肺癌中PCNA的研究

1、临床医学论文肺癌中pcna的硏究增殖细胞核抗原(prol i ferat ingcel inuclearanl igen 简称 pcna)由 miyachi 等于1978年在sle (系统性红斑狼疮)患者的血清中首次发现并命名，因其只存 在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的硏究发现pcna与细胞dna合成关 系密切，在细胞t曾殖的启动上起重要作用，是反映细胞t曾殖状态的良好指标，因 此近年来掀起了对pcna硏究的热潮，尤其在肿瘤方面13。1 pcna的特点pcna是一种分子量为36kd的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内， 为dna聚合嗨5的辅助蛋白。在细胞核内存在可溶性与不溶性两

2、种pcna，可溶性 pcna在细胞周期各期中均有表达，其量在dna合成过程中不发生明显变化，易被 去污剂提取、甲醇破坏；不溶性pcna较稳定，不易被去污剂洗脫、甲醇破坏，这 种pcna在gog1期细胞中无明显表达，g1晩期，其表达大幅度增加，s期达到 高峰，g2m期明显下降，其量的变化与dna合成一致，检测其在细胞中的表达， 可作为评价细胞增殖状态的一个指标1,2,4。2肿瘤屮pcna的硏究肿瘤细胞具有旺盛的增殖活性，而pcna可作为评价细胞增殖状态的指标。因 此，国内外在许多肿瘤中进行了 pcna的硏究，涉及pcna与肿瘤发生发展5,6、 分级1,710、分期1,10、放疗敏感性11,12、

3、预后1,7,8,10,1320、复 发和转移1,21、死亡原因20、肿瘤标志物18,22等各个方面的相关性，得出 了许多结论，但在某些方面因作者和所硏究肿瘤的不同，还存在一些争议，即使 尙没有争议的结论，也是从一种或几种肿瘤中得出的，这些结论是否适用于所有 肿瘤，仍有待进一步硏究。3肺癌中pcna的硏究pcna在肺癌中的硏究也较多，许多作者致力于这方面的探讨，期望找到有意 义、有价値的结果，但到现在为止，pcna在肺癌中硏究所得出的一些结果也同样 存在争论23。3.1 pcna与肺癌发生发展的关系夏书月等6在硏究肺鳞癌的发生、发展过程屮'发现pcna的表达有逐渐增 高，阳性细胞数逐渐增

4、多的趋势。在轻、中、重度不典型增生、原位癌及浸润癌 中，pcna标记指数分别为 12.5±8.7、433±14.9、681±91 '74.6+8.2、654±236 与正常和轻、中度不典型增生的上皮相比，浸润癌、原位癌和重度不典型增生的 上皮细胞pcna标记指数明显升高，pcna阳性细胞数也明显增多。认为pcna表达 为细胞异常增殖的标志，可作为肺鳞癌早期诊断的参考指标。但这仅是在肺鳞癌 中的初步探索，且病例数较少，能否作为肺鳞癌早期诊断参考指标，还需进一步 验证。3.2 pcna与肺癌分型的关系有作者15,24认为pcna在不同类型肺癌中表达不

5、同，鳞癌pcna标记指数平 均约为52%，腺癌为49%，大细胞肺癌为76%，小细胞肺癌为63%。何杰等25 的结果为：肺鳞癌标记指数为0.51±0.23，腺癌为069±034。在同一类型不同亚 型之间也表达不同。王恩华等13在86例肺腺癌中对各亚型进行分析：pcna在细 支气管泡癌中表达约为0.22±017，腺泡状腺癌中约为0.36±0.12，大细胞癌中 约为0.67±0.10。但也有作者认为pcna的表达仅能反映细胞的增殖状态，与组织 学类型无关。castellano26 ' fontamni14、fujii27等支持这种观点。3.3

6、 pcna与肺癌分化程度的关系有硏究表明：pcna表达随肺癌分化程度的增高而减少。王恩华13在肺腺癌 的硏究中发现：高分化组最低，pcna标记指数约为0.19±0.10，中分化组稍高， 约为0.35±0.10，低分化组最高 哟为0.55+0.17 ；何杰等25分别分析了肺鳞癌、 肺腺癌中pcna的表达，发现pcna标记指数与肿瘤分级呈正相关，zhao等28在 73例肺癌中得出了同样结论。可见肺癌中pcna的表达可反映肺癌细胞分化的好坏， 预示肿瘤恶性度的高低。这与在许多种其他肿瘤中的硏究发现基本一致。3.4 pcna与肺癌分期的关系大多数硏究表明:pcna表达与肺癌分期相关

7、分期愈晩fcna表达愈高ishida 等29在211例非小细胞肺癌中统计出i、u、iha、mb期各期pcna表达平均値 分别为30%、24%、40%、50%，有逐渐增高的趋势，但i、ii期差别不大。王 恩华等13的硏究也认为，肺癌中pcna的表达与n分期及m分期相关，随着分期 的增加，pcna表达增加。但也有作者持相反意见，fontanini等14在周围型非 小细胞肺癌的硏究中发现，pcna的表达与分期无关，他们的结果为：t1期pcna 表达値平均约为18%，t2期约为10%。是否是由于在早期（i、u ）肺癌中pcna 表达受宿主免疫系统抑制，变化不明显，而晚期肺癌因免疫抑制减弱，表达明显 增

8、加，还有待继续探讨。3.5 pcna与肺癌血管受侵的关系fontanim等14在40例周围型 淋巴结阴性的非小细胞肺癌(nsclc)中发现： pcna的表达与血管受侵明显相关，有血管受侵组的pcna表达明显高于无血管受侵 组，平均値分别为40%和10%汕11等27也发现pcna表达与肺癌血管受侵明 显和关。这可能与pcna高表达者分化差,恶性度高，容易侵蚀血管冇关3.6 pcna与肺癌预后的关系部分作者认为：pcna表达愈低，其生存时间愈长，预后愈好。王恩华等13 分析了 86例手术切除的肺腺癌病例 发现术后存活3年以内组与5年以上组之间， pcna表达値有显著差异淇标记指数分别为0 42&#

9、177;020和022±0.15;ishida等29 在i期nsclc中也发现，5年生存组中，pcna( + )组生存率明显低于pcna()组； fuj 11等26的硏究结果也支持这种观点。但有相当多的作者认为单凭pcna不能 评价nsclc 的预后 j matturri 30 ' monraval31 ' castcl lano26、ebina32 等各自分别硏究了 pcna的表达与术后nsclc生存时问的关系，没找到明确的相关 性。考虑这是由于肺癌的预后是由多种因素：如病理类型、病理分期、分化、治 疗情况、合并症、年龄、身体状况、pcna的表迖等综合决定的，单凭p

10、cna这一种 因素，难以预测肺癌的预后。3.7 pcna与肺癌复发的关系ogawa等33在35例术后复发的i期nsclc中发现，pcna( + )组复发时间明 显短于pcna()组，中位无瘤生存时问分别为2.5年和4年，认为pcna可预测i 期nsclc术后复发时间的长短。但所硏究病例太少，范围狭窄，结果有待进一步 证实。3.8 pcna与肺癌其它标志物的相关性fontanini等14在周围型肺癌中发现pcna表达在dna异倍体中明显高于dna 整倍体，并与异倍体dnas期分数明显相关，pcna表达高的分裂指数高于pcna表 达低的。还有硏究13,15,24,28,29,34表明肺癌中pcna

11、的表达与细胞构成、dna 指数、agnors计数、k167等相关。这些多为首次报道，不知结果能否重复，若结 论能确证，则无论在临床上，还是基础硏究中，pcna的应用和硏究将会更为广泛。从上可见，肺癌中pcna的硏究已深入到了肺癌的各个方面，但在许多方面所 得结果还不统一'造成这种结果不一致的原因很多'初步分析包括以下诸多因素：1)肿瘤本身的因素：肿瘤与肿瘤之间及同一肿瘤不同部位之间'细胞增殖都存在 很大的差异26,36,37，致使pcna表达不均。2）取材的影响：由于肿瘤内部不同 部位之问pcna表达不均，取材时可能取到高表达区，也可能取到中表达区或低表 达区，以致计数

12、结果不能代表整个肿瘤情况。3）制片过程中的影响因素：组织固 定时福尔马林的浓度，固定时间的长短，烤片时温度高低及烤片时间等对pcna的 抗原丿性都有影响。固定液浓度过高，固定吋间过长，烤片温度过高，烤片吋间过 长均会降低pcna的抗原性乃致使抗原性消失1,2。4）免疫组化染色过程中的影 响因素：免疫组化染色过程中所用抗体不同，所得pcna结果不同；微波炉加热能 恢复pcna的抗原性，增强切片的免疫组化染色效果37 ，使用微波炉处理切片， 能增加检测的数値；另外抗体的滴度，内源性过氧化物酶封闭情况，dab显色时间 长短，苏木素衬染的背景深浅等均会影响染片的效果，产生假阴性或假阳性，使 检测结果发

13、生变化。5）结果判断的影响：由于每个人所定的阴阳性染色标准不同， 选取视野不同，计数细胞总数不同，也造成了一定的人为偏差。由于实验中存在以上诸多影响因素，不同作者在肺癌中所硏究出的结果或在 不同肿瘤中所硏究出的结果，都难以对照相比，因此pcna的免疫组化硏究有必耍 采用统一的标准，减少实验误差和人为偏差，使彼此的结果具有可比性。总之'无论在整个肿瘤方面'还是单在肺癌这一方面'pcna的硏究都是较多 的，得出了许多有临床应用价値的结果，但由于肿瘤本身的变异性及人们硏究方法的差异，致使所得结果存在一些争议，这有待进一步验证，以便能达到一致的 结论，应用于临床，指导临床实践。

14、作者单位：刘跃平综述 汪楣 沈瑜 殷蔚伯 中国医学科学院肿瘤医院放 疗科北京市100021参考文献1魏永昆增殖细胞核抗原与肿瘤硏究进展屆外医学肿瘤学分册,1996;23(增刊)：47 92黄杰雄，黄致治增殖细胞核抗原的硏究进展国外医学生理病理科学与临 床分册,1994; 14(1): 9113 rochelle l,garcia md,coltrera el al. analysis of proliferalive grade using anti pcna/cyclin monoclonal antibodies in fixed,embedded t issues. am j patho

15、ls 1989;134(4):73394 takasaki y,fishwiid d,tan em. characterization of proliferating cell nuclear antigen recognized by autoantibodics in lupus sera. j exp med,1984;159:981925 kabayashi i,matsuo k,ishibashi y,ct al. proliferative activity in dysplasia and carcinoma in situ of the uterine cervix anal

16、yzed by pcna immunostaining and agnor staining. hum pathol, 1994;25:1986夏书月，姜彦多,何安光，等肺鳞癌发生过程中p53蛋白和增殖细胞核抗原 的表达中国肿瘤临床,1995;22(11): 77257吴名耀，郑瑞明，沈健，等食管癌增殖细胞核抗原的免疫组化硏究中华病 理学杂志,1993;22(4):239 408 woods al,hal 1 pa,shepherd na,ct al. the assessment of prol i fcrat ing eel 1 nuclear antigen (pcna) immunos

17、taining in prima ry gastro intestinal lymphomas and its relationship to histological grade,s+ g2+ m,phase fraction (flow cytometric analysis) and prognosis histopathology, 1991;19:2179 allegranza a,gi rlando s,arrigoni gl et al. proli ferat ing cel 1 nuclear antigen expression in central nervous sys

18、tem neoplasms viichows arch a pathol anat histopathol,1991;419(5):4172310 tsai st, j in yt proliferat ing cell nuclear antigen expression in oral squamous cell carcinomas j oral pathol med, 1995;24:313511 christopher gw,warland g,hagan mp, et al. tumor proliferating in rectal cancer following preope

19、rative irradiation. j clin oncol, 1995;13(6):14172412祝淑钗食管癌pcna,cyclin d表达和dna含量对术前放疗预后的影响： 学位论文北京：中国协和医科大学，1997.13王恩华，刘闺男,赫明昌增殖细胞核抗原表达与agnors图像分析在判断 肺癌预后上的应用中华病理学杂志,1995;24(3):143514 fontanini g,macchiarini p,pepe s, et al. the expression of prolifcrating cell nuclear antigen in paraffin sect ions

20、of peripheral ,nodc negative non smal 1 eel 1 lung cancer. cancer, 1992;70(6): 15202715 oyama t,mitsudomi t,mizouc t, ct al. proliferating cell nuclear antigen may be superior to argyrophi1ic nucleolar organizer regions in predicting shortened survival of patients with non smal1 cell lung&nb sp;

21、cancer. surg oncol,1995;4(2):83916 russo j frederick j ,0wnby he, et al predictors of recurrence and survival of patients with breast cancer am j clin pathol, 1987;88:123 3117 oka k,hoshi t,arai tprognostic significance of the pc10 index as a prospective assay for cervical cancer treated with radiat

22、ion therapy alone, cancer,1992;70(6):15455018杨竹林，李永国,黄生福,等胃癌组织中pcna评分和bcl-2.p53蛋白表达及相互关系中国肿瘤临床,1997; 24( 11): 811419 yu ccw,hal1 pa,fletcher cdm,et al. haemangiopericytomas:the prognostic value of immunohistochemical staining with a monoclonal antibody to proliferating cell nuclear antigen(pcna)hi s

23、topathology,1991;19:293320文恢胜增殖细胞核抗原(pcna)与声门上喉鳞癌的关系及临床意义：学 位论文北京:中国协和医科大学，1997.21阮幼冰，武忠弼,ivankovic s增殖细胞核抗原及表皮生长因子受体在大 鼠肝癌与胃癌中的表达中华病理学杂志,1994; 23 (5): 274722 pich a,pont i r,chiusa l, et al. mib 1 ,ki67,and pcna scores and dna flow cytometry in intermediate grade malignant lymphomas j clin pathol,1

24、994;47:182223 abe s.molecular biological prognostic markers in lung cancer.nippon geka gakkai zasshi, 1997;98(1):2724 kawai t,suzuki m,kono s, et alproliferating cel 1 nuclear antigen and ki 67 in lung carcinoma.correlat ion wi th dna flow cytometric analysis cancer,199 4;74(9):24687525何杰,汪万英,姚敏肺癌c-

25、erb-2,p21和pcna的表达及意义.浙江肿 瘤,1998;4(1):8 026 castellano vm, sotelo t, bal lest in c et al. analysis ofproliferating cell nuclear antigen (pcna) expression in 24 cases of primary non smal1 cell pulmonary carcinomas and correlation with survival. arch bronconeumol,1996;33(3):1273127 fuj ii m,motoi m,sae

26、ki h, et al. prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen (pcna) expression in non small ccl1 lung cancer.acta med okayama, 1993;47(2):103828 zhao t,zhang yl,li cd. a comparison of proliferating cell nuclear antigen immunostaining,nucleolar organizer region staining in lung cancer.c

27、hung hua chieh ho ho hu hsi tsa chih,1993;16(6):342429 ishida t,kancko s,akazawa k ct al. prolifcrating cell nuclear antigen expression and argyrophi 1 ic nucleolar organizer regions as factors influencing prognosis of surgically treated lung cancer patients cancer res,1993;53(20):5000330 matturri l

28、,lavezzi am,grignani f, et al. the prognostic value of cell proliferation in non small cell lung cancer assessed with tritiated thymidine and anti pcna antibodies. eur j cancer,1994;30a(9):1397831 alemany monraval p,cebollada m,vi1lalba s,et al. study of the expression of proliferating cell nuclear

29、antigen and pl85 in non smal1 cell lung carcinoma arch bronconeumol, 1996;32(4): 165933 ebina m,steinberg sm,mui shine jl,et al. relat ionship of p53 overexpression and up regulation of proliferating cel 1 nuclear antigen with the clinical course of non small cell lung cancer cancer res,1994;54(9):249650334 ogawa j,tsurumi t,yamada s,ct al. blood vessel invasion and expression of si