脓汁和粪便标本中病原菌的检测2ppt课件

1、器材预备器材预备斜面斜面4 4支，空气、手指皮肤、细菌分别培育物上次实验平板支，空气、手指皮肤、细菌分别培育物上次实验平板医学微生物学实验综合性实验三v空气细菌学检查结果分析v手指皮肤细菌学检查结果分析空气的细菌学检查空气的细菌学检查组号时间(min)地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟) CFU：colony forming unit WHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围级区10器官移植、

2、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液实验室级区200无菌室、手术室、供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房级区200500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围1000 1035星级宾馆、饭店1500 202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店2500 30普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱4000 40音乐厅、影剧院、录像厅（室）、游艺厅、舞厅

3、、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）7000 75展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室液体或固体标本菌落总数测定v可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。v分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。v倾注46营养琼脂培育基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37培育48小时。v选择菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定规范。v将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。 1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 2人1个营养琼脂平板上:甲

4、、丙常规洗手下:乙、丁规范洗手甲丙乙丁丙丁手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+ 第2格为洗手后 常规(甲、丙)洗手方法：? 标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：？第4格空白对照：-医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测三v菌落特征察看P11v细菌纯培育P10v脓汁和粪便标本检验录像v油镜运用方法讲解菌落特征(Colony Characteristics)大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。外形：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规那么等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。外表：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、潮

5、湿或枯燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。色素：普通为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培育基不着色)和水溶性色素(菌落及培育基均着色)。 细菌的溶血景象v根据细菌对血平板中红细胞的溶解才干可分为以下三种溶血类型甲型溶血甲型溶血: :产生溶血素，不完全产生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周围有性溶血，在血平板上菌落周围有1 12mm2mm半透明的草绿色溶血环。半透明的草绿色溶血环。乙型溶血乙型溶血: : 呈完全性溶血，在血呈完全性溶血，在血平板上菌落周围有平板上菌落周围有2 24mm4mm宽，界限清楚，宽，界限清楚，

6、无色透明的溶血环。无色透明的溶血环。丙型溶血丙型溶血: :不产生溶血素，在血不产生溶血素，在血平板上的菌落周围无溶血环。平板上的菌落周围无溶血环。细菌的纯培育 Pure Culturesv脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、外表光滑、潮湿、边缘整齐、不透明。37培育24小时 v粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是由于大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，构成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈

7、伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径12mm。37培育24小时 紫黑色紫黑色v假设培育、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色能够会发生改动。由于大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落能够会由原来的紫黑色变成粉红色，和致病菌颜色一样。v密集或半密集区域的菌落，不一定是单菌落，有能够是菌落构成单位CFU 。由紫黑色变成粉红色由紫黑色变成粉红色37培育36小时 斜面接种分工v甲普通平板黄色菌落1支斜面 v乙普通平板白色菌落1支斜面 v丙伊红美蓝平板紫黑菌落1支斜面 v丁伊红美蓝平板粉红菌落1支斜

8、面 v斜面标志：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。v选择平板上一样的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。v在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落，得到同组同窗认可，才干挑取。画圈选菌落画圈选菌落甲甲黄色黄色接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。 乙乙白色白色接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。 丙丙紫黑紫黑接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。 丁丁粉红粉红接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。 甲甲黄色黄色乙乙白色白色丙丙紫黑紫黑丁丁粉红粉红斜面接种法 Streak Slant Method甲黄色, 乙白色。丙紫黑, 丁粉红。标志：组号，颜色生物平安警告v接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒

9、。v气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内分散开,5um经过呼吸道直接到达肺泡。vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明缘由的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中分散引起的。v实验时应坐着，在火焰周围1020厘米内操作，坚持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。灭菌 搜集平板 灭菌桶内平板底部朝下，盖朝上放置 高压蒸汽灭菌 洗刷。奥林巴斯 CX21型 生物显微镜运用须知v显微镜是精细光学仪器，请不要让其遭到撞击，请小心操作。v在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。v假设拿住载物台和镜筒等部位搬运的话，有能够会呵斥损坏。开关与调整光强v开

10、或关之前，必需将亮度调整旋钮按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。v电源开关拨到 侧为开，拨到侧为封锁。v按箭头方向转动亮度调整旋钮变亮，相反方向转动那么变暗。聚焦v从显微镜的侧面察看，按箭头方向转动粗调旋钮，使物镜尽能够接近标本。一边看目镜，一边渐渐逆箭头方向转动粗调旋钮， 使载物台下降。v看到标本以后，用微调旋钮来正确对焦。10倍物镜的任务间隔WD，从物镜到标本的 间隔为10.5mm。v 油镜的WD为0.13mm。调整聚光镜位置和孔径光阑v用聚光镜上下挪动旋钮，将聚光镜转到最上面。v在孔径光阑环上刻有物镜倍率10倍，100倍等，察看时将与运用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜v旋转物

11、镜转盘，将希望运用的物镜10倍、100倍转到标本的上方。100倍浸油物镜运用方法v油镜放入光路之前，一定要在标本的察看部位上加一滴浸油。v旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。v假设浸油内有气泡，会影响察看，可略微旋转物镜转盘，使油镜来回经过12次浸油，排除油内气泡。香柏油折射率香柏油折射率n=1.515n=1.515空气折射率空气折射率n=1.00n=1.00玻璃折射率玻璃折射率n=1.52n=1.52油浸镜的原理光线光线 滴加香柏油可使滴加香柏油可使光线更多进入物镜光线更多进入物镜,防防止光线经过折射率低止光线经过折射率低的空气而散失的空气而散失,以提高以提高物镜的分辨率物镜的

12、分辨率,使物象使物象亮堂明晰。亮堂明晰。 放大倍数：目镜放大倍数：目镜10倍物镜倍物镜90或或100倍倍显微镜油镜的运用P13v10物镜标本位置滴加香柏油100油镜浸泡油中,几乎与标本接触任务间隔0.13mm细调理调焦，察看物像记录结果封锁电源。v油镜处置：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚7:3混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。v显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。v(顺德校区实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离他最近的电源插座。v校本部实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能运用，只能用两侧的插座。 奥林巴斯奥林巴斯 CX21CX21型型 生物显微镜生物显微镜实验柜内，每人一台实验柜内，每人一台留意：只能横放，不得竖放。留意：只能横放，不得竖放。思索题v在微生物学实验中,怎样才干防止杂菌的污染?v空气的卫生规范规定如何?v他的实验结果阐明了什么问题?v怎样从医务人员手指上分别和鉴定金黄色葡萄球菌?v菌落特征主要描画哪几方面问题？任何挑选单菌落？ 医学微生物学实验综合性实验三、一v空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析v脓汁和粪便标本中病原菌的检测v菌落特征察看P11v细菌纯培育P10纯培育不得超越18小时v油镜运用方法讲解v脓汁标本检验 录像v肠道致病菌