石荠苧总黄酮抗炎作用及其机制探究

1、石界苧总黄酮抗炎作用及其机制探究作者：聂無余陈欢王芳芳熊耀康白冰冰【摘要】目的观察石养苧总黄酮抗炎作用并对其机制进行初步研究。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀，冰醋酸致 小鼠腹腔毛细血管通透性增加，角叉菜胶致小鼠足跖肿胀及 大鼠气囊炎等炎症模型，观察石莽苧总黄酮对不同炎症模型 的抗炎作用，并测定蛋白质、前列腺素e 2 （pge 2 ）, 一氧化氮（no）,丙二醛（mda）含量及超氧化物歧化 酶（sod）活性。结果石养苧总黄酮能显著降低小鼠毛细 血管通透性，抑制小鼠二甲苯致耳肿胀，减轻小鼠足跖肿胀, 降低炎症组织pge 2含量，抑制角叉菜胶致大鼠气囊炎 模型中渗出液总蛋白质含量，降低血浆no, mda

2、含量, 增强血浆sod活性。结论石养苧总黄酮具有明显的抗炎 作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性、抑制pge 2 , no等炎症介质生成及增强清除氧自由基、抗脂质过 氧化能力有关。【关键词】石养苧总黄酮抗炎作用机制abstract： objectivet o study the ant i i n f 1 a m m a t o r y effect o f f 1 a v o n e s i n mosla hangzhowensis m a t s u da and i t s m e c h a n i s m.methods a u r i c 1 e edema induced b

3、 y d i m e t h y 1 b e n z e n e , permeabi 1 i ty o f b 1 o o d increase b y h a c and edema i n feet induced b y carrageenan i nmice,air pouchacuteinf 1a mm a tioninducedb y carrag ee n a ninrats werea p p1iedfor antiin f 1 a mm a to r yexper i m e n ts. anti i n f 1 a m m a tory effect o f flavon

4、es i n mosla hangzhowensis m a t s u d a were obseved in d i ff e r e n t mode 1 s , then the c o n t ent o f protein, prostagland i n e 2( p g e 2 ), nit r o g e n m o n o xi d u m ( n o ), ma 1 ona 1 dehyde (mda) and the activity o f superoxide dismuitase (sod) were determined results f 1 a v o n

5、e s i n mosla hangzhowensis matsuda could inhib it vasopermeabi 1 i t y and engorgement o f i n f 1 a mm a t o r y texture, decrease t o t a1 protein content i n e f f 1 u sion, reduce p g e 2 , n 0 and m d a contents and increase sod a c t i v i t y conclusion t h e m e c h a n i s ms o f anti infl

6、amma tory action of flavones i n mosla hangzhowensis matsu d a are related t o the d e p r e s s i o n o f v a s o p e r m e a b i 1 i t y , r eduction o f inflammatory mediators and augment a tion of oxygen free radical seavengirg capacity and a n t i 1 i p i d peroxidat io n.key words： mosla hangz

7、howensis m a t s u d a ； fl a v o n e s ； anti i n f 1 a mm a t o r y effect； mechani sm石莽苧 mosla hangzhowensis matsuda 为唇 形科草本植物，为江浙民间常用中草药，具有清热解毒，理 气化湿之功效，主治夏日感冒、腹痛泄泻、湿疹、茄肿、外 伤出血、跌打损伤、疮毒和慢性支气管炎等1。现代药理 研究表明，石养苧含有1, 8 校叶油素、侧柏酮、b 石竹烯、香荆芥酚、百里香酚、黄酮类化合物及脂肪酸等成 分2, 3o本课题组前期研究发现，石养苧中总黄酮类成 分具有明显的抗菌、抗流感病毒作用，

8、能明显改善流感病毒 感染小鼠肺组织炎症4, 5。本实验进一步对其抗炎作用 及其机制进行系统研究，以期为石养苧的临床应用和新药开 发提供实验依据。1器材1 . 1 动物i c r小鼠，体重1 82 2 g ； 健康w i s t a r大鼠，清洁级，体重18 02 0 0 g。均由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动 物有限公司提供，动物合格证号：x yxk （浙）2 0 0 3 - 0 0 0 3 o1 . 2 药品与试剂石养苧总黄酮（t f s ）,由资 源鉴定教研室提供。地塞米松片（批号：0 6 12 18）, 浙江仙居制药厂。阿司匹林肠溶片（批号：0 6 1 1 0 2 ）, 南

9、京白敬宇制药有限责任公司。氢化可的松（批号：0 6 1 2 10）,山东新华制药股份有限公司。角叉菜胶（批号： 4 5 f - 0 4 2 7 ）, sigma公司。伊文思蓝（批号: f 2 0 0 4 0 2 1 3 ,进口分装），国药集团化学试剂有限 公司。sod检测试剂盒（批号：20070331 ）, n 0检测试剂盒（批号：20070331 ）, md a测定 试剂盒（批号：20070402 ）,总蛋白液体试剂盒（批 号：2 0 0 7 0 4 0 3 ）,均购自南京建成生物工程研究所。其他试剂均为分析纯。1 . 3仪器t u - 1 9 0 0双光束紫外可见分光 光度计，北京普析通用

10、仪器有限责任公司。b s 1 1 0 s电 子天平，北京赛多利斯公司。微量移液器，thermo la b s y s tems finn p i p e t t e o2方法与结果 21对冰醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响6取小鼠5 0只，雌雄各半，随机分成5组，分组及给药剂量见表1 （模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药,1次/ d ,连续5 d ,末次给药后1h,尾静脉注射0. 5 %伊文思蓝生理盐水溶液01 m1/10 g ,并同时腹腔注射06 %醋酸溶液0. 1 m 0 m i n后处死，用6 m 1生理盐水冲洗腹腔，洗液离心5 m i n ( 15 0 0 r / m i n ),

11、取上清液在分光光度计5 9 0 nm处，测定值。表1 tfs对小鼠毛细血管通透性的影响（略）与模型组相比，*p&lt；o. 05, *p&lt；o. 01； n二 10由表1结果可知，t f s能显著抑制冰醋酸致小鼠 毛细血管通透性，其中t f s 2 5 , 5 0 , 1 0 0 mg/ k g剂量组与模型组相比较有显著意义。22对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响6取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，分组及给药剂量见表2 （模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，1次/d, 连续5 d ,末次给药3 0 m i n后，于小鼠右耳两面涂 二甲苯0 . 0 5 m 1致炎，左耳不涂

12、为正常耳；1 h后 处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径6 mm打孔器在 同一部位取下耳片，称重，以左右耳片重量差值表示炎性肿 胀程度。由表2结果可知，t f s能显著抑制二甲苯致小 鼠耳肿胀，其中5 0 , 1 0 0 mg / k g剂量组与模型组 相比较有显著意义。由表2结果可知，t f s能显著抑制二甲苯致小鼠 耳肿胀，其中5 0 , 1 0 0 m g / k g剂量组与模型组相 比较有显著意义。表2 tfs对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（略）与模型组相比，*p&lt；o. 05, *p&lt；0. 01； n=102. 3对角叉菜胶引起足跖肿胀及炎症组织中pg e 2的

13、影响7取小鼠5 0只，雌雄各半，随机分为5组, 分组及给药剂量见表3 （模型组给予同体积生理盐水）。每 日灌胃给药，1次/ d ,连续5 d ,末次给药后30m i n,于每只小鼠左后肢足跖注射1 %角叉菜胶5 0 u 1 , 4 h后颈椎脱臼处死小鼠，于踝关节处剪下左右后肢，称 重，以左右后肢重量之差作为炎症肿胀程度。将剪下上述致 炎足，剥皮，剪碎放入2 m 1生理盐水中浸泡2 4 h , 离心，取上清液0. 1 ml,加0. 5 m o 1 / l k 0 h 甲醇溶液2 m 1 ,在5 0 °c下异构化2 0 min, 用甲醇稀释至4 ml,于2 7 8 n m处测定od值，以

14、每 克炎症组织相当的od值表示p g e 2的含量。表3 tfs对小鼠足跖肿胀及炎症组织pge2含量的 影响（略）与模型组相比，*p&lt；o. 05, *p&lt；0. 01； n=10由表3结果可知，t f s能显著抑制角叉菜胶致小 鼠足趾肿胀及降低炎症组织p g e 2含量，其中t f s 5 0, 10 0 m g / k g剂量组与模型组相比较具有显著意 义。2. 4对角叉菜胶致大鼠气囊炎的影响6取大鼠 60只，按体重随机分为6组：空白组、模型组、阳性对照 组及石养苧总黄酮高、中、低剂量组。除空白组和模型组给 予同等生理盐水外，每组动物均连续灌胃给药。于给药当天 在大

15、鼠背部肩胛区皮下注入空气10ml,第3天及第6 天再次注入空气各5 m 1 ,维持气囊的膨胀度，并在末次 给药后在大鼠背部气囊内注入2 %角叉菜胶2 m 1诱发 炎症，空白组注入相应体积生理盐水，3 h后再给药1 次，于致炎6 h后麻醉，心脏取血，一2 0£保存待测n 0, md a含量及s0d活性。处死动物，气囊内注入冰 生理盐水（含肝素5 0 u / m 1 ）进行灌洗，收集灌洗液, 测定总蛋白含量。结果见表45。表4对大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白含量的影响 （略）与模型组相比,*p&lt；o. 05, *p&lt；o. 01； n=8由表45结果可知，角叉菜胶致

16、炎后，tfs能 显著降低炎症介质渗出，其中5 0 , 7 5 m g / k g剂量 组均能降低大鼠气囊渗出液中总蛋白含量，降低血浆中n 0, mda含量，增强sod活性，与模型组相比具有显 著性差异，提示t f s具有显著的抗炎作用。表5对大鼠气囊炎模型中血浆sod活性，no, mda含 量的影响（略）与模型组相比，*p&lt；o. 05, *p&lt；o. 01； n=83讨论炎症是在致炎因素作用下，由炎症细胞及其释放的炎 症介质参与引起的一系列病理生理过程。在炎症反应中，致 炎因素引起毛细血管扩张，通透性增加，中性粒细胞趋化、 游走至炎症反应灶，释放炎症介质参与炎症反应8

17、, 9,并发生呼吸暴发，产生0 2.等活性氧自由基。这些氧自由基不仅能增加血管通透性，而且攻击生物膜磷脂中的多 聚不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，造成生物膜损伤，尤其 脂质过氧化产物mda毒性更强，能进一步加重炎症反应, 而体内自由基清除剂如sod可通过清除自由基，抑制脂 质过氧化反应。p g e 2作为一种炎症因子，存在于炎症 组织中，可与缓激肽、白三烯等炎症介质起协同作用，引起 血管扩张，加强组胺和缓激肽升高血管通透性的作用。通过 抑制p g e 2的合成，可以减轻炎症反应10, llo no是一种重要的信使物质，同时也是一种重要的炎症介质，在炎 症反应的许多环节发挥复杂的调节作用，其促炎症

18、反应包括 促进血管扩张，增强血管通透性，激活前列腺素合成酶等， 研究认为急慢性炎症的发生均与no有关系12。本实验 结果显示，石养苧总黄酮可明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀和 角叉菜胶致小鼠足趾肿胀，降低炎症组织pge 2含量,降低冰醋酸致小鼠毛细血管通透性，减少角叉菜胶致大鼠气 囊炎模型中渗出液总蛋白质含量，降低血浆no, md a含量，增强血浆sod活性。提示石莽苧总黄酮具有显著的 抗炎作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性，抑制pg e 2 , no等炎症介质生成及增强清除氧自由基、抗脂质过氧化能力有关。【参考文献】1 浙江省卫生局.浙江民间常用草药第3集 m.杭州：浙江人民出版社，1 9 7

19、 2： 6 9 .2 江苏新医学院.中药大辞典m.上海：上 海科学技术出版社，1 9 8 6： 6 0 9.3 吴翠萍，吴国欣，陈密玉，等.石养苧精油的g c -ms分析及其抑菌活性的研究j .植物资源与 环境学报，2 0 0 6, 1 5 ( 3 )：2 6 .4 曾晓艳，吴巧凤，程东庆.石香壽、苏州养苧 不同提取物体外抑菌作用的比较研究j .中国中医药科 技，2 0 0 7, 1 4 ( 1 )： 3 5 .5 吴晓宁，吴巧凤，陈京.浙江产石养苧属植 物研究进展j .浙江中医学院学报，2 0 0 5, 2 9 ( 4 )： 9 2 .6 陈奇.中药药理学实验m.上海：上海科 学技术出版社，2 0 0 1： 4 3 .7 邢建峰，侯家玉，邹节明，等.溃结康胶囊的抗炎作用机制j中国医院药学杂志，2 0 0 5,25(9)： 8 1 7 8