时开头计时）； 4.8消化完毕，将装有涤气装置的消化管连支架一起从消化器中取出冷却15-20min； 4.9 在每个消化管中加入25ml蒸馏水； 4.10 将30ml接受液加入锥形瓶再加2滴甲基红-溴酚绿指示剂，放入蒸馏器升起持瓶台后，使馏出液出口浸入接受液； 4.11 将消化管放入蒸馏器，关上平安门； 4.12 加60ml 40% naoh加入消化管后进行蒸馏； 4.13 接受瓶中的溶液呈绿色，表示有碱-氨存在。 4.14用标准盐酸溶液滴定馏出液至蓝/灰色为滴定终点，记录盐酸溶液用 粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定) 量，同时做试剂空白试验。除不加样品外，从消化开头操作完全相同，记录空白试验消耗盐酸标准溶液的体积。 5 结果计算 粗蛋白（干基%）=n（v1-v2）0.114.007f/m(1-m%) 式中：nhcl标准溶液的浓度，mol/l v1滴定样品汲取液时消耗盐酸标准体积，ml v2滴定空白汲

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