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文档简介

1、实验三实验三 琼脂免疫电泳实验琼脂免疫电泳实验实验目的实验目的 了解免疫电泳的原理和用途。 掌握免疫电泳的操作过程和方法。 掌握免疫电泳实验结果的分析方法，并对粗提的蛋白进展检测。 免疫电泳为区带电泳与双向免疫分散的结合。先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内分别，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，参与抗血清。37下使两者分散，各区带蛋白在相应的位置与抗体反响构成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解见图。实验原理实验原理免疫电泳原理图解实验资料：牛血清粗提蛋白琼脂糖巴比妥缓冲液PH8.6，离子强度0.05兔抗牛血清1配制配制1.2的琼脂，加热使之融化。的琼脂，加热使之融化。 巴比妥缓冲

2、液配制巴比妥缓冲液配制2汲取汲取34 mL琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，留意琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，留意要马上用吸管尖把琼脂外表整平，假设有气泡立刻除去，并要马上用吸管尖把琼脂外表整平，假设有气泡立刻除去，并立刻于中间横放一根毛细管，待凝，制成立刻于中间横放一根毛细管，待凝，制成2mm的琼脂板。的琼脂板。3取打孔器在图示的位置打孔图，此二孔位置要对称。取打孔器在图示的位置打孔图，此二孔位置要对称。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。操作步骤操作步骤2mm2mm图2 胶板打孔及挖槽表示图4用微量加样器参与用微量加样器参与1020uL的粗提蛋白的粗

3、提蛋白和牛血清和牛血清 ，不要溢出可参与指示剂，不要溢出可参与指示剂 。5把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压10-12v/cm电泳电泳1-2h。6样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终止电泳，小心取出载玻片。止电泳，小心取出载玻片。7用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要深及底部，两道平行线间隔不可大于深及底部，两道平行线间隔不可大于3 mm。用大。用大头针挑去琼脂。头针挑去琼脂。8参与人全血清，放入湿盒中，参与人全血清，放入湿盒中，37 下分散下分散24h。本卷须知本卷须知1浇载玻片时，玻片应坚持程度，琼脂 面要尽量铺平。2加样应一次加满，并防止样品溢出孔 外。3电泳过程中留意防止发热，以免影响 电泳结果。4电泳时要使滤纸与凝胶亲密接触， 不可有缝隙。思索题思索题1画出沉淀线的形状、数量和位置，并予以简要阐明。2与相关的免疫学实验进展比较，讨论免疫电泳的主要优点。 PH8.6巴比妥缓冲液配制：巴比妥缓冲液配制： 巴比妥酸巴比妥酸 0.92g -100m

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