培养基配制及适用性检查操作规程

1、题目培养基配制及适用性检查操作规程共3页编码:0s-zl037-02制定人审核批准人制定口期审核口期批准口期颁发部门质量部颁发数量2份生效日期分发单位质量部1目的：建立一个培养基配制操作规程，保证检验结果的准确。2范围：适用于微生物限度检查用培养基。3责任人：质检员、化验主管。4内容：4. 1微生物限度检查用培养基的配制4. 1. 1配制用具：蒸汽灭菌器、电炉、据瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳、 牛皮纸、天平、量筒。4. 1. 2根据配制量称取干燥培养基质，置拋瓷缸中，加入规定的纯化水或琼脂 等使其溶解，将扼瓷缸放到电炉上加热煮沸。4. 1. 3根据培养基的配方要求调节ph值，将配好的培养基

2、分装到若干个三角 瓶中，瓶口塞好棉塞，盖上牛皮纸捆扎好，放入灭菌器中，灭菌条件为12i°c高 压灭菌15分钟。4. 1.4ph7.0氯化钠蛋白月东缓冲液成分(g/l)蛋白腺氯化钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾重量lg4.3g3.56g723g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液16克，加入1000ml纯化水 中，微温溶解，分装，115°c高压灭菌30分钟备用。将配好的缓冲液分装到若干 支试管中，直接接种法缓冲液9ml/管，试管口塞好棉塞；放入灭菌器中进行灭菌。 4. 1.5营养琼脂培养基成分(g/l)蛋白陈氯化钠牛肉膏粉琼脂重量10g5g3g15g方法：称取使用该处方生产的

3、符合规定的脱水培养基33克，加入1000ml纯化水 中，加热煮沸溶解，分装，121°c高压灭菌15分钟备用。4. 1.6玫瑰红钠琼脂培养基成分（g/l）重量成分（g/l）重量5g葡萄糖10g硫酸镁05g磷酸二氢钾lg琼脂14g玫瑰红钠0.0133g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基30.5克，加入1000ml纯化 水中，加热煮沸溶解，分装，121°c高压灭菌15分钟备用。4. 1.7胆盐乳糖培养基成分(g/l)重量成分(g/l)重量20g牛胆盐10g乳糖5g磷酸氢二钾4g氯化钠5g磷酸二氢钾1.3g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基37克，加入100

4、0ml纯化水屮，加热煮沸溶解，分装，121°c高压灭菌20分钟备用。4.1.8培养基配制注意事项：(1) 采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基pll进行校验。(2) 配制的培养基不应有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。(3) 培养基的分装量不得超过容器的2/3,以免灭菌时溢出。包装时，塞 子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。(4) 培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。(5) 灭菌后的培养基应保存在225°c,防止污染，可在3周内用毕；保 存于密闭容器屮，可在1年内使用。制备好的培养基放置时间不宜过 长，以免水分散失及染菌。(6) 宜采用水浴加热熔化琼脂

5、培养基，勿用电炉直接熔化琼脂培养基，以 免营养成份过度受热而破坏。(7) 已熔化的培养基应8小时内一次用完，剩余培养基不宜再用。4.2培养基的适用性检查4. 2. 1微生物限度检查中计数用培养基包括：(营养琼脂、玫瑰红钠琼脂)、控 制菌检查用培养基包括胆盐乳糖培养基。4. 2. 2计数培养基适用性检查试验用菌株大肠埃希菌(escherichiacoli) cmcc (b) 44102金黄色葡糖球菌(staphylococcus aureus) cmcc (b) 26003枯草芽抱杆菌(bacillus subtilis) cmcc (b) 63501白色念珠菌(candida albicans

6、) cmcc (f) 98001黑曲霉菌(aspergillus niger) cmcc (f) 98003铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa) cmcc (b) 101044. 2. 3检查方法4. 2. 3. 1培养基制备 按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养 基）、玫瑰红钠培养基（被检培养基和对照培养基）、胆盐乳糖培养基，灭菌后备 用。4. 2. 3. 2营养琼脂培养基4. 2. 3. 2. 1方法：取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡糖球菌、 枯草芽孑包杆菌各2皿，每皿接种lml菌液（含菌50loocfu）,另一平w1不接种 菌作为空白对照，

7、倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于3035°c倒置培 养48h,计数；被检培养基同法操作。4. 2. 3. 2. 2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平 均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基 的适用性检查符合规定。4. 2. 3. 3玫瑰红钠琼脂培养基4. 2. 3. 3. 1方法：取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌，黑曲霉菌各2皿， 每皿接种1ml菌液（含菌50loocfu）,另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注 对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h,计数；被检培养基同 法操作。4. 2. 3. 3. 2

8、结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平 均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基 的适用性检查符合规定。4. 2. 3.4胆盐乳糖培养基4.2. 3.4. 1方法:新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基4瓶，121°c灭菌 15min,备用。分别接种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黃色葡糖球菌各一瓶, 接种菌液量lrnl （不大于loocfu）,另-瓶不接种菌作为空白对照；被检培养基 同法操作，置规定温度培养。4.2. 3.4.2结果判断：培养18小吋，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌 应生长良好，表现为液体培养基变浑浊；培

9、养48小吋，空白培养瓶和接种金黄 色葡糖球菌的培养瓶应不得浑浊。4. 2. 3. 5mug 培养基4.2. 3. 5. 1方法:新鲜配制5ml/支的对照mug培养基,121°c灭菌15min,备用。 取3支，接种大肠埃希菌2支，接种菌液0.2ml （不大于loocfu）,另一支不接 种菌作为空白对照，培养5小时，在366nm紫外光灯下观察结果；被检培养基同 法操作，置规定温度培养。4. 2. 3. 5. 2结果判断：空h培养管应不得浑浊，h 366nm处观察无荧光；与对照 培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊，366nm 处应呈现荧光。若荧光不明显，则可延

10、长至24h。4. 2. 3. 6麦康凯琼脂培养基4. 2. 3. 6. 1方法：新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基，121°c灭菌15min,冷却至 60°c倾注平皿，35°c培养箱预培8h后备用。取5个无菌麦康凯琼脂平板，分别 涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各5 1111,接种菌液0. lml （含菌50 loocfu）,另一平板不接种菌作空白对照，涂布均匀后于规定温度倒置培养；被 检培养基同法操作。4. 2. 3. 6. 2结果判断：培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应 与对照培养基上的菌落一致；培养24小吋，空白平板应无菌落生长。4. 2. 3

11、. 7四硫磺酸钠亮绿培养基（ttb）4.2. 3. 7. 1方法:新鲜配制10ml/支的对照ttb培养基基础,121°c灭菌15min, 备用。临用前，无菌操作加入0. 2m 1碘试液和0. lml亮绿试液。取5支，分别接 种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各2支，接种菌液lml （不大于loocfu）, 另一支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。4.2. 3. 7.2结果判断：培养18小吋，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌 应生长良好，表现为液体培养基上清浑浊；培养24h,空白的培养管和接种金黄 色葡糖球菌的培养管不得浑浊。用于ttb中的碳酸钙对浑浊现象观

12、察有影响，因此若浑浊现象不明显，则将各培 养物接种至胆盐硫乳琼脂（dhl）或沙门、志贺属琼脂（ss）平板上划线观察ttb 培养物生长情况，空白对照和接种金黄色葡萄球菌的培养管划线后应无菌生长， 对照和被检ttb培养划线接种至琼脂平板后应有菌落生长，且颜色形态一致。下面是赠送的经典语录和搞笑语录，不需要的朋友可以下载 后不急删除！ ！谢谢！【感人的话要学会感恩、同情、宽容、忍耐、积极与真诚。希望是心灵的一种支持力量逆境的冋馈，使生命将更加精彩而富足.【感人的话】每个人的好运跟坏运都是分配好的，虽然我的好运没有别人多，所以只要是一点点好事，我就非常感恩了。【祝福的话】 这里有一本你当年用过的笔记，

13、它有点儿泛黄了，书页里夹着的话也早c没了香气，却还是谢谢你把它借给了我。今天的我们c经分开，却依然是朋 友。还是要跟以前一样，我听着你的述说，看着你笑，看着你难过委屈去安慰你。我 会把祝福写在这木笔记里，在那多枯黄的花的旁边，我会写下我的祝福：祝福你过得 好！祝福你过得比我好！然后，将它寄给你。不要哭泣，你。【表白的话】 爱你是一个念头，爱你是一种冲动，爱你是一种宿命，只属于我的宿命。爱你是一段旅程，爱你是一场幸福的长跑，爱你是一路沐浴阳光，爱你是一 径的花香。爱你，是睡觉呼吸一般的自然！请，给我你的爱。【有哲理的话】 世上有三种人：一是良心被狗吃了的人，二是良心没被狗吃的人，三是良心连狗都不

14、吃的人.【激励人的话】如果你看到面前的阴影，别怕，那是因为你的背后有阳光。【感人的话】 身白衣为你洗尽铅华，白衣白发白胜雪，捧卷古墨，盈袭暗 香，我踏着平平仄仄的长长短短，款款步入风情万种的宋词里。溪边桃红青染，流水 潺潺，柳丝随风絮，我在桃花下写着红笺小字，一抹嫣然回眸，惊落了桃花，也惊落 了你的心。佛说t年一轮冋，今牛，你在哪里？【有哲理的话】母爱是一滴甘露，亲吻干涸的泥土，它用细雨的温情，用钻石的 坚毅，期待着闪着碎光的泥丄的肥沃；母爱不是人生屮的一个凝固点，而是一条流动 的河，这条河造就了我们牛命中美丽的情感之景。【表白的话】我深深地恳求你；不要把我逐出你的爱门之外，我一分一秒也不能缺

15、少你的爱。只有赢得你的爱，我的牛命才有光彩。【表白的话】爱你，却要无欲无求，好难！爱你，却要偷偷摸摸，好累！爱你,却让自己心碎，好惨！但竟然心甘情愿，好傻！但是我能肯定的是：我是真的很爱你！【表白的话我扬一把散沙粒粒想念漫天纷飞带给我对你的祝福，我洒下一瓢涟水滴滴飘洋流到你的心海，爱你，今牛:无悔，牵了你的情，爱了你的人，我会努力呵 护你，一生一世！【表白的话】你的热情，温暖了我冰冻的心；你的大胆，鼓起了我爱的热忱；你 的关怀，激起了我感激之情。新年伊始，愿我们透过那爱湖的波光水雾，一起憧憬美 好的未来。情人节快乐！【表白的话】也许我的笑容不够灿烂，但足够为你扫清冬日里的阴霾；也许我的 双手不

16、够温柔，但述能为你拂去俗世尘埃！如果命运安排我们在一起，我会好好珍惜 你！情人节快乐！【甜言蜜语的话】我们结婚吧，好不好？那样我们就可以不再对着电话诉说想念, 就可以每天淸晨起来看见你的睡脸，然后一起吃一顿不太丰盛却很温暖的早餐。我们 结婚吧，好不好？那样我们就可以拿着民政局发的红色小本子四处炫耀，我们可以在 房间里挂满结婚照，看着看着就会不自觉的微笑。我们结婚吧。【表白的话】我需要你，就像冬天里的棉袄，夏天里的雪糕，黑暗屮的灯泡，饥 饿屮的面包一我不能没有你！【有哲理的话】用真理检验真理永远是真理，用错误掩饰错误将会错再错。我 们不能拥有真理，但是我们可以防止错误。【离别的话】愿你作一滴晶亮

17、的水，投射到浩瀚的大海；作一朵鲜美的花，组成 百花满园；作丝闪光的纤维，绣织出鲜红的战旗；作-颗小小的螺丝钉，-辈了坚 守自己的岗位【离别的话】我们曾经在-起欣赏过美丽的花；我们曾经在-起幻想过美丽的季 节。同学啊，同学，分别后不要忘了我们曾经一起走过的日子。【离别的话】红叶纷飞的枫林里，我们曾拥有多少冋忆。那飘舞着的枫叶，将我 们带进一个无比美妙的境界。【离别的话】别离，是有点难舍，但不怅然；是有点遗憾，但不悲观c因为我们 有相逢的希望在安慰。【有哲理的话】人活着，第一要紧的事情就是要有眼光。有了眼光，并相应确泄应该为之努力的口的和口标，工作就会出现乐趣，这样才有希望最终成为个事业和 生活的

18、成功者，生命就会丰富多彩。【有哲理的话】在貞-相肯定永无人知的情况下，个人的所作所为能显示他的品 格。冇些事情的确没冇人知道，除你之外，没冇人知道，但是你必须对得住自己，最 好能问心无愧。因为问心无愧可生自信，而自信会让你生活得更从容。【有哲理的话】没有任何的动物是比蚂蚁更勤奋，然而它却是最沉默寡言的。与 其埋怨世界，不如改变口己。管好口己的心，做好口己的事，比什么都强。人生无完 美，曲折亦风景。别把失去看得过重，放弃是另-种拥有；不要经常艳羡他人，人做 到了，心悟到了，相信属于你的风景就在下一个拐弯处。【有哲理的话】有些人成就不大，不在于智力或能力不够，而在于没有克服自己 心理上的弱点和谬见

19、，没有充分发挥自己既有的潜力和才能。只有不断向自己挑战， 向生活挑战，才能取得更人成功。【有哲理的话】面対别人的反対意见，如果你针锋相对地进行争执和批驳，対方 很难从内心真止接受，在表达方式上委婉一些，效果就好多了。【有哲理的话】当我们放眼这个世界的吋候，如果以自我为中心，很可能会以为 自己了不起，可一 11我们把心歇下來，用赤子之心來观察，就会发现我们是多么渺小c 我们什么时候都能看清自己不如人的地方，那就是对生命有真正信心的时候。【有哲理的话】胸有平常心，幸福自然来。人的心态如同琴上的弦，太紧则易断, 太松则无咅，只有松紧适度，才能弹出美妙之咅。保持一颗平常心，才是人生的真谛。 怀一颗平常

20、心，看淡得失，超越成败，不为物欲所迷，不被烦恼所扰，明心见性，随 缘自适。平常心，是一种人生态度，也是一种生活智慧。【有哲理的话】绝大多数人都喜欢嘲笑别人，而不愿意被别人嘲笑。在别人处于尴尬境遇吋，你如果能通过自己出来减少他的难堪，他定对你非常感激。【有哲理的话】对于胸怀大志的有志之士和勤奋努力的人来说，障碍是不会起什么作用的。他们会说：不会再有什么困难能拦得住我了。只要有百折不挠的信念，就 会战胜许多强人的阻力。【有哲理的话】成功地推销自己是迈向成功的第一步。在推销自己的过程屮，多动脑筋，设计一些小花样，就容易引起别人的兴趣和关注。搞笑语录一次，同事儿个去美国，到超市买东西，用济南话讨论，有

21、个美国人过来用标准的济南话说：你们是济南的？ ！"暴汗，原来这老外是以前战争时期留在中国的美 国人后代，同事问他："那你英文怎么样啊？"老外一拍大腿道："英语太他妈难学 了！"哈哈，有木有笑趴啊。公司加班到半夜，所有人都眼皮打架，一姑娘哀叹："我现在真想变成一个因 字。"众问其故，姑娘说："就是个人四肢平摊躺在大床上。"话音刚落，旁边 男同事嘟曦："困。"一先生感冒去医院挂吊针，护上小姐很麻利的给这位先生插上针挂好盐水，一个 多小吋过去了，盐水瓶的水打完了，护士过来马上又换上瓶。这先牛

22、.不解，问护士小姐说："小姐，处方单上不是只开了一瓶吗？"护上小姐指着打完盐水的空瓶盖说, "先生，您运气真好，这瓶中奖了，再来瓶！"一退休老头，闲来无事就教鹦鹉说话，每夭早上必教："早上好！"可惜！几个 月后，鹦鹉仍不开口。一日，老头心情不佳，未教。只听鹦鹉大叫："老头，今天牛t!连好也不问了啊！"白雪公主逃出上宫，来到森林，看到一间小木屋，里而排列着七张小小的床。白 雪公主就躺下睡看了。傍晚七个小人冋来了，白雪公主说："你们就是我命中的七个 小矮人吧。"七个人面而相觑，然后说："你

23、走错地方了，我们是金刚葫芦娃。"爷孙三人去钓鱼，爷爷拿看鱼杆发呆，孙子看到后对爸爸说："瞧瞧，你爹在那 发呆，跟傻b似的。"爸爸打了儿子一耳光生气的喊道："你爹才傻b呢！"作业做了很久，顺手打开收咅机，-个温柔的声咅传出："如果肤色粉红，脸上 的绒毛细嫩柔软，那么说明很健康"听到这里，忍不住摸了口己的脸，对镜顾盼, 再笑一笑，样子健康可爱。这时，乂听播音员说道："好，听众刖友，这次我们的养 猪知识讲座就到这里。"话说上技校时我们班为机电八班。某口，学校组织拔河比赛。我们班对战二班。二百女生加吋喊："机二，加油机二，加油"我们班女生也学着人家喊："机 八，加油机八，加油"我滴个神！出差，刚出车站就来一大婶："小伙子，住旅馆呀？"我说："不用。"大婶马 上换成暧昧的语气："有小姑娘哟，很漂亮的。"我汗，说："不要小姑娘。"大婶 立刻改口："老姑娘，老姑娘也有，便宜一点。"再汗，说："我不要姑娘。"大婶 沉默了下，小声说：&