探析翼状胬肉发病和凋亡机制之间关系

1、探析翼状齊肉发病和凋亡机制之间关系摘要：目的：通过观察p53基因在翼状警肉组织中 的表达，探讨翼状蔚肉的发病与凋亡机制之间的关系。方法: 选择25例翼状鹫肉组织作为实验组，对照组选用正常眼鼻 侧结膜组织，制作石蜡切片后常规he染色和p53单克隆抗 体免疫组化染色，实验数据进行秩和检验。结果：实验组中 的p53蛋白含量显著高于对照组，两者差异有高度显著性 (p0. 05),具有可比性。选取警肉头颈部组织，包括表面结 膜样组织，对照组选自正常眼鼻侧结膜组织，距角膜缘约1 2mm,组织大小约34mm。取材后即置入10%的甲醛溶液浸 泡固定，常规脱水、石蜡包埋。1.2石蜡切片的制作。从10%甲醛溶液中

2、取出组织，流 水冲洗过夜，依次采用乙醇梯度脱水，70%乙醇15s, 80%、 90%、95%、100%乙醇各3h,二甲苯透明3次，每次lomin, 从低熔点石蜡到高熔点石蜡浸蜡，共3次，每次lh。包埋， 4um连续切片，每个石蜡块切45张。1.3 he染色。将组织切片依次放入二甲苯脱蜡和95%乙 醇各2次，每次lmin；蒸憎水冲洗2次，每次5min；苏木 精染色液浸染lomin；流水冲洗5min； 0.5%伊红乙醇浸染 2min； 95%乙醇和无水乙醇脱水各2次，每次加in；滴中性 树脂，加盖玻片，光镜下观察翼状蔚肉组织的病理学改变。1.4免疫组化染色。切片脱蜡至水化，椽酸微波抗原修 复15m

3、in, 3%h202室温孵育lomin,以消除内源性过氧化物 酶活性。pbs浸泡3x5min,加入即用型鼠抗人p53单克隆 抗体，4°c过夜，pbs冲洗3x5min,滴加生物素标记的二抗, 室温孵育30min, pbs冲洗3x5min,每张切片滴加约50 ul 抗生物素-过氧化酶溶液，室温30mino pbs冲洗3x3mino 滴加新鲜配制的dae溶液显色3lomino用自来水冲洗，苏 木素复染，中性树胶封固。以pbs替代一抗作为阴性对照。 阳性对照片由福州迈新公司提供。1.5结果判断标准。以细胞浆内出现棕色或棕黄色颗粒 为阳性染色，每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择 5个视

4、野，计算每个视野阳性细胞率，取平均值作为该标本 的阳性细胞率。根据阳性细胞数占上皮细胞的比例判断结 果：05%为阴性(-),5%25%为弱阳性( + ), 25%50%为 中等阳性(+), >50%为强阳性(+)。1.6统计学处理。采用spss11.0软件，将实验组与对 照组的实验数据进行秩和检验。2结果2. 1 he染色。2.1.1正常结膜的组织学表现。结膜分为上皮层和基质 层。上皮层由35层细胞组成，表层为扁平细胞，中层为 多边形细胞，基底层为立方形或柱形细胞。基质层为疏松结 缔组织，其间有散在的毛细血管，少量成纤维细胞、淋巴细 胞和中性粒细胞。2. 1.2翼状捋肉组织的病理学表现。捋肉组织上皮层均 可见不同程度的增生。上皮下组织可见成纤维细胞增生活 跃、新生血管增多，在血管周围有大量炎性细胞浸润，有淋 巴细胞、浆细胞和少量的中性粒细胞。2.2免疫组化染色。在翼状捋肉中，p53蛋白染色阳性 细胞主要位于上皮细胞基底层。p53基因蛋白产物阳