大肠杆菌O104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书

1、大肠杆菌o104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书 大肠杆菌o104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书 大肠杆菌o104核酸扩增（pcr-荧光探针法）检测试剂盒 【产品名称】 中文名称：大肠杆菌o104核酸扩增（pcr-荧光探针法）检测试剂盒 英文名称：real time pcr diagnostic kit for escherichia coli o104 【包装规格】 20次/盒 【预期用途】 用于临床样品以及环境样品中的大肠杆菌o104的检测。 【检测原理】 试剂盒采纳taqman荧光探针的技术，在反应过程中大肠杆菌o104特异的荧光探针跟靶核酸杂交, 同时被taq酶水

2、解, 把探针上的荧光基团和淬灭基团分开, 从而通过荧光增量来实时推断大肠杆菌o104的存在。 【产品组成】 abi、roche、mj、bio-rad、eppendorf等多种全自动荧光定量pcr检测仪 【试验操作】 1 基因组提取 （1）取培育后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，弃上清。 （2）加入200l无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。 （3）加入80l裂解液，用移液器吹吸混匀，50水浴1小时，100 水浴15分钟，冰上 放置10分钟后12000rpm离心3min。 （4）取上清液用于pcr检测。 2 荧光定量pcr检测 （1）按下列组份配制反应液（反

3、应液配制请在冰上进行） 大肠杆菌o104荧光pcr反应液： 7.4l taq酶： 0.3l 样品dna或阴阳性对比品： 5l depc h2o： 12.3l （2）pcr扩增 95 2 min 95 60 1min 荧光检测在60，反应体系为25l，荧光通道选用fam通道。 【结果判读】 1 基线的设定 （1） 对于abi系列仪器，分析前把参比荧光定为none，假如没有ct16的强阳性标本，就 大肠杆菌o104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书 选3-15个循环的平均荧光信号为基线分析；假如有ct16的强阳性标本，就将此标本定为afumi dna1010 copy/ml，并将此样品从数

4、据库中剔除，再以3-15个循环的平均荧光信号为基线再分析ct。 （2） 对于icycler仪器，基线一般根据自设值（2-10）即可，在试验结束后，选择pcr baseline substract选项扣除基线值。若某些曲线消失了规章的猛烈的跳动，应视为非正常状况，将其从结果中剔除（击活select wells,将此孔彩色点去，然后选择display wells）并留意调整坐标，使全部曲线都在坐标以内。 （3） 对于lightcycler仪器，用荧光记数值f1/f2读取结果。基线设定原则以超过正常阴性对 照扩增曲线的最高点，且ct值不消失任何数值为准（一般在0.001-0.05范围内）。 2 阈值

5、的设定 应在扩增曲线的指数增长期内且高于阴性对比品的扩增曲线最高点，推举将阈值设定在指数增长期和线性期的拐点处。 1. 试验前请认真阅读本说明书。 2. 本试剂盒不做临床诊断。 3. 试验室管理应严格根据pcr基因扩增试验室的管理规范，试验人员必需进行专业培 训，试验过程中严格分区进行（试剂预备区、样本制备区、扩增和产物分析区），试验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。 4. 对每次试验进行质量掌握。 5. 试剂使用前要完全解冻，并混合匀称，但应避开反复冻融，探针应避光保存。 6. 全部检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部微 生物生物医学试验室生物平安通用准则和医疗废物管理条例。 【保存条件】 1本试剂盒于-20保存。 2pcr反应液应避开反复冻融。 【有效期】 有效期为6个月。 【生产企业】 天津生物芯片技术