核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究

1、核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究彭靖常德市中心血站湖南常德415000摘要：目的探究采用核酸扩增技术进行血液筛查的应用价值。方法选取2013年6月一2014年4月在我献血站进行无偿献血者的血液标木32202例，.且 按筛选方法分为实验组和对照组。实验组采用双试剂酶联免疫吸附试验（elisa） 对血液进行筛查，对照组采用核酸扩增技术（nat）对血液进行筛查。将两组标 木的筛查结果进行统计学比较。结果 实验组32202例中检出hbvdna阳性286 例，其阳性检出率为1.77%,对照组32202例中检出hbvdna阳性346例，其阳 性检出率为2.15%o结论nat对hbvdna的阳性检出率明显

2、高于elisa,不仅避 免了血液筛查中漏检情况的出现，很大程度上降低了输血传播疾病的风险，而且 保证了临床上的输血安全，值得在临床上推广应用。关键词：核酸扩增技术；血液筛查；窗口期；输血安全随着社会经济的快速发展，因输血引起的相关传染病的预防和控制已经引起 了全社会的高度关注，而预防和控制输血相关传染病的源头就是要对献血者的血 液标木进行严格的筛查。双试剂酶联免疫吸附试验，临床上简称elisa,是在免 疫酶技术基础上发展而来的一种免疫测定技术，其过程包括抗原（抗休）吸附在 固相载体上为包被，加待测抗体（抗原），再加相应酶标记抗体（抗原），牛成抗 原（抗体）待测抗体（抗原）酶标记抗体（抗原）的复

3、合物，再与该酶的底 物反应牛成有色产物，最终借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待 测抗体（抗原）的定量与有色产物的牛成量成正比。核酸扩增技术，临床上简称nat,包括聚合酶链反应技术、荧光定量pcr技 术和其他核酸扩增技术（核酸序列依赖性扩增、连接酶链反应和分枝dna信号 放大系统），其中最主要且最常用的是聚合酶链反应技术，其基木原理类似于dna 的体内复制，首先将待扩增的dna模板加热至变性解链，随之将反应混合物冷 却至一定的温度，且这一温度可将引物与它的靶序列发生退火，之后再将温度升 高使退火引物在dna聚合酶的作用下延伸，这个过程就是pcr的一个循环，也 就是说这种循环在适合的条

4、件下是不断重复的2。1资料与方法1.1研究对象：选取2013年6月一2014年4月在我献血站进行无偿献血者的血液标本32202 例，其中男性19568例，女性12634例，献血者的年龄在1947岁，平均年龄 为27.7岁；献血者的体重在5578kg,平均体重为62.3kg。两组献血者在性别、 年龄和体重等方面均无统计学差异（p&gt；0.05）,有可比性。1.2研究方法：实验组采用双试剂酶联免疫吸附试验（elisa）对血液进行筛查，对照组采 用核酸扩增技术（nat）对血液进行筛查。将两组标本的筛查结果进行统计学比 较。1.3 试齐实验组：乙型肝炎病毒表面抗原elisa诊断试剂盒，丙型肝

5、炎病毒抗体elisa 诊断试剂盒，人类免疫缺陷病毒抗体elisa诊断试剂盒，梅毒螺旋体抗体elisa 诊断试剂盒，乙肝肝炎“两对半”检测试剂盒。对照组：hbv/hcv/hiv荧光pcr核酸检测试剂盒。两组所用的试剂均在有效限期内。1.4仪器：实验组：xantus全自动加样仪，fame24/20全自动酶免分析仪，uranus ae 200 全自动酶免分析仪。对照组：hamilton star全自动核酸提取仪、罗氏cobas?s 201核酸血液筛查 系统。1.4检测方法：实验组：采用相应的试剂对该组血液标本进行抗-hiv.抗hcv、hbsag和梅 毒螺旋体抗体的elisa监测。对照组：将该组血液标

6、本以6例为一组汇集并采用相应的试剂进行hbv dna、 hcv rna和hivjrna的核酸扩增检测，自动判读结果。当汇集池中某一项的检测结果为阴性时，说明该汇集池中6份标本的该项nat 检测均为阴性；当汇集池中标本的某一项检测结果为阳性吋，则须将相对应的6 份标本拆分并进行该项单标本检测，若检测结果为阴性就说明此标本该项的nat 检测结果为阴性，若检测结果为阳性就说明此标本该项的nat检测结果为阳性。1.5统计学方法:应用spss17.0统计分析软件对资料进行统计分析，计数资料以率表示，计 量资料以均数±标准差表示。均数间比较应用t检验，两个变量间的关系 比较作相关数据

7、分析，p<0.05,差异显著，具有统计学意义。2结果2.1两组血液标本的hbv dna的阳性检出率对比结果：实验组32202例中检出hbv dna阳性286例，其阳性检出率为0.89%,对照 组32202例中检出hbv dna阳性346例,其阳性检出率为1.07%。见表1。表1：两组血液标本的hbv dna阳性检出率的对比组别 例数hbvdna阳性检出例数hbvdna阳性检出率实验组 32202 2860.89%对照组 32202 3461.07%p 值p<0.05注：通过对两组血液标本的hbvdna阳性检出率的比较，p<0.05,表示差 异显著，具有

8、统计学意义，说明实验组的hbv dna阳性检出率明显高于对照组。3讨论窗口期是指从人体感染hiv后到外周血液中能够检测出hiv抗体的这段吋间, 一般为2周3个月，少数人可到4个月或5个月，很少有人能超过6个月，0 前国际上公认的窗口期为6个月。目前我国采供血机构对献血者血液标本的筛查 的主要模式仍然是elisa。elisa检测法虽然在-定程度上可以降低输血传播疾 病的风险，但由于其的“窗口期”比较长、病毒变异以及免疫静默感染等因素, 漏检和输血安全问题避免不了。nat是美国新研发的一种血液筛查的检测方法, 这种新型的检测方法不仅可以直接检测岀病毒核酸，明显缩短了现有的elisa检 测方法的“窗

9、口期”，而且能检测出病毒变异和免疫静默感染，大大降低血液的 漏检率的同时也减少了因输血而感染传染病的风险，已经成为发达国家进行血液 筛查的必要手段，也是我国采供血机构追求的目标。本次研究表明，核酸扩增技术(nat)对hbvdna的阳性检出率明显高于双 试剂酶联免疫吸附试验(elisa),不仅避免了血液筛查中漏检情况的出现，很大 程度上降低了输血传播疾病的风险，而口保证了临床上的输血安全，值得在临床 上推广应用。参考文献：1李丽，王明元，周群刚，等不同方法制备的血小板在保存期内活化状态 的研究j临床输血与检验.2010, 12 (1)： 1-3.何亚琴，张建伟，杨爱龙，等核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应 用卩中国输血杂志.2011, 24 (7)： 560-562.3黄成垠，蒋昵珍，朱绍汶，等1种血液核酸筛查系统的应用评价j.中国 输血杂志.2012, 25 (10)： 1010-1011 邓雪莲，安万新，梁晓华，等大连市血液中心血清学监测与核酸检测并 行的效果观察j中国输血杂志.2012, 25 (1)： 38-40.5叶贤林，孙淑君，容莹，等国产全自动血液病毒核酸筛查系统的建立和 应用研究j中国感染控制杂志.2010,