l阿司匹林总体实验设计

1、阿司匹林的合成、制剂的制备、药理作用及鉴别、含量测定第一部分阿司匹林的合成【目的】1.熟悉酚羟基酰化反应的原理，掌握阿司匹林的制备方法。2. 掌握抽滤装置的安装和操作，并学会利用重结晶纯化固体有机物。【原理】/COOH<COOH| I+ (CH3CO) 2O I I+ CH3COOH乙1 111酸浓O酐硫乙酰水杨酸酸80-85 C水杨酸OH<'OCCH3【仪器和药品】仪器：电磁搅拌器，温度计，搅拌子，三口烧瓶，单口圆底烧瓶，锥形瓶， 球形冷凝管，直形冷凝管，酒精灯，石棉网，橡皮管，电子天平，胶头滴管，铁 架台，量筒，玻璃棒，移液管，烧杯，布氏漏斗，真空泵，滤纸，吸虑瓶，烘箱

2、, 熔点仪，T形连接管等。药品：水杨酸，乙酸酐，98%&硫酸，饱和碳酸氢钠溶液，浓盐酸，乙醚， 石油醚，蒸馏水，冰块，1%FeCI3等。【内容】1. 新蒸乙酸酐：量取乙酸酐60mL放入100mL的圆底烧瓶中进行普通蒸馏， 收取137 140C的馏分备用。2. 加料：在 250mL三口瓶中加入 34.4g（0.249mol）水杨酸、48mL（ 0.508mol） 新蒸乙酸酐和56滴浓硫酸（约2.8ml ）。3. 酰化反应：振摇三口瓶使水杨酸全部溶解（如不溶解则需补加乙酸酐和浓硫酸）。安装回流装置，在磁力搅拌器中加热控制温度在8085C,同时保持低速匀速搅拌，反应20min后用1%FeCI

3、3检查，当反应液不再呈现紫色时停止反 应。反应液稍冷却（50C以下）后均分成几份倒入各烧杯中，先用 100ml冰水水 解过量的乙酸酐，冷却至室温后，即有乙酰水杨酸结晶析出（若不结晶，可用玻璃棒摩擦瓶壁）。然后再加入400mL冰水，将混合物继续在冰水浴中冷却使结晶 完全。抽滤，结晶用少量冷蒸馏水洗涤 3次，抽干后将粗产物转移至表面皿上， 自然晾干得粗产品，称量。4. 重结晶：将粗产品转移至500mL烧杯中，搅拌下加入400mL饱和碳酸氢钠 溶液，直至无二氧化碳气泡产生，抽滤，用少量水冲洗漏斗，合并滤液（弃去滤 渣）并倒入预先盛有将80mL浓盐酸和160mL水配成的溶液的烧杯中，搅拌均匀， 使溶液

4、PH呈弱酸性，即有乙酰水杨酸沉淀析出。将烧杯置于冰水浴中冷却，使结晶完全。抽滤，用冷蒸馏水洗涤 23次，抽干后，将结晶移至表面皿上，自 然风干，称重。5. 粗品精制：将阿司匹林粗品转入250ml三口瓶中按1g粗品加入5ml乙醚, 在25 C磁力搅拌器中溶解，抽滤去除不溶杂质。然后在滤液中加入等量的石油醚并过量10ml。（利用乙醚、石油醚能互溶，乙醚不仅溶解石油醚而且能溶解 水杨酸和阿司匹林但石油醚只溶解乙醚和水杨酸不溶解阿司匹林的原理将阿司 匹林晶体析出）。乙酰水杨酸晶体开始析出后立即将锥形瓶放入冰水浴中，直至阿司匹林晶体全部析出。抽滤得到的滤渣放入烘箱中于60C下干燥2小时得阿司匹林原料药纯

5、产品，白色针状结晶，并称重计算收率。【注意事项】反应物冷却后，固体产物立即析出，黏在瓶壁不易处理，故需 趁热在搅动下倒入冷水中过量的醋酐及未作用的对氨基酚。【思考题】（1）加入亚硫酸氢钠的目的？（2）对氨基酚的特殊杂质是何物，是如何产生的？有水杨酸与氨基酚自身 缩合物。水杨酸是一个官能团化合物（酚酰基与羧基），会发生两种酯化反应，其中一种就是自身缩合反应，形成聚合物，另外一种是酰化反应不完全而存在的 水杨酸。（3）为什么在加料的过程中要加入浓硫酸？是为了催化反应。水杨酸分子内存在氢键，阻碍酚羟基的酰化反应加入反应至 150至160 °C才能进行，加入少 量硫酸后，破坏氢键的作用，反应

6、温度降低至80 C左右。从而减少副产物水杨酸。且温度过高，乙酰水杨酸易分解。（4）酰化反应中仪器为什么要干燥？不干燥有何影响？没有干燥时，会导 致醋酐水解成醋酸，从而影响得率。第二部分：药物制剂小剂量阿司匹林可以防止脑血栓形成。 但是阿司匹林口服能刺激胃粘膜，引 起上腹不适，恶心，呕吐等不良反应的发生。制成肠溶衣片，可减少对胃刺激性， 降低不良反应。（1）.阿司匹林肠溶片芯的制备1.【处方】名称（500片）投料量（g）处方分析阿司匹林12.5主药淀粉18.0稀释剂、崩解剂微晶纤维素15.0粘合剂、黏合剂羧甲基纤维素钠2.5黏合剂酒石酸（枸橼酸）0.4稳定齐U2%HPMC 醇水溶液4% 滑石粉Q

7、SQS溶剂、黏合剂润滑剂2. 制法 将阿司匹林（80目）与淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠用 40目不 锈钢筛混合均匀。加入预先配好的2%HPM醇水溶液（内含酒石酸或枸橼酸）制 成软材，通过18目不锈钢筛或尼龙筛制粒，湿颗粒于 5060C烘箱干燥12小 时，干颗粒过18目筛整粒，加入滑石粉充分混匀后压片（用 5.5mm浅凹冲模压 片）。（2）.包衣片的制备.【处方】名称投料量处方分析丙烯酸树脂II号10g主药领苯二甲酸二乙酯2g增塑剂蓖麻油4g增塑剂吐温-802g表面活性剂、水溶性致孔剂滑石粉（120 目）3g抗黏剂钛白粉（120 目）QS增光剂柠檬黄QS色素85%乙醇加至100ml2. 制法

8、 将包衣材料用85%醇溶液浸泡过夜溶解。加入领苯二甲酸二乙酯、蓖麻油和吐温-80研磨均匀，另将其它成分加入上述包衣液研磨均匀，即得。（3）单冲压片机的安装与调试TDP单冲压片机基本结构见图-1，安装与调试过程如下：先装好下冲头，旋紧 下冲固定螺丝，旋动片重调节器，使下冲在较低的部位。再将模圈装进模板，旋 紧模圈固定螺丝，然后将模板固定在机座上（整个装拆过程切勿碰撞而损坏冲 头）。调节出片调节器，使下冲头上升到恰与模圈相齐平，再装上冲并旋紧上 冲固定螺丝，转动压力调节器，使上冲处在压力较低的部位，缓慢地用手摇转压 片机的转轮使上冲逐渐下降，观察其是否正好在冲模的中心位置。 如不在中心位 置，应缓

9、慢上升上冲头（不得将上冲头强制地冲入模孔， 更不应使上下冲相撞）， 稍微松动一点模板固定螺丝，装好饲料靴和加料斗，并加入颗粒。用手转动转 轮，如感到不易转动时，不得用力硬转，应调节压力调节器使之适当增加或减小调节器，使压出的片剂 时间，达到要求后方可一片测帑4重调节器，使压出的片重符合要求，同时调节压力的硬度。开动电动机进行试压，检查片重和崩解'动压片。（4）包衣操作将（ 1）制得的乙酰水杨酸片芯置包衣锅内，片床温度控制在4050C，转速为3040转/分，将配制好的包衣溶液用喷枪连续喷雾于转动的片子表面，随时根据片子表面干湿情况，调控片子温度和喷雾速度，控制包衣溶液的喷雾速度和 溶媒挥

10、发速度相平衡，即以片面不太干也不太潮湿为度。一旦发现片子较湿（滚 动迟缓），即停止喷雾以防粘连，待片子干燥后再继续喷雾，使包衣片增重为4 5%将包好的肠溶衣片，置3040C烘箱干燥34小时。（5）操作要点和注意事项1 小剂量乙酰水杨酸应先粉碎过80目不锈钢筛，然后与辅料混合时，常采用逐 级稀释法（等容量递增法），并反复过筛、混合以确保混合均匀。2粘合剂用量要恰当，使软材达到以手握之可成团块、手指轻压时又能散裂而 不成粉状为度。再将软材挤压过筛，制成所需大小的颗粒，颗粒应以无长条、块 状和过多的细粉为宜。3. 乙酰水杨酸在湿、热下不稳定，尤其遇铁质易变色并水解成水杨酸和醋酸， 前者对胃有刺激性。

11、用含有少量酒石酸或枸橼酸（约为乙酰水杨酸量的1%淀粉浆混匀后制粒，也可采用乙醇或25%HPM的醇水溶液作为粘合剂，以增加主 药的稳定性。硬脂酸镁和硬脂酸钙能促进乙酰水杨酸的水解，故用滑石粉作润滑 剂；此片剂干燥温度宜控制在 50 E60C,以防高温药物不稳定。4在包衣前，可先将乙酰水杨酸片芯在 50C干燥30分钟，吹去片剂表面的细 粉。由于片剂较少，在包衣锅内纵向粘贴若干 12cm宽的长硬纸条或胶布，以 增加片子与包衣锅的摩檫，改善滚动性。5必须选用不锈钢包衣锅，因乙酰水杨酸等药物遇金属不稳定，可先在包衣锅 内喷雾覆盖一层包衣膜。6 喷雾较快时片子表面若开始潮湿后，在包衣锅内的滚动将减慢，翻滚

12、困难， 应立即停止喷雾并开始吹热风干燥。7 包衣温度应控制在50C左右，以避免温度过高易使药物分解或使片剂表面产 生气泡，衣膜与片芯分离。第三部分：阿司匹林解热镇痛药理实验阿司匹林的解热作用实验【实验目的】1. 掌握药理实验设计的方法及基本原理、知识；2. 研究常用阿司匹林解热镇痛药对发热家兔的影响【相关知识】发热体温调节中枢右两部分组成，一个是正调节中枢，主要包括POAH等另一个是负调节中枢，主要包括VSA,MAN等。当外周致热信号通过这些途径传入 中枢后，启动体温正负调节机制，一方面通过正调节介质使体温上升， 另一方面 通过负调节介质限制体温升高。发热过程可分为三个时相：1. 体温上升期在

13、发热的开始阶段，由于正调节占优势，故调定点上移，此时，原来的正常体温变成了“冷刺激”，中枢对“冷”信息起反应，发出指令经 交感神经到达散热中枢，引起皮肤血管收缩和血流减少，导致皮肤温度降低，散 热随之减少，同时指令到达产热器官，引起寒战和物质代谢加强，产热随而增加， 体温升高。2. 高温持续期当体温升高到调定点的新水平时，便不再上升，而是在这个与新调定点相适应的高水平上波动，此期寒战停止并开始出现散热反应，产热和 散热基本平衡。3. 体温下降期经历高温持续期后，由于激活物，EP及发热介质的消除，体温调节中枢的调定点返回到正常水平。这时由于血温高于调定点， POAH勺温敏 神经元发放频率增加，通

14、过调节作用使交感神经的紧张性活动降低， 皮肤血管进 一步扩张，散热增强，产热减少，体温开始下降，逐渐恢复到正常调定点相适应的水平。前列腺素E :给动物注射能引起明显的发热反应，同时伴有代谢率的改变，其 致热敏感点在POAH阿司匹林为一种具有显著解热镇痛作的药， 能使发热体体温迅速降低到正常，而 对体温正常体一般无影响。其解热作用机理主要通过抑制环氧酶（ COX-2从而 抑制前列腺素（PGE的合成，阿司匹林为PGE的合成抑制剂。家兔体温测定一般采取肛门测温法，兔正常体温为 38.5 C39.5 C,而且幼兔 体温高于成年兔，成年兔高于老兔。如果体温升高到 41C，则是患急性、烈性 传染病的表现。

15、【药品与器材】注射用PGE注射用精氨酸阿司匹林，1 %普鲁卡因溶液，0.9 %生理盐水， 0.4%肝素。兔手术台，电子称，手术器械，连有三通的动脉插管，输液架，输液 装置一套，10 ml、5m1注射器各2支，压力换能器，心电记录电极 MEDLA生物 信号处理系统，肛温计或体温计算。【实验步骤】1. 将体温计插入家兔肛门，深度为 3.55厘米（保持35分钟）。2. 然后用PGE（ 6卩g/kg ）从耳缘静脉注射入家兔体内，30分钟后记录体3. 待体温上升到持续高温阶段，耳缘静脉注射入阿司匹林（20mg/kg）,30分钟后，测量体温。4. 比较正常，发热中和解热后三组数据的关系。表1解热镇痛药对家

16、兔的影响结果温体温正常PGE阿司匹林【注意事项】1. 本实验也可用小鼠进行，但小鼠个体较小，不方便体温的测定。2. PGE和阿司匹林静脉注射是要慢。3. PGE和阿司匹林半衰期为半个小时，但各个家兔机体反正应各异，应注意观察 其变化。乙酰水杨酸的镇痛作用【目的】了解热板法的实验原理，观察阿斯匹林的镇痛作用【原理】 小鼠的足底无毛，皮肤裸露，在温度 55± 0.5 C的金属板上产生疼痛 反应，表现为舔后足，踢后腿等现象。阿斯匹林可提高痛阈，推迟小鼠疼痛出现 时间。【器材】 恒温水浴箱、热板槽、大烧杯（250-500ml） 2个、天平、鼠笼，注射器（1ml）、秒表1个。【药物】0.4%阿

17、司匹林悬液、生理盐水、30mg/ml苦味酸溶液【动物】雌性小鼠。【方法】1、 将恒温水浴箱内加水至没过烧杯底部1cm调节水温至55± 0.5 C。2、 筛选并测定正常痛阈 将小鼠放入烧杯内立即用秒表记录时间，密切观察小鼠 反应，以舔后足为痛觉指标。记录痛阈时间值（从小鼠放入热板烧杯内到出现舔 后足）。每只小鼠测痛阈2次（间隔3min）,取其平均值为正常痛阈（药前痛 阈s ）。凡在30s内不舔后足或痛阈小于10s者弃去。3、分组给药，并记录给药时间。甲组用 0.4%阿司匹林悬液灌胃0.15ml/10g ;乙 组用同等剂量的生理盐水。4、测痛阈变化值 给药后15、30、60min各测痛阈

18、1次，对60s内不舔足的小 鼠应立即取出来，痛阈按60s计算。【结果】1、综合全实验室数据，计算出各组痛阈的平均值（X）填入下表组别 动物数痛阈值（s）药前药后15min药后30min药后60min乙酰水杨酸生理盐水2、计算各组动物用药后15、30、60min时的痛阈提高百分率（P）P=药后痛阈值均数-药前痛阈值均数x 100%药前痛阈值均数3、以时间（min）为横坐标，痛阈提高百分率为纵坐标，绘制各组的时-效曲线【注意事项】1、本实验应选用雌性小鼠，雄性小鼠遇热时阴囊松弛下垂，与热板接触影响实 验结果。2、室温应控制在13± 18C，此温度小鼠对痛反应较稳定。3、正常痛阈30s、w

19、 10s以及喜跳跃的小鼠均应弃用。4、 测痛阈时若60s仍无反应，应立即取出小鼠，以免烫伤足趾，且痛阈按60s 计。4、药物分析部分 根据对阿司匹林合成过程，制剂工艺和药物的性质，制定 该药物原料药和制剂的质量标准（包括鉴别，含量测定和杂质检查等）阿司匹林对小鼠抗炎作用研究【实验对象】动物：雄性小鼠，体重20g左右，40只【实验药品与器材】受试药品：阿司匹林（配成50mg/ml）试剂：二甲苯 苦味酸 生理盐水。仪器：电子天平 直径9mm打孔器 剪刀 注射器 针头5号【方法与步骤】1. 雄性小鼠40只，随机按下表分组，A:生理盐水对照组，给药方式灌胃0.1ml/10gB:阿司匹林组给药方式灌胃0

20、.1ml/10g1.给药2小时后，取二甲苯0.02ml/只，右耳面前后均匀涂抹二甲苯，0.5h后处 死小鼠，剪下双耳，用直径9mm打孔器打下双耳同一部位耳片，分别于电子 天平（感量0. 1mg）称重，求出各组动物耳廓的肿胀度（肿胀度=右耳片重量一 左耳片重量。2. 【实验结果及分析】将实验结果填入下表后，处理并分析牛磺酸颗粒对小鼠耳肿胀的影响，见下表:组别N耳肿胀度（均值土标准差）标准误生理盐水80.0164375 ± 0.01007750.003562951阿司匹林组80.0076125 ± 0.00733960.002594943*注：与空白对照组比较，*P<0.

21、05P=0.089方差齐，经LSD析组与有显著性差异【结果分析】：阿司匹林组有抗炎作用，误差原因：1）涂二甲苯时不同的操作 者涂的量不同，耳朵的肿胀程度不同2）打孔器打耳朵是不同人操作、同一人打 左右两耳位置不同也存在误差 3）小数的个体差异对药物的吸收不同也会出现误第四部分：阿司匹林原料药的质量检查本品为2-（乙酰氧基）苯甲酸。按干燥品计算，含C9H8O4不得少于99.5%105.0%【性状】 本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭或微带醋酸臭，味微酸；遇湿气 即缓缓水解。本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或无水乙醚中 微溶；在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分解。【鉴别】（1）

22、取本品约0.1g加水10ml,煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。（2）取本品约0.5g加碳酸钠试液10ml,煮沸2分钟后，放冷，加过量的稀硫酸， 即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。（不懂）【检查】1、溶液的澄清度取本品0.50g,加温热至 约45° C的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。（不规范）2、游离水杨酸取本品约0.1g精密称定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（临用新制）；取水杨酸对照品约10mg精密称定，置100ml量瓶中，加冰醋酸甲醇溶液适量使 溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml,置50ml量瓶中

23、，用1淋醋酸甲醇溶液 稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录V D）试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20 : 5 : 5： 70）为流动相；检测波长为303nm理论板数按水杨酸峰计算不低于 5000，阿司 匹林峰与水杨酸峰的分离度应符合要求。立即精密量取供试品溶液、对照品溶液 各10卩l ,分别注人液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与水杨 酸峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0. 1%。3、 易炭化物取本品0 . 5g,依法检査（附录毗O,与对照液（取比色用氯化 钻液0. 25ml、比色用重铬酸钾液0. 25m

24、l,比色用硫酸铜液0.40ml ，加水使 成5ml）比较，不得更深。4、 有关物质取本品约0 .1g,置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量， 振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml置200ml量瓶 中，用1淋醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；精密量取对照溶液1ml,置10ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度试 验溶液。照高效液相色谱法（附录 V D）试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸水（20 : 5 : 5 : 70）为流动相A,乙腈为流动相 B,按下表进行梯度洗脱；检测波长为276nm阿司匹林峰的保留

25、时间约为8分钟， 理论板数按阿司匹林峰计算不低于 5000,阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应符 合要求。分别精密量取供试品溶液、对照溶液、灵敏度试验溶液及水杨酸检査项 下的水杨酸对照品溶液各 10卩l,注人液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色峰面积（0.5%）。供试品溶液色谱图中任何小于灵敏度试验溶液主峰面积的峰可忽略不计。5、干燥失重取本品，置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，在60° C减压干燥至恒重，减失重量不得过 0.5%（附录毗L）。&炽灼残渣不得过0.1%（附录毗N）。7、重金属取本品I.Og,力卩乙醇23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3. 5 ）2ml.依法检査（附

26、录毗H第一法），含重金属不得过百万分之十。【含量测定】取本品约0. 4g,精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0 . 1moI/L ）滴定。每1ml氢氧化钠滴定液（0. 1mol/L） 相当于18. 02mg 的C9 H 8 04阿司匹林肠溶片的质量检查本品含阿司匹林（GHQ）应为标示量的93.0% 107. 0%。【性状】本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。【鉴别】（1）取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.lg）,加水10ml,煮沸，放冷，力卩三 氯化铁试液1滴，即显紫堇色。（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时

27、间应与对照品溶 液主峰的保留时间一致。【检查】游离水杨酸取本品细粉适量（约相当于阿司匹林 0 .1g）,精密称定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液振摇使阿司匹林溶解，并稀释至 刻度，摇匀，滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液（临用新制）；取水杨酸对照品约15mg精密称定，置50ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀释至刻 度，摇匀，精密量取5ml,置100ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度， 摇匀，作为对照品溶液。照阿司匹林游离水杨酸项下的方法测定，按外标法以峰面积计算，不得过标示量的1.5%。释放度酸中释放量取本品，照释放度测定法（附录 XD第二法方法1 ），采用溶出度测

28、定法第一法装置，以 0.1mol/L的盐酸溶液600ml （25mg、40mg 50mg规格）或750ml（100mg 300mg规格）为溶出介质，转速为每分钟 100转, 依法操作，经2小时时，取溶液10ml,滤过，取续滤液作为供试品溶液；取阿司 匹林对照品，精密称定，加冰醋酸甲醇溶液溶解并稀释制成每1ml中含4.25卩 g（25mg规格）、7卩 g （40mg 规格）、8. 25 卩 g（50mg 规格）、13 卩 g （100mg 规 格）、40卩g （300m g规格）的溶液，作为对照品溶液。照含量测定项下的方法 测定。计算每片中阿司匹林的释放量，限度应小于阿司匹林标示量的10%。缓冲液中释放量在酸中释