生存素在结肠癌中的表达及其临床病理意义

1、生存素在结肠癌中的表达及其临床病理音义【摘要】目的 探讨survivin蛋白在结肠癌中的表达及其与肿瘤分化程度、浸 润深度、淋巴结转移、dukes分期等各临床病理参数之间的关系。方法 应用免 疫组织化学技术，检测43例结肠癌组织中survivin蛋白的表达，并与同期15 例结肠腺瘤与10例正常癌旁组织作对照。结果 结肠癌组织中survivin的阳性 表达率为62.79%,显著高于腺瘤组和正常癌旁黏膜组，差异有统计学意义(x2 分别=10. 88、12. 80, p均< 0. 05); survivin的阳性表达与肿瘤的浸润深度、 脉管侵犯及淋巴结转移呈正相关(x 2分别=4.46

2、. 7.57. 6.66, p均<0. 05), 与dukes分期有关(x 2=5. 59, p<0. 05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化 程度无明显关系。survivin表达阴性和阳性患者的5年生存率比较，差异有统计 学意义(x 2=5. 08, p<0. 05) o结论survivin在结肠癌组织中呈高表达，并 参与结肠癌的侵袭与进展，可能是反映结肠癌生物学行为及判断其预后的重要生 物学指标之一。【关键词】结肠肿瘤；生存素；预后abstract objective to explore the expression patterns of s

3、urvivin in tissue specimens of primary colon cancers and the association between the surviving expression and pathological characteristics of colon cancer. methods formal in-fixed paraffin-embedded samples f rom 43 colon cancer, 15 adenoma and 10 non-cancer mucosa were immunostained using polyclonal

4、 survivin. the degree of immunostaining was recorded according to the percentages of staining and distributions within the cytoplasm and nucleus. results 62. 79% of cancer samples were positive for surviving protein, whi 1 e normal colon tissue was immunonegative. statistical analysis revealed that

5、survivin expression was correlated with invasive depth, vessel infiltration, lymph node metastasis ( x 2=4. 46? 7. 57, 6. 66, p& it; 0.05) and dukes stage (x 2=5. 59, p&l t; 0. 05) ? but independent of gender, age, tumor size, and differentiation. the survival time had significant difference

6、 between survivin expression positive and negative patients(x 2=5. 08, p⁢0. 05)conclusions survivin is frequently overexpressed in primary colon carcinoma and could both be a useful diagnostic marker and a favorable prognostic indicator for colon cancer patients.key words?演 colon carcinoma; s

7、urvivin; prognosis survivin m 于抗细胞凋亡蛋白(inhibitor of apoptosis , iaps)家族，主要通过抑制细胞凋 亡、促进新生血管形成而维持肿瘤细胞的生长并加速其侵袭。研究表明，survivin 在多种人类恶性肿瘤中有异常表达，在乳腺癌(65%)及其转移淋巴结(85%)中表达 可逐级增加，与乳腺癌、肝癌、胰腺癌等肿瘤的组织学分级、放化疗敏感性以及 各种预后不良的病理参数有关1 3。本次研究利用免疫组织化学技术对人结肠 癌及癌前病变组织内survivin的表达情况进行检测，以阐明它们在预测结肠癌组 织学类型、生长方式、脉管浸润、分期和预后方面的临

8、床病理意义。1材料与方法1. 1 一般资料 选取温岭市第一人民医院1999年8月至2003年8月间手术 切除的结肠癌标本43例。患者年龄31-78岁之间，平均(57.83 + 6.70)岁,其中 男性28人，女性15人。按dukes分期标准：dukes a、b期25例,dukes c、d 期18例。组织学分型：高分化腺癌12例、中分化腺癌17例，低分化腺癌14例。 有脉管侵犯者25例、无脉管侵犯18例。另取同期结肠腺瘤15例及距癌边缘5cm 以上的邻近无增生或不典型增生的非肿瘤结肠黏膜10例作为对照。均有5年以上 完整随访资料，随访截止日期2008年11月，生存期的计算从手术日期到随访截止 日

9、期，或由于复发、转移而死亡的日期为止，截尾值为0。1.2方法1.2.1实验试剂 免疫组织化学试剂：兔抗人survivin多克隆抗体(工作 液)、sp试剂盒、dab显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.2.2免疫组化染色链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(sp法)，操作 按sp试剂盒说明书进行，主要包括石蜡切片、常规脱蜡至水、抗原修复、3%h2o2 阻断内源性过氧化物酶、山羊血清封闭、滴加一抗、二抗及链霉素抗生物素蛋白- 过氧化物酶复合物、dab显色、复染封片。用pbs代替一抗做阴性对照，用试剂 盒中阳性片子做阳性对照。以胞质或胞核有棕黄色颗粒为阳性信号。1.2.3判断标准surviv

10、ing主要定位于肿瘤细胞质、伴有胞核着色，阳性 细胞呈棕黄色染色。根据染色程度和染色细胞百分率进行评定和分析：基本不着 色者0分，着色淡考1分，适中者2_分，深者3分;着色细胞占计数细胞的百分率 <5%记为0分，6%一25%记1分，26%一50%记2分，>51%记3分;将每张切片的染色 程度与染色细胞戸分率得分相乘，其乘积为最后得分。厂1分为阴性(-)，2一3分 为弱阳性(+), 4一6分为中等阳性(+), &gt;6分为强阳性(+)。1.2.4统计学方法 采用spss13. 0统计软件。计数资料采用x 2检验或 fishery确切概率法检验。生存数据采用log-ank检验

11、差异。设p&lt;0. 05为 差异有统计学意义。2结果2. 1 survivin在结肠癌组织、腺瘤与正常黏膜组织中的表达见表1由表1可见,结肠癌组织中survivin的阳性表达率显著高于腺瘤组和正常癌 旁黏膜组，差异有统计学意义(x 2分别=10.88、12.80, p均&lt;0. 05) o 2.2 survivin与结肠癌临床病理参数的关系见表2由表2可见，survivin的阳性表达与肿瘤的浸润深度、脉管侵犯及淋巴结转 移呈正相关(x 2分别=4. 46. 7. 57. 6. 66, p均&lt;o. 05),与dukes分期有关(x 2=5.59, p&

12、;lt;0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无明显关系(x 2=2.56、0. 28. 0. 83. 0. 14, p 均&gt; 0. 05) 02. 3 survivin表达与预后的关系见表3由表3可见，survivin表达阴性和阳性患者的5年生存率比较，差异有统计 学意义(x2=508, p&lt;0. 05) e因此,survivin蛋白的阳性表达可能与结肠癌 预后不良有关。3讨论结肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展与细胞凋亡及异常增 殖密切相关。survivin通过上调转录因子特异性蛋白1 (spl)与fas l启动子的结 合，可增加结肠癌细胞

13、的fas配体的表达，而抑制其凋亡4。目前，不少学者对 survivin在结肠癌组织中的高表达情况进行了报道，但有关其在结肠癌发生发展 中的临床病理意义，并没有一致的结论5, 6。本次研究利用免疫组织化学技术 对结肠癌标本中survivin的蛋白表达进行检测，并与同期结肠腺瘤和邻近正常非 肿瘤黏膜作对照。结果显示结肠癌黏膜多数呈survivin阳性表达，与腺瘤及非肿 瘤组织相比差异显著(p&lt;0. 05),其中肿瘤侵及浆膜或浆膜外、有脉管侵犯或淋 巴结转移者,dukes c、d期的患者survivin阳性表达率明显升高(p&lt; 0. 05); 这与alper等7报道的su

14、rvivin蛋白主要表达于结肠肿瘤细胞，尤其是炎症细 胞高度浸润和血管增生密集区的观点相符。同时，stanilov等8在转录水平对 癌组织survivin mrna检测也支持了这一论点。生存分析表明，survivin阴性患者的总体生存时间及5年生存率均高于阳性 患者。结合survivin在癌黏膜、腺瘤及正常黏膜的表达率递减现象，本次研究推 测survivin在结肠肿瘤中的表达可能是与肿瘤演变相一致的渐进过程，与结肠癌 的侵袭及转移有关，并且可能是判断其预后的重要分子标志之一。近年来，许多 研究尝试对survivin表达或信号通路进行阻断，以观察其对肿瘤细胞的影响，如 sarthy等利用sirn

15、a干扰k-ras转化的结肠癌细胞的survivin表达,发现 survivin基因的缺失将导致细胞周期的g2-m期停滞，使细胞转向死亡。因此， 利用单克隆抗体、小分子抑制物、反义基因等抑制survivin的表达或功能有可能 发展为结肠癌靶向治疗中的一种新方法。【参考文献】1 sohn dm, kim sy, baek mj, et al. expression of survivin and cl inica 1 correlation in patients wi th breast cancer j biomed pharmacother, 2006, 60 (6): 289-292.2

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17、hol, 2004, 17 (11): 1378-1385.4 asanuma k，tsuji n, endoh t, et al. survivin enhances fas ligandexpression via up-regulation of specificity protein 1-mediated gene transcription in colon cancer cel isj. j immunol, 2004,172 (6):3922-3929.5 huerta s, heinzer 1 ing jii, lin j, et al. modification of gen

18、e products involved in resistance to apoptosis in metastatic colon cancer cells: roles of fas, apaf-1, nfkappab, iaps, smac/diablo, and aif j. j surg res, 2007, 142 (1): 184-194.6 ponnelle t, chapusot c, martin l, et al. cellular localisation of survivin: impact on the prognosis in colorectal cancer j. j cancer res clin oncol, 2005, 131