用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的探讨

1、用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的探讨黄显杨(南宁市红十字会医院广西南宁530012)【中图分类号】r512.6【文献标识码】a【文章编号】1672-5085 (2013 ) 08-0204-02【摘要】fi的 通过实验研究找到用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结 果复检确认的方法，最大程度地避免漏检或误检。方法将高浓度值血清标本作 一系列的倍比稀释，同时用酶促化学发光法、elisa法和金标法检验，研究发现 三种方法的相关性，从中找出规律性。结果 酶促化学发光法检测线性范围较宽, 但在0.15ng/ml附近易出现不确定检测结果，elisa法检测线性范围稍窄，在 0.30n

2、g/ml浓度值以下易产生不确定检测结果，金标法检测灵敏度最低，在 3.5ng/ml浓度值以下易产生不确定检测结果，更低的浓度则出现假阴性的结果。 结论根据酶促化学发光法定量检测值，可选择金标法、单孔elisa法或选择用 抗hbs阳性血清进行中和确认乙肝表面抗原。【关键词】酶促化学发光法elisa法金标法复检1前言化学发光免疫分析技术，将酶的化学发光与免疫反应结合起来，凭借其 灵皱度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等 优点，在免疫分析领域得以迅速地发展起來。但在乙肝表面抗原检测实践屮，我 们不时发现了假阳性检测结果、检测重复性也不易于把握等问题，于是提出了用 酶促化

3、学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的研究课题。在实验室 现有条件下，我们选择了 elisa法和金标法作为确认实验的观察方法。2材料与方法2.1试剂酶促化学发光法试剂由郑州安图绿科生物工程有限公司提供，elisa法 试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供，金标法试剂为北京万泰生物药业股 份有限公司提供。2.2仪器autobio e-lisa全自动样品处理系统，thermo multiskan mk3酶标仪, autobio lumo化学发光分析仪，rayto rt-3000型全自动洗板机。2.3标本准备找到上一日hbsag检测为高浓度值的血清标本若干份备用；为了避免基 质效应对实验系统

4、的影响，找出上一日hbsag、hbsab检测同时为0值的血清标 本若干份，制备成混合血清备用;用0值混合血清作为稀释液，对hbsag高 浓度值血清标本逐一进行倍比稀释，制备成一系列的待检血清标本。2.4实验方法取稀释后的系列标本同时用酶促化学发光法、elisa法和金标法检测 hbsag,观察相同标本不同方法检测结果间的相关性，从中发现规律性，从而找 到复检确认的方法。3结果实验结果见下表。三种方法检验结果对照稀释度方法123clia 法 ng/ml elisa 法 s/co 值 金标法 clia 法 ng/ml elisa 法 s/co 值金标法clia法ng/ml elisa法s/co值 金

5、标法原液 100.9 29.51+ 153.6 29.63+ 132.2 29.54+1:148.97 29.16+ 76.6629.27+ 65.9929.18+1:2 23.05 28.98+ 37.1029.08+ 31.9428.99+1:4 11.43 28.71+ 17.8826.39+ 15.4026.31+1:8 4.86 21.43+ 8.8320.44+ 7.6120.38+1:16 1.99 13.64± 4.1314.18+3.5614.14+1:32 0.79 6.35- 2.02 7.71± 1.74 7.68&p

6、lusmn;1:64 0.312.730.963.65 0.823.64-1:128 0.13 1.180.47 1.69 0.40 1.591:256 0.07 0.560.19 0.740.18 1.31 (备注:金标法“ + ”二阳性、“”二阴性、“±”二不确定)4讨论从实验数据中，我们看到clia法检测的线性范围得到了拓展，但在检 测值与稀释倍数之间维持着非典型的线性关系，随着稀释倍数提高，线性愈发不 典型，这与学者报道的相近。在厂商所标示的临界值(015ng/ml)附近更易 于岀现不确定的、假阴性的检测结果。提出对于低测值结果的确认尤其应引起足 够的重视3。实验

7、表明，金标法对低值的检测性能最差，只可检测到hbsag 3.5ng/ml 以上的浓度，更高的稀释度易产生不确定的、假阴性的检测结果。实验中，我们 发现在37°c水浴环境下用金标法复检，可使反应时间大大缩短，检测的灵敏度 也相应地有所提高。实验表明，elisa法检测的线性范围稍窄，在浓度值达到30ng/ml以上 时，检测的s/co值基本处于一个平台作微幅波动；在低值的检测性能方面，elisa 法的表现与clia法相近。用elisa法作为复检确认的方法，仅局限于酶促化学发 光法测值在二倍于临界值(0.30n"ml)以上的标本中，检测更低测值的标本易 产生不确定的检测结果。近年来报道的用抗hbs阳性血清中和确认hbsag的方法4,经过实践 观察，效果满意，可作推广。本文提出对于浓度值在0.10-0.30ng/ml间的标本尤 其应用中和方法进行确认。如条件允许，还可寻找更敏感的方法如pcr病毒载量 检测来作为确认实验。实验室只有认真执行复检确认制度，才能够最大程度地避 免漏检或误检，最大程度地避免由此引发的医疗纠纷。参考文献1蔡豪斌，伍惠玲，陈志坚等不同稀释液及稀释比例对高值hbsag稀释测定的 影响j应用预防医学,2010,16 (5)： 306-307. 赵秀英.血清hbsag定量检测及探讨一从检验者角度看hbsag定量j北京医学，2010,32 (3)