《PCR技术简史》ppt课件

1、PCR技术简史 1985年，美国年，美国PE-Cetus公司公司的的Mullis等人发明等人发明PCR 根本原理是在试管中模拟细根本原理是在试管中模拟细胞内的胞内的DNA复制复制 1993年，年，Mullis等因此项技等因此项技术获诺贝尔化学奖术获诺贝尔化学奖引物引物引物引物7272延伸延伸PCR的反响体系的反响体系4种dNTP混合物各200umol/L引物 各10100pmol模板DNA 0.12ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 201234522557294时间min温度PCR的根本原理适温延伸

2、3高温变性1低温退火2反复13步2530轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性构成2条单链子链延伸DNA加倍PCR的根本原理PCR反响条件PCR过程PCR的特点1234522557294时间min温度适温延伸3高温变性1低温退火2反复13步2530轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性子链延伸DNA加倍DNA变性构成2条单链模板DNA95PCR的根本原理PCR反响条件PCR过程PCR的特点9550引物1引物2DNA引物PCR的根本原理PCR反响条件PCR过程PCR的特点50引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的根本原

3、理PCR反响条件PCR过程PCR的特点72第1轮终了95第2轮开场PCR的根本原理PCR反响条件PCR过程PCR的特点955072TaqTaqTaqTaqPCR的根本原理PCR反响条件PCR过程PCR的特点72第2轮终了PCR的根本原理PCR反响条件PCR过程PCR的特点模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增PCR的特点的特点灵敏度高灵敏度高简便、快速简便、快速对标本的纯度要求低，血液、体腔液、洗嗽液、对标本的纯度要求低，血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗提毛发、细胞、活组织等组织的粗提DNA。PCR的类型和运用55A正常人A病 人正常人 (-)

4、病 人 (+)病原微生物基因A 现 嫌1 嫌2 嫌38SNP技术技术SNP (Single Nucleotide Polymorphism)，单核，单核苷酸多态性，是指苷酸多态性，是指DNA序列中单个核苷酸序列中单个核苷酸 突变突变引起的多态性。引起的多态性。9RAPD技术技术RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA称为随机扩增多态性称为随机扩增多态性DNA，RAPD是经过利用随机合成的是经过利用随机合成的10碱基寡聚核苷酸碱基寡聚核苷酸作为引物作为引物,对基因组进展对基因组进展PCR扩增，这些扩扩增，这些扩增产物增产物DNA片段的多态性片段的多态性,反映了基因组相反映了基因组相应区域的应区域的DNA多态性。多态性。 10RACE 技术技术 RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends