酱香型大曲中蛋白酶产生菌发酵条件及代谢产物研究毕业设计ppt课件

1、 酱香型大曲中蛋白酶产生菌发酵条件及代谢产物研讨 争辩人：孙李平 专业：生物科学课题研讨目的和意义课题研讨内容研讨方法和研讨思绪预期研讨结果课题研讨目的和意义: 对酱香型大曲中蛋白酶产生菌进展分别鉴定，并对其酶学性质进展研讨，包括最适作用温度、最适pH、最适pH稳定性、最适热稳定性，从而发现酱香型大曲中蛋白酶产生菌发酵条件及代谢产物。 有助于提示酱香的构成机制，提高优质酒率，对我国整个酱香食品工业的开展都会起到重要的促进作用类，同时亦能够提示出这些复杂酿造微生物间一些尚未知晓的协同作用和微生物代谢方式，并能够发现一些对食品工业消费有益的微生物课题研讨内容: 1、对酱香型大曲中蛋白酶产生菌进展分

2、别鉴定：利用稀释平板法和平皿生化反响，对大曲中产蛋白酶微生物进展分别，并对其进展纯化，然后察看其个体形状、群体形状、生长形状。 2、蛋白酶的分别纯化：以分别的蛋白酶产生菌为出发菌株，制备菌株蛋白酶粗酶液，测定其酶活力，采用 20% 70% 不同饱和度(NH4)2SO4对其进展分段沉淀及纯化。 3、蛋白酶的酶学性质研讨：分别研讨菌株蛋白酶的最适作用温度及热稳定性，最适pH及pH稳定性。研讨方法和研讨思绪 菌株的鉴定 蛋白酶的分别纯化 酶学性质研讨菌株的分别：目的菌株的分别及初筛预期研讨结果： 右图为培育菌株运用的是干扰素培育基，由于产蛋白酶菌株产生的蛋白酶能在培育基上发生平皿生化反响，故产生透明

3、圈，根据透明圈直径大小D和菌落直径大小d可以初步判别出，该菌株产蛋白酶活力的大小。由表1-1可以初步得出：2#菌株所产生的透明圈直径比最大，故2#菌株为产蛋白酶才干最大的一株。菌株透明圈直径（D）菌落直径（d）比值114.754.783.08216.855.123.29317.325.832.97菌落呈白色，褶皱，边缘不整齐该菌株为革兰氏阳性菌，个体形状为杆状 初步断定分别菌株为杆菌属菌落生长形状特征菌株的个体形状特征目的菌株的复筛： 取3个250mL锥形瓶，洗净，分别装入液体发酵培育基。然后用8层纱布封口，牛皮纸包扎，放入灭菌锅内，121灭菌20min。以5106个/mL的接种量接种1mL到

4、各个锥形瓶中，然后将锥形瓶放入37，恒温摇床培育48h。样品蛋白酶活力测定： 预热 反响 中止反响 离心加液显色 保温显色 空白对照 目的菌株的蛋白酶活力结果预测： 将分别纯化得到的3株蛋白酶产生菌菌株进展蛋白酶活力测定，结果见表菌株酶活力/(Ug) 1 48.2 2 62.1 3 42.4由表可知， 2#菌株的酶活力到达最高为什么采用盐析以及盐析方法: 盐析法的优点是在常温沉淀过程中不会呵斥酶的失活，沉淀物在室温下长时间放置也不容易失活。(NH4)2SO4是较为常用的盐析剂，溶解的温度系数小，低温度下其溶解度较高，浓度高时也不容易引起蛋白质生物活性的丧失。盐析结果预测:由图2-3可见，(NH

5、4)2S04沉淀蛋白酶的饱和度应为70% .酶学性质研讨: 不同的蛋白酶有不同的最适pH、不同的pH稳定性、不同的最适作用温度、不同的热稳定性。蛋白酶最适作用pH及pH稳定性:由上图可知，在pH 5至7的范围内，随着pH不断添加，酶活力不断变大；当pH为7.0时，酶活力最大，且为50.43Ug-1；随着pH继续添加，酶活力开场不断下降；可见酶最适作用pH为7.0。酶最适作用pH 测定:pH的稳定性:由上图可知，在有底物的情况下，pH为7.0时到达最高，值为39.17Ug-1；不论pH降低或是升高，酶活力都是减小，pH为5.0时，酶活力最小，值为16.65Ug-1，且为最高酶活的42.5%；故得出蛋白酶在pH7.0时最稳定。蛋白酶最适作用温度及热稳定性结果预测：酶最适作用温度的测定：由上图可知，30后酶活力不断添加，到50时到达最大值50.85Ug-1，50后酶活力又不断减小，故酶最适作用温度为50。酶的热稳定性由上图可知，无底物存在的情况时，酶保温1h，蛋白酶酶活力从30的34.18U