注射用替加环素被动皮肤过敏性实验探究

1、注射用替加环素被动皮肤过敏性实验探究摘要目的：采用大鼠被动皮肤过敏试验(pca)评价注 射用替加环素的过敏性。方法：取8只雄性大鼠按体重分为 4组制备抗血清；另取大鼠24只，雌雄各半，按以上分组进 行致敏和激发试验。结果：被动皮肤过敏性试验顺利完成， 未产生过敏反应。结论：大鼠被动皮肤过敏性试验显示注射 替加环素未发生过敏反应。关键词替加环素抗生素被动皮肤过敏中图分类号：r965. 3；r978. 19文献标识码：b文章编号：1006-1533 (2013) 01-0057-03study on the passive cutaneous anaphylaxis test of tigecyc

2、line injectionhuang weil*, tang can2, you fengminl(1. chengdu university of traditional chinese medicine, chengdu 610074, china； 2. xihua university, chengdu 610039, china)abstract objective： passive cutaneous anaphylaxis test ( pca ) of rats was used to evaluate the allergenicity of tigecycline inj

3、ectiori. methods : eight male rats were divided into 4 groups to prepare the anti-serum and after that, another 24 rats， 12male and 12 female were sensitized and attacked according to above group-dividing ways. resuits： pcatest is successfully completedconelusion :tigecycline injection has no allerg

4、ic reaction.key words tigecycline injection； antibiotics； passive cutaneous anaphylaxis test替加环素是全球首个被批准的用于静脉注射的甘氨酰环素类抗生素1, 2,其结构与四环素类药物相似。替加环素抗菌谱广，对有耐药性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌也有 活性，2005年6月美国fda批准该药应用于成人复杂皮肤及 软组织感染和成人复杂的腹内感染，包括阑尾炎、烧伤感染、 腹内脓肿、深部软组织感染及溃疡感染。为了分析注射用替加环素的过敏性，我们采用了大鼠皮 肤被动过敏试验（pca）进行评价。1仪器与材料 1.1仪器b

5、s600l电子天平（上海友声衡器有限公司）；fa1004电 子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；722s可见分光光度 计（上海梭光技术有限公司）；tdl-80-2b台式离心机（上海 安亭科学仪器厂）。1.2试药0. 9%氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司，批号: m11120411,规格：500 ml）；卵白蛋白（美国sigma公司， 批号：a-5252,规格：10 g）；注射用替加环素（四川中兴 药物有限公司，批号：20111201,规格：50 mg）o伊文思蓝（uni-chem,批号：gd4061465）；丙酮（成都市科龙化工试 剂厂，批号：20080303,规格：500 ml）；弗氏

6、完全佐剂（sigma, 批号：f5881,规格:10 ml）；弗氏不完全佐剂（sigma,批 号:f5506,规格:10 ml）o1.3动物大鼠32只，体重180220 g,雌性12只，雄性20只， 均购于四川省实验动物专委会养殖场，生产许可证号：scxk（川）2008-14o2方法2. 1溶液的制备1）抗血清药物溶液的制备3-5：用0.9%氯化钠注射液 配制成浓度10 mg/ml的卵白蛋白阳性对照组溶液和1.5 mg/ml、0. 5 mg/ml的替加环素高、低剂量组溶液。2）致敏溶液的制备：分别取4组抗血清，用0.9%氯化 钠注射液稀释成1 ： 2、1 ： 4、1 ： 8的溶液。3）激发溶液

7、的制备：用0.5%伊文思蓝-0.9%氯化钠注射 液配制成浓度1 mg/ml的卵白蛋白阳性对照组溶液和1.5 mg/ml、0. 5 mg/ml的替加环素高、低剂量组溶液。2. 2分组和给药方法1）抗血清制备分组：8只雄性大鼠分别按体重分为阴性 对照组（氯化钠注射液）、阳性对照组（卵白蛋白）和替加 环素高、低剂量组，每组2只。2）致敏和激发试验分组：取大鼠24只，雌雄各半，按 体重分为阴性对照组、阳性对照组和替加环素高、低剂量组, 每组6只。3）抗血清制备方法：阴性对照组（0.9%氯化钠注射液）、 阳性对照组（10mg/ml卵白蛋白）、替加环素高剂量组（1.5 mg/ml）.替加环素低剂量组（0.

8、5mg/nil） 4组大鼠分别腹腔 注射相应药物1 ml/只，同时腹腔注射弗氏（完全/不完全） 佐剂0.2 ml/只（首次注射使用弗氏完全佐剂，后两次注射 使用弗氏不完全佐剂），隔日注射1次，共3次。末次注射 后14 d,大鼠股动脉取血，分别收集4组的血液置于室温下, 析出血清，离心（3 000 r/min, 15 min）。在无菌条件下， 吸出抗血清，各组抗血清分别混匀，-20 °c冷冻保存。4）致敏方法：致敏前将每只大鼠背部从头部沿尾部方 向划分为3个区域，并用记号笔画一个直径为2 cm的圈作 为标记，靠近头部的区域为1：2稀释度区，中间的区域为 1 : 4稀释度区，靠近尾部的区

9、域为1 ： 8稀释度区。各组分 别于圈内皮内注射相应稀释度的抗血清0. 1 mlo激发方法： 致敏24 h后，阴性对照组（0.9%氯化钠注射液）、阳性对照 组（1 mg/ml卵白蛋白）、替加环素高剂量组（1.5 mg/ml）.替加环素低剂量组（0.5mg/ml） 4组大鼠，分别尾静脉注射 已加入伊文思蓝的相应药物1 ml/只进行激发。2. 3观察指标激发30 min后断头处死大鼠，剪取背部皮肤，分别测 量皮肤内层3个区域的蓝斑大小，直径大于5 mm者判为阳 性，不规则斑点的直径为长径与短径之和的1/2o将各蓝色 斑皮片剪下，剪碎，分别加入丙酮-0.9%氯化钠注射液（7 : 3） 混合液 5 m

10、l,浸泡 48 h,离心（2 000 r/min, 20 min）, 取上清液测吸光度（波长610 nm）o2.4数据处理采用fisher精确检验法统计，计量资料采用t检验统 计。p<0. 05表示具有显著性差异。3结果大鼠背部皮肤3个区域（1 : 2稀释度，1 ： 4稀释度，1 : 8 稀释度）的蓝斑观察结果见表lo阳性对照各稀释组大鼠蓝 斑直径均为阳性（p<0. 001）o注射用替加环素高、低剂量各 稀释组蓝斑直径均为阴性（p0. 001）。注射用替加环素对大 鼠未产生被动皮肤过敏反应。4讨论按照仿制药的注册申报要求，注射剂应进行临床前的过 敏性评价研究。药物的过敏反应中，发生

11、率最高的为i型变 态反应。豚鼠体内补体非常丰富，能最直观地反映i型变态 反应，因此豚鼠全身主动过敏试验常用于过敏性实验的评价 研究。但是豚鼠对抗生素的敏感性比小鼠高1 000倍，对青 霉素类、红霉素类、四环素类等抗生素特别敏感6,无论 给药剂量多大，给药途径如何，均可引起豚鼠发生小肠炎或 结肠炎而死亡。我们曾采用豚鼠主动过敏试验评价注射用替 加环素的过敏性，但注射用替加环素高、低剂量组豚鼠在致 敏期间均有死亡，解剖后发现均有肠胀气现象，导致评价无 法进行。本研究中被动皮肤过敏实验的实验动物采用大鼠，是因 为其对大多数实验药物都能够很好地耐受。实验方法为先在 弗氏佐剂的强化下制备抗药物的抗血清，

12、然后另选动物在皮 内注射抗血清，随后静脉注射药物和染色剂，静脉注射的药 物与皮内预先注射的抗血清进行结合，导致皮内染色，比较 染色的强弱可以量化药物与抗血清的结合程度，从而反映药 物致敏性的强弱。在本研究中阳性组出现了明显的蓝斑，而 注射用替加环素高、低剂量组蓝斑的直径及吸光度与阴性组 之间的差异在统计学上并无显著性，大鼠被动皮肤过敏实验 结果显示：注射替加环素后未呈现明显的致敏性。参考文献1 卫生部合理用药专家委员会.中国医师药师临床用药指南m.重庆：重庆出版社，2009：4-6.2 陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学m.北京:人民卫生出版社，2007：83-86.3 蓝继奎，徐嘉红，徐晓玉.被动皮肤过敏试验影响因素初步研究j.中药药理与临床，2008,24 (2)：108-109.4 文